降钙素原上转发光免疫层析定量检测方法的建立（精品论文） .pdf

主堡捡验医堂苤查垫 至 旦筮 鲞筮 趟坚 i 垦生翌型 坠 翌 垡 兰 盟 降钙素原上转发光免疫层析定量 检测方法的建立 李鲁平于洋谷海峰闵微赵焕生郭兆彪杨瑞馥周蕾 降钙素原 p r o c a l c i t o n i n p c t 以其高灵敏度 高 诊断特异性以及持续稳定的特点作为脓毒症诊断指 标之一1 1 3 1 2 0 0 9 年j a m a 文章报道基于p c t 为指 导可以减少抗生素使用1 4 l 目前p c t 的临床检测 方法主要有半定量胶体金比色法 电化学发光法和 酶联免疫荧光法 此3 种方法各有缺陷 均无法满足 急诊科 重症监护室等对患者体征状况进行快速 及 时的评价监测的需求 本研究将p c t 与即时检验 p o i n to fc a r et e s t i n g p o c t 的概念结合 建立一种 上转发光免疫层析技术 u p c o n v e r t i n gp h o s p h o r t e c h n o l o g yb a s e dl a t e r a lf l o wa s s a y u p t l f 快速定量 检测p c t 并对其性能进行了系统评价 并以罗氏电 化学发光法 e l e c s y sb r a h m sp c t 做为参比试剂 进行了临床验证 一 材料与方法 1 临床标本收集 收集2 0 1 2 年5 月至7 月 沈 阳市第六人民医院1 7 4 例疑似细菌感染患者血清标 本 其中男1 0 0 例 女7 4 例 年龄l 8 7 岁 平均年 龄4 5 岁 遵循知情同意的原则 所有患者均同意并 签署知情同意书 符合伦理委员会相关规定 2 试剂与仪器 p c t 标记抗体和包被抗体购自 北新化成 北京 生物技术有限公司 硝酸纤维素 膜 玻璃纤维 吸水纸 黏性底衬均购自m i l l i p o r e 公 司 生化试剂购白北京化学试剂公司 p c t 标准品 来源于罗氏公司 u 阴一3 a 上转发光免疫分析仪为 北京热景生物技术有限公司在售产品 罗氏e l e c s y s b r a h m sp c t 定量检测系统为沈5 e t 市第六人民医 d o i 1 0 3 7 6 0 e m a j i s s n 1 0 0 9 9 1 5 8 2 0 1 4 0 2 0 l 7 基金项目 国家自然科学基金资助项口 8 1 0 0 0 7 7 4 艾滋病和 病毒性肝炎等蘑大传染病防治 周家科技重大号项 2 0 11 z x l 0 0 0 4 0 0 1 2 0 1 2 z x l 0 0 4 8 0 1 0 0 2 0 0 4 2 0 1 2 z x l 0 0 4 8 0 1 0 0 4 0 1 5 作者单位 1 1 0 0 0 6 沈阳市第六人民医院检验科 李鲁平 于洋 谷海峰 北京热景生物技术有限公司 闵微 赵焕生 军事医学科 学院微生物流行病研究所 郭兆彪 杨瑞馥 周蕾 通信作者 周蕾 电子信箱 a m m s z h o u l e i y a h o o j m m 短篇论著 院检验科现运行设备 3 p c t u p t l f 方法原理 u p t l f 将具有独特 光学特性的上转发光 u p c o n v e r t i n gp h o s p h o r u c p 颗粒 以红外光区 7 8 0h e 激发 而发射可见光 4 7 5 6 7 0n m 即能量上转 进行修饰和活化 5 引 p c t u 阳一l f 试纸包括 样品垫 结合垫 分析膜 吸 水垫及黏性底衬 其中分析膜上设置有由p c t 包被 单抗构成的检测带t 以及由羊抗鼠i g g 构成的质控 带c 结合垫中固定有u c p p c t 标记单抗结合物 将液体标本添加在样品垫对应的加样孔中后 液体 经由样品垫 结合垫 分析膜向吸水垫的方向毛细层 析 在此过程中通过特异的免疫识别反应将u c p 颗 粒固定在t 带与c 带上 而t 带上固定u c p 颗粒的 数量与标本中p c t 浓度呈正比 以上转发光免疫分 析仪对试纸上u c p 颗粒产生的光学信号进行激发 收集 处理便可获得标本中p c t 浓度的精确数 值 1 i 4 p c t u 阴 l f 试纸制备 u c p 颗粒的修饰 活 化及试纸条的制备按前期报道的方法 叫进行 5 p c t u 门 l f 标准曲线建立 系列浓度标准品 为0 1 0 5 2 0 1 0 0 和5 0 0 斗g l 的p c t 进行检 测 以l o g t c 均值 作为x l o g 浓度 作为y 