苏丹红论文.doc

苏丹红四号对小鼠肝脏的损害区煜君 李滢 刘泳烽 卢博喻指导老师：雷俊霞摘要目的：研究苏丹红四号对小鼠肝脏的损害。 方法：通过短期内持续大剂量用苏丹红四号喂养小鼠，再对小鼠肝功能的各项指标进行检测。 结果：小鼠gsh和alt均升高，而且有随灌胃剂量提高而提升的趋势，提示小鼠肝功能受到不同程度的损害。 结论：短期内大剂量食入sudan对小鼠肝脏有损害作用关键词苏丹红4号（sudan），肝功损害1 引言苏丹红系列是一种人工合成的红色染料，常作为一种工业染料，被广泛用于如溶剂、油、蜡、汽油的增色以及鞋、地板等增光方面，但近年发现常被非法商人加入食品中作为增色剂。其中，在辣椒酱、番茄酱中发现的苏丹红一号已被证实对小鼠肝脏、膀胱等脏器有致癌作用。而近日在“红心鸭蛋”中发现的苏丹红四号的毒性作用仍有争议。进入体内的苏丹红系列主要通过胃肠道微生物还原酶、肝和肝外组织微粒体和细胞质的还原酶进行代谢，在体内代谢成相应的胺类物质。本实验通过短期内持续用大剂量苏丹红四号喂养小鼠，再对小鼠肝功能的各项指标进行检测，以了解苏丹红四号是否会对小鼠肝脏造成损害，从而进一步推测其对人体的作用。 2 材料与方法1）材料实验对象：小鼠46只（随机），平均体重20g实验试剂及药品：苏丹红四号染料25g，alt、gsh检测相应试剂盒实验仪器：分光光度计，紫外分光光度计，胃饲管若干2）方法：短期内持续用大剂量苏丹红四号喂养小鼠，再对小鼠肝功能的各项指标进行检测取6只小鼠进行预实验。分别用0.125mg/ml 、0.25mg/ml sudan酒精溶液1ml各对3只小鼠进行灌胃，观察其耐受情况，以拟定实验剂量。将余下小鼠分4组，每组10只，其中1组为阴性对照组，其余3组为实验组。预实验中所用6只小鼠组用作阳性对照组。在实验期间，每天按下表剂量分别喂养小鼠500倍剂量组1000倍剂量组5000倍剂量组阴性剂量组阳性倍剂量组sudan质量（g）0.000250.000500.0025000.0050095%乙醇体积（ml）36溶液总量（ml）1000溶液浓度（mg/ml）2.501045.01042.510305.0103每日灌胃溶剂量（ml）0.51每日灌胃sudan质量（g）0.1250.2501.2505.0*剂量说明：1）据政府食品安全办公室公布红心鸭蛋检测结果，有毒红心鸭蛋sudan含量最高可达0.2-0.3mg/kg。已知一只鸭蛋约50克，设一个60kg正常人每天最多食入有毒鸭蛋5只，即正常人每日摄入sudan的最大可能量为1.25103 mg/kg。查资料知，sudani对小鼠的致癌量为人体的1001000倍。所以我们分别以人每日最大摄入sudan量的500，1000倍剂量喂养小鼠。另由于实验时间较短，我们补充加入较大剂量5000倍组，以弥补实验时间的不足。2）sudan溶于乙醚、乙醇、油脂、酚，不溶于水。由于乙醚、酚对机体有毒性作用，油脂不溶于水不能被稀释，所以我们选用乙醇作为sudan溶剂，但sudan在乙醇中溶解度较低，配制sudan溶液所需乙醇量较大。但是较大量的乙醇也会对小鼠肝脏造成损害，因此我们用等剂量乙醇喂养阴性对照组小鼠，以减低乙醇对实验结果的影响。3）我们还设置超大剂量（20000倍剂量）组，希望做出小鼠肝损伤的阳性模型，以作对照。实验结束时，用眼眶取血法取得血液样本进行肝功能检测，记录分析数据。