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icsb 备案号：gh中华人民共和国供销合作行业标准gh/t xxxxxxxxx蜂蜜中丙酮醛含量的测定高效液相色谱法determination of methylglyoxal in honey by high performance liquid chromatography methodxxxx - xx - xx发布xxxx - xx - xx实施中华全国供销合作总社发布gh/t 前言本标准遵循gb/t 1.1-2000 标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和gb/t20001.4-2001标准编写规则 第4部分：化学分析方法的编写规则。 本标准的附录a、b为资料性附录。本标准由由中华全国供销合作总社提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局.本标准主要起草人： igh/t xxxxxxxxx蜂蜜中丙酮醛含量的测定 高效液相色谱法1 范围本标准规定了蜂蜜中丙酮醛的高效液相色谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中丙酮醛含量的测定。本标准丙酮醛的检测低限为20 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。gb/t 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法。3 术语和定义3.1 蜂蜜 honey蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合后，经充分酿造而成的天然甜物质。3.2 丙酮醛 methylglyoxal也可被翻译为甲基乙二醛，是新西兰麦卢卡蜂蜜特有的抗菌活性物质。4 原理蜂蜜样品用水溶解后，与邻苯二胺进行衍生化反应，高效液相色谱进行测定，外标法定量。5 试剂和材料除另有规定，所用试剂均为分析纯。实验用水应符合gb/t 6682-2008中一级水的规定要求。5.1 乙腈：色谱纯。5.2 甲酸：色谱纯。5.3 丙酮醛标准品：40%水溶液。5.4 邻苯二胺：分析纯。5.5 衍生化试剂：称取邻苯二胺（5.4）0.6 g于100 ml容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，配制成6 g/l的邻苯二胺水溶液，用于衍生化反应。5.6 标准贮备液：精密称取丙酮醛标准品（5.3）100 mg于10 ml容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，配制成4 g/l的标准储备液。再准确吸取4 g/l的标准储备液100 l于10 ml容量瓶中，用水稀释并定容至刻度，得40 mg/l的标准储备液。两种浓度的标准储备液均于4冰箱保存。5.7 标准工作溶液：临用前吸取适量40 mg/l和4 g/l标准贮备液（5.6），用水稀释成含丙酮醛2.0 mg/l、4.0 mg/l、10.0 mg/l、20.0 mg/l、40.0 mg/l、100.0 mg/l六个浓度，现配现用。5.8 滤膜：有机相0.22 m。6 仪器和设备6.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器。6.2 分析天平：感量分别为0.1 mg和0.01g。6.3 涡旋仪。7 样品的取样及预处理取蜂蜜代表样品200 g，未结晶样品搅拌均匀，有结晶析出的样品可将样品瓶盖好后，置于不超过60的水浴中温热，待样品全部溶化后搅匀，迅速冷却至室温，在溶化时需注意防止水分挥发。制备好的试样装入洁净容器内，密封，标明标记。在制样过程中，应防止样品污染或发生残留含量变化，于0 4 保存。8 试验方法8.1 供试样品溶液的制备称取1 g蜂蜜溶于10 ml水中，取1 ml该蜂蜜水溶液与1 ml衍生化试剂（5.5）混匀，在室温、避光条件下进行衍生化反应8 h以上，过0.22 m滤膜后进样分析。8.2 色谱条件色谱柱：kromasil c18, 柱长150mm, 内径4.6mm, 填料粒径5m; 或性能相当的色谱柱。流动相：乙腈0.1%甲酸水溶液（3:7, v/v），等度洗脱；流速：1.0 ml/min；柱温：30 ；检测波长：318 nm；进样量：10 l8.3 高效液相色谱测定丙酮醛标准工作溶液（5.7）在高效液相色谱设定条件下分别进样，以丙酮醛衍生化产物的色谱峰面积为纵坐标、工作溶液浓度（g/ml）为横坐标，绘制6点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中丙酮醛衍生化产物的响应值均在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件下，溶剂空白、丙酮醛标准工作溶液、麦卢卡蜂蜜以及基质加标样品的色谱图见附录a图a.1。8.4 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤（8.1-8.3）进行。8.5 结果计算结果按式（1）进行计算：.(1)式中：xi试样中丙酮醛的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；ci由标准曲线计算所得样液中丙酮醛的浓度，单位为微克每毫升（g/ml）；coi由标准曲线计算所得空白试验中丙酮醛的浓度，单位为微克每毫升（g/ml）；v试样最终定容体积，单位为毫升（ml）；f稀释倍数，本实验方法为20；m样品质量，单位为克（g）。9 检测低限、回收率和精密度9.1 检测低限本标准检测低限：20 mg/kg9.2 回收率和相对标准偏差丙酮醛回收率和相对标准偏差数据见附录b表b.1。附录 a(资料性附录)图a.1 溶剂空白、丙酮醛标准工作溶液（10 g/ml）、麦卢卡蜂蜜和基质加标样品（100 mg/kg）的高效液相色谱图附录 b(资料性附录)表b.1 丙酮醛回收率和相对标准偏差数据（n=5）本底值 (mg/kg)加标量 (mg/kg)501002001170.0209.1251.4339.02170.7210.1249.1339.53170.621