拟 合标准曲线方程 6 p c t up 1 l f 性能评价 1 分析灵敏度 选 择各种方法都检测不到p c t 数据的健康人混合血 清作为空白样品 对其连续测定1 0d 记录t c 值 按9 5 可信限计算其均值 元 及标准差 s 以元 2 s 的反应量计算出相应的浓度 即为该试剂盒的分 析灵敏度 2 2 功能灵敏度 用空白样品液对 p c t 浓度为5 g l 的新鲜混合血清作系列稀释 配 制成x 1 x 8 一系列低浓度样本 其理论浓度分别 为0 0 0 5 0 0 1 0 0 2 0 0 4 0 0 6 0 0 8 0 1 0 和 0 1 2 g l 连续测定x 1 x 8 系列低浓度血清样本 1 0d 每天各测一批 每批测2 次 计算各份样本t c 的均值 戈 标准差 s 和变异系数 c o e f f i c i e n to f 万方数据 史堡捡箜医堂苤查 笙 旦笙 鲞笙 塑垦 i 业堂型 尘型 型 丛 v a r i a t i o n c v 以2 0 c v 所对应的浓度为该检测系 统的功能灵敏度 1 2 3 精密度与准确度 偏倚 抽取2 个批次的成品试剂盒 分别对浓度为0 2 5 0 5 2 0 和5 0 0t x g l 的p c t 质控品进行检测 每 个浓度重复3 0 次 获得p c t 定量结果 计算批内和 批间各浓度检测结果的c v 并统计各浓度测定结果 偏倚情况 4 稳定性 将成品试剂盒置于阴凉处 密封保存 样品稀释液置于2 8c c 保存 1 8 个月内 每个月分别检测浓度为0 2 5 0 5 2 0 和5 0 0 恤g l 的p c t 质控品 每个浓度重复1 0 次 测定结果位于 质控品浓度 2 0 以内认为稳定性良好 5 临 床验证 用p c t u p t l f 成品试剂盒检测1 7 4 份临 床血清标本 与罗氏e l e c s y sb r a h m s 系统的p c t 定量检测结果进行比较 计算两种方法测定结果的 相关性 7 统计学分析 应用s p s s l 7 0 统计学软件进行 t 检验 秩和检验及一元回归分析 二 结果 1 分析灵敏度 经标准品浓度测定获得标准曲 线y 1 5 4 8 x 0 8 3 6 相关系数r 为0 9 9 6 空白样 品x 0 与系列低浓度样品检测1 0 次的t c 平均值 及标准差统计之后 计算9 5 可能性的检测低限 空白面 2 s 0 1 1 4 2 0 0 9 0 0 2 9 4 检测低限 的t c 值相当于实验样品 2 0 0 l 斗g l 的t c 值 故本试剂盒检测p c t 的分析灵敏度为0 o l l 0 2 9 4 0 2 9 3 0 叭 g l 2 功能灵敏度 分别计算x 1 x 8 低浓度血清 样品t c 值的平均值 标准差和c v c y 2 0 时所 对应的浓度点即为该试剂盒的功能灵敏度 样品x 1 x 8 的c v 值分别为4 8 5 2 4 9 2 4 5 2 3 6 2 2 4 2 1 1 2 0 2 1 8 9 其中c v 最 接近2 0 的样品所对应的浓度为0 1i x g l 即该方 法的功能灵敏度为0 1 g l 3 p c t u p r r l f 精密度与准确度 批内与批问各 浓度分别重复测定3 0 次的结果均符合正态分布 p 0 0 5 高中低各浓度的精密度c v 0 0 5 9 5 置信区间包含0 4 p c t u 门 l f 稳定性 以1 0 次测定浓度位于 质控品浓度 2 0 的范围内作为稳定性良好的 标准 则浓度为0 2 5 0 5 2 0 和5 0 0t x g l 的质控 品所对应的允许浓度区间范围为 0 2 0 0 3 0 0 4 0 6 1 8 2 2 4 0 6 0 g l 1 8 个月内任意 监测时间点的任意质控浓度均未超m 许可范围 即 p c t u 盯一l f 试剂盒有效期不低于1 8 个月 5 临床验证 将罗氏e l e s y sb r a h m s 与p c t u 门一l f 两种方法获得的1 7 4 份标本的浓度测定结 果进行相关性分析 二者之间有良好的线性关系 y 0 9 8 5 x 0 0 0 4 r 二 0 9 9 8 p 0 0 1 i 讨论 p c t 所具有的疾病特异性 进程相关性 指征时 效性 代谢稳定性使其有别于经典的炎症早期因子 i l 一6 i l 一1 0 t n f 等 与传统的诊断指标 如白细胞 计数 血沉 c 反应蛋白 成为脓毒血症早期预测 进程监控 疗效评估的优良体征指标 并具有进一步 拓展辅助抗生素管理的广阔应用前景 此外 p c t 在 f l l 流感染 