3 实验结果：1）gsh、alt检测结果小鼠编号gsh结果判定alt结果判定500组1号317.7719-28.48599-5号538.5965+362.6617+7号390.4825+519.0177+1000组2号414.7193+308.8203+7号616.693+608.9367+9号506.2807+394.9609+5000组1号568.2193+624.752+5号546.6754+492.4942+阳性对照组2号560.1404+608.0183+3号611.307+483.3644+5号342.0088-24.56797-阴性对照组3号317.7719-287.1227+5号342.0088-39.75467-6号422.7982+404.9026+7号371.6316+392.7156+9号277.3772-58.71973+10号498.2018+290.0473+注：上述为连续8天用sudan溶液灌胃后存活的小鼠编号及其检测结果。其余小鼠死亡情况归纳如下：灌胃当场死亡和死后有明显打斗痕迹（被同组小鼠咬死）的小鼠有7只，其余在死亡前12日内均出现发应迟钝等明显不适症状，估计为药物毒性所致死亡。gsh360.4提示肝功能异常，alt40提示肝功能异常。2）归纳两组检测数据，可见各组小鼠gsh和alt均有升高，而且有随灌胃剂量提高而提升的趋势，提示小鼠肝功能受到不同程度的损害。实验讨论：1）sudan对小鼠肝脏有损害作用。 gsh（谷胱甘肽）、alt（谷丙转氨酶）为反映肝脏功能的指标，其检测数值越大于正常值，则肝功能损伤越严重。从实验结果可见，实验组小鼠gsh、alt两项指标均大于阴性组小鼠同项检测，说明实验组小鼠肝功能损伤程度较阴性对照组严重。同时，较低剂量组（500倍剂量组）两项指标平均数值均小于高剂量组（1000、5000与阳性组），提示低剂量组小鼠肝功能损害程度低于高剂量组小鼠。由此可知，sudan对小鼠肝脏有损害作用，而且其损害作用随浓度增加而增大。2）sudan溶液的可能损伤机制苏丹红iv(sudan)化学名称1-2-甲基-4-(2-甲基苯)偶氮苯基偶氮-2-萘酚(1-2-methyl-4-(2-methylphenyl)azophenylazo-2-naphthalenol)。进入体内的苏丹红系列主要通过胃肠道微生物还原酶、肝和肝外组织微粒体和细胞质的还原酶进行代谢，在体内代谢成相应的胺类物质。其中苏丹红iv在体内代谢可产生邻-氨基偶氮甲苯、4-氨基-2-甲苯基偶氮-2-萘酚、2,5-二氨基甲苯、1-氨基-2萘酚和邻-甲苯胺。实验中检得sudan对小鼠肝脏有损害作用，估计为这些代谢产物的毒性所致。3）阴性对照组检验结果分析及其意义阴性对照组部分小鼠的gsh、alt检测数值显示其肝功能受到损害，这是由于灌胃溶液中含有与sudan溶液等量的乙醇所致。但从实验结果可见，阴性对照组和实验组之间的检测指标仍有一定差距，说明其作为阴性对照组仍有参比意义。由于配置的sudan溶液不可避免的要加入较大量的乙醇，所以乙醇有可能参与sudan损伤肝脏的过程。其机制可能为：1 sudan和乙醇都对肝脏有损害作用，两者混合灌胃，使其作用相互叠加；2 sudan本身对正常肝脏无损害作用或损害作用较小，但肝脏受损时，其毒性作用较强。本实验中由于小鼠同时服用较大量乙醇，所以肝损伤现象较为严重。4）小鼠体质对实验结果的影响实验中小鼠的平均体重为20g。然而，实验中途出现不适现象甚至死亡的小鼠约80体重小于18g。同时，阳性组中的小鼠实验前体重均较实验组大，其在大剂量sudan灌胃的情况下存活率仍较高，而其中一只两项肝功能检测指标均正常。由此可推测，体质较强的小鼠对sudan毒性较为耐受，即sudan的毒性作用与小鼠体质有密切联系。5）实验中的可能影响因素由于连日的灌胃操作，令小鼠对其产生较大恐惧感，灌胃时强烈挣扎，因而不可避免对其内脏造成损伤，使其对sudan的毒性作用耐受力降低。由于同组小鼠中存在体质差异，所以体质较弱小鼠较难获得食物，导致小鼠间体质的差异更加明显，对sudan毒性的耐受差异也更明显。由于小鼠死亡情况超出预想范围，所以最后每组可供检测的小鼠数量较少，令实验结果的可靠程度受到一定影响。由于多数体弱的小鼠都在检测前死亡，而检测小鼠均对sudan耐受程度较高，所以肝脏受损程度亦可能较低，不能完全sudan对肝脏的毒性损害作用。6)