血清胆碱酯酶测定标准操作规程.doc

.血清胆碱酯酶测定标准操作规程1 检验申请 单独检验项目申请：血清丁酰硫代胆碱法碱酯酶测定(缩写ChE)，组合项目申请：血生化中肝功能测定。临床医生根据需要提出检验申请。2 标本采集与处理2.1 标本采集2.1.1 常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。或采用含分离胶的真空采血管。2.1.2 检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。2.1.3 急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。2.1.4 标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。专人负责标本的接收并记录标本的状态，对不合格标本予以拒收。2.1.5 下列标本为不合格标本2.1.5.1 标本量不足：少于0.3ml的全血标本，或少于0.1ml的血清或血浆。2.1.5.2 对反应吸光度有干扰的标本，包括严重溶血、严重浑浊的标本。2.1.5.3 无法确认标本与申请单对应关系的。2.1.5.4 其他如标识涂改、标本试管破裂等。2.2 标本保存2.2.1 接收标本后在30min内将标本离心分离出血清。2.2.2 标本保存时间：室温（1525）下可稳定24h，普通冰箱中（28）稳定7天。-20保存稳定6个月。为避免标本中水分挥发使血清浓缩，对保存时间超过1天的标本均加塞密闭或覆盖湿巾。2.2.3 已完成测试的标本保持完整的识别号，置48冰箱内保存7天。2.3 标本采集的注意事项2.3.1 采血前使受检者保持平静、松弛、避免剧烈活动，和12h以上禁食空腹状态。2.3.2 可以使用EDTA、枸橼酸盐、草酸盐抗凝的血液标本，但肝素抗凝剂可引起反应液混浊。3 方法原理Cholinsterase Butyrylthiocholineiodide+H20thiocholine+butyrate,Thiocholine+DTNB2-nitro-5mercaptobenzoate,通过测定有色产物480nm处吸光度的变化速率，求得血清中胆碱酯酶的活性。4 试剂及其他用品4.1 试剂盒名称：胆碱酯酶试剂盒，由北京利德曼生化技术有限公司出品。4.2 试剂盒保存：未启封试剂盒在28保存，可储存至失效期。启封使用的试剂置仪器试剂仓冰箱内稳定14天。开盖后避免污染。 4.3 试剂盒准备：液态双试剂型，即开即用，无特殊准备。4.4 试剂盒主要成分：R1：磷酸盐缓冲液(pH 7.6) 20.0 mmol/L，5,5-二硫双亚硝基苯甲酸 0.25 mol/L；R2：丁酰硫代胆碱 6.0 mmol/L。含有稳定剂与保护剂。5 校准品与校准模式 校准品：不使用校准品，以2-硝基-5-巯基苯甲酸的双波长（480/660 nm）毫摩尔消光系数计算Che活性。6 质控品与室内质控规则6.1 质控品采用由Beckman-Coulter公司提供的两个不同水平未定值质控血清。6.2 质控液重建方法：液态质控血清，即开即用，无需特殊准备。6.3 质控品测定：在每一批标本中测定两个水平质控血清各一次。6.4 质控规则：采用Westgard多规则质控规则，由计算机程序进行检索与判断。7 适用仪器适用AEROSET和C16000全自动生化分析仪器。8 标本检测步骤装载试剂 进行校准 进行质控 输入标本检测项目 加载标本 标本测定 结果复核 报告。9 主要分析参数参见说明书。10 结果计算ChE(U/L)A/minK A/min(VT /Vs l 103)式中A/min即单位时间中吸光度增高的值，VT为总反应体积ml（试剂总量标本量），Vs为标本体积ml，l为比色皿光径cm，为pNP的410/670nm波长的毫摩尔消光系数。K值即因子，本法中K值为14852。仪器根据此公式自动给出每个标本测定结果。11 检验结果的报告及范围11.1 结果的报告11.1.1 结果经审核后，确认准确无误后发出报告。11.1.2 报告单上标明结果的计量单位、参考区间、报告日期、时间、操作者和审核者签名，并有与申请单相同的医学信息。11.1.3 如收到标本的质量可能对测定结果有影响的也在报告单上指出。11.2报告范围： 018000U/L，超过此范围的结果报告时必须附有证明该结果准确可靠的文字说明，例如：系根据标本稀释后重复测定的结果。12 操作性能12.1 精密度：批内CV5.0%，批间CV8.0%。12.2 线性范围：018000U/L。12.3 方法的有限性及干扰因素：胆红素浓度40/L，血红蛋白浓度50/L，甘油三酯浓度28.5mmol/L时，无明显干扰。13 参考值及医学决定水平 参考值 450013000U/L 14 临床意义14.1 CHE主要由肝脏合成并且和白蛋白的合成代谢相平行，所以在肝炎、肝硬化及肝肿瘤时CHE活性常下降，且降低程度与肝病病情相一致，可作为肝功能评价的指标之一，用于判定肝脏的蛋白合成功能及估计病情预后。14.2 CHE与其它肝功能指标联合测定有助于肝功能的准确评价。14.3 有机磷中毒时，CHE活性显著下降，故可用于有机磷中毒的诊断及预后估计。14.4 能水解乙酰胆碱的酶有两类一类是乙酰胆碱酯酶，亦称真胆碱酯酶或胆碱酯酶，真胆碱酯酶主要存在于红细胞、肺、脾、神经末梢及大脑灰质，它能水解神经末梢释放的乙酰胆碱。另一类胆碱酯酶是酰基胆碱酰基水解酶，通常称之为假胆碱酯酶、苯甲酰基胆碱酯酶或胆碱酯酶。尽管此酶存在于肝、脾、心、大脑白质及血清中，但其生物学功能不明。通常测定的是血清中胆碱酯酶即胆碱酯酶。两类胆碱酯酶均可被新斯的明及毒扁豆碱竞争性抑制，也可被某些有机磷化合物不可逆抑制。此外，两类胆碱酯酶还可被吗啡、奎宁、胆盐、柠檬酸、氟化物及硼酸盐所抑制。15 结果审核以及分析与相关项目的联系15.1 由资深专业人员负责检验结果的审核。15.2 认真审核每一个测定结果，审核者对发出报告结果的准确性和可靠性负责，并在报告单的审核者处签名。15.3 相关项目：审核与肝功能组合中其他项目的关系。如出现与临床不符甚至相悖的情况，应分析与查找原因。16 威胁生命的“紧急值”及报告规定通常无威胁生命的“紧急值”。17 有关引用文件17.1 Abbott自动生化分析仪仪器标准操作规程。17.2生