成人下呼吸道感染等诊断方面同样具 有一定的应用价值 本研究首次将纳米发光材料 免疫层析 生物传 感与p c t 的p o c t 定量检测有机结合 建立p c t u p t l f 方法 经系统评价 p c t u 门 l f 试剂盒的 定量检测线性范围为0 0 1 5 0 0 0 g l 分析灵敏 度为0 0 1 斗 l 功能灵敏度为0 1 0 斗 l 批量生 产的精密度和准确性良好 室温保存效期可达1 8 个 月 经临床验证 与罗氏e l e c s y sb r a h m s 方法相比 具有较好的定量结果相关性 r 2 0 9 9 8 p 0 0 5 p c t u p t l f 全定量检测方法 使用便携 自动 自供电的小设备 在患者身边无需复杂样本处理即 可在2 0r a i n 内获得p c t 的精确定量结果 即其检测 性能与大型进口设备可媲及 而操作性能满足 p o c t 要求 由此 通过p c t u p t l f 方法实现了 p c t 检测项目与p o c t 检测实施观念的有效结合 将p c t 检测由检验科 中心实验室进一步推广到急 诊科 重症监护室 基层社区医疗机构等最为靠近患 者的一级响应场所 从而一方面大幅提升了对患者 的救治水平 另一方面降低了患者的医疗负担 参考文献 悦 堇 她 觚 一魄 一圳 洲一一 订岫 忆卜 僵m l d n 乳 m j m 豳 一州 她 岫m 一 一 一 一一 一 d州 一b扎d蜘 m 一 瑚 讯 嚣川 誓黑嘶m 一一 一 一一一一一一 一 一 一毗 一 一 一一 一 一 一一一一 一 一 一 一一 茎 一一 万方数据 1 4 6 尘堡捡验医堂盘查 生 旦箜 鲞箜 塑 也 垦坐丛鲤 型 翌 垒 z 盟 5 h a m p lj h a l lm m u f t in a e ta 1 u p e o n v e r t i n g p h o s p h o r r e p o r t e r si ni m m u n o c h m m a t o g r a p h j a s s a y s j a n a lb i o c h e m 2 0 0 1 2 8 8 1 7 6 1 8 7 6 k a m o sk w n i e d b a l ar s b u r t o n 儿 e ta 1 u p c o n v e r t i n g r e p o r t e r sf o rb i o l o g i c a la n do t h e ra s s a y s u n i t e ds t a t e s 6 3 1 2 9 1 4 p 2 0 0 1 1 1 0 6 7 n i e d b a l ar s f e i n d th k a r d o sk e ta 1 d e t e c t i o no fa n a l y t e sb y i m m u n o a s s a yu s i n gu p c o n v e r t i n gp h o s p h o rt e e h n o l o g y j a n a l b i o c h e m 2 0 0 1 2 9 3 2 2 3 0 8 c o r s t j e n sp l v a nl i e s h o u tl z u i d e r w i j km e ta 1 u p c o n v e r t i n g p h o s p h o rt e c h n o l o g y b a s e dl a t e r a l f l o w a s s a y f i rd e t e c t i o no f s c h i s t o s o m ac i r c u l a t i n ga n o d i c a n t i g e n i n s e r u m j jc l i n m i c r o b i o l 2 0 0 8 4 6 1 7 1 1 7 6 9 y a nz z h o ul z h a oy e ta 1 r a p i dq u a n t i t a t i v ed e t e c t i o no f y e r s i n i ap e s t i sb yl a t e r a l f l o wi m m u n o a s s a ya n du p 一 1 0 n v e r l i n g p h o s p h o rt e c h n o l o g y b a s e db i o s e n s o r j s e n sa c t u a t o r sb c h e m 2 0 0 6 1 1 9 6 5 6 6 6 3 f1 0 l il z h o ul y uy e ta 1 d e v e l o p m e n to fu p c o n v e r t i n g p h o s p h o r t e c h n o l o g y b a s e d l a t e r a l f l o w a s s a y f o r r a p i d l y q u a n t i t a t i v ed e t e c t i o no fh e p a t i t i sb s u f f a e ea n t i b o d y j d i a g n m i c r o b i o li n f e e td i s 2 0 0 9 6 3 1 6 5 1 7 2 1 1 q uq z h uz w a n gy e ta 1 r a p i da n dq u a n t i t a t i v ed e t e c t i o no f b r u c e l l ab yu p c o n v e r t i n gp h o s p h o rt e c h n o l o g y b a s e dl a t e r a l f l o w a s s a y j jm i c r o b i o lm e t h o d s 2 0 0 9 7 9 1 2 1 1 2 3 1 2 徐伟文 体外诊断试剂研制常用技术指标之分析性能评估 j 分子诊断与治疗杂志 2 0 1 0 2 1 4 0 1 4 4 收稿日期 2 0 1 3 0 7 2 3 本文编辑 韩锟 临床分子诊断学 一书出版 由南京医科大学第一附属医院潘世扬教授主编的 临 床分子诊断学 一书 已于2 0 1 3 年1 1 月由人民卫生出版社 正式出版 本书为大1 6 开精装本 共2 0 0 余万字 彩图4 0 0 余幅 临床分子诊断学 由国家临床检验重点专科江苏省 人民医院 南京医科大学第一附属医院 检验学部主持 来 自国内4 0 多位活跃在一线的从事分子诊断 分子医学研究 和临床医学3 个方面的专家共同组成编写委员会 经反复讨 论 精心编著而成 全书内容分三篇 共5 0 章 基本原理及 技术篇 着重介绍分子诊断项目走向临床应用过程中所需经 历的参考区间建立 临床应用的评估和应用后的循证评价 可为学习和从事分子诊断的医务工作者打下良好基础理论 知识 也可为从事分子诊断转化研究的科研人员提供指导 在分子检测技术方面 除了介绍核酸扩增 电泳 生物大分子 标记等经典的分子检测技术外 本书还系统阐述了纳米 质 书评 谱 生物芯片等近年来开始在临床应用的新技术 为广大医 务工作者了解快速发展的分子诊断技术打开了一扇门 分 子标志物及其检测篇 集中介绍了近年来分子诊断标志物的 研究和应用成果 有已经在临床应用多年的标志物的再评 价 更有一些新的标志物的介绍 前景展望和价值评估 在分 子标志物基础研究和临床应用之间架起转化医学的桥梁 疾病分子诊断篇 立足临床常见疾病的分子诊断 以诊疗路 径为线索 系统阐述疾病的发病机制 临床表现 诊疗常规基 础 重点介绍了分子诊断的应用 有助于加强检验和临床之 间的相互了解 此书在全国各地新华书店有售 邮购可与人民卫生出 版社邮购部联系 购书热线 0 1 0 6 9 7 8 7 5 9 2 地址 北京市朝 阳区潘家园南里1 9 号 邮政编码 1 0 0 0 2 1 徐建 读者 作者 编者 中华检验医学杂志 获中国科协精品科技期刊工程项目资助 中华检验医学杂志 喜获2 0 1 3 年中国科协精品科技 期刊 程项目资助 这是本刊首次荣获此项殊荣 充分体现 了中国科协对本刊办刊成绩的肯定 中国科协设立精品科 技期刊工程项目旨在重点支持我国优秀科技期刊面向世界 参与国际学术交流 为国际同行所接纳和认同 逐步成长为 在同学科领域内的世界知名科技期刊 本刊通过专家评审 择优支持的方式脱颖而出 中国科协实施的精品期刊工程 项目 有力地促进了我国优秀科技期刊的发展建设 对更好 地发挥期刊品牌优势 整合医学信息资源起到了重要的推动 作用 本刊也将以此为动力 进一步发挥在我国检验医学学 术界的领军作用 再创佳绩 本刊编辑部 万方数据 降钙素原上转发光免疫层析定量检测方法的建立降钙素原上转发光免疫层析定量检测方法的建立 作者 李鲁平 于洋 谷海峰 闵微 赵焕生 郭兆彪 杨瑞馥 周蕾 作者单位 李鲁平 于洋 谷海峰 110006 沈阳市第六人民医院检验科 闵微 赵焕生 北京热景生物技术有限公司 郭兆彪 杨瑞馥 周蕾 军事医学科学院微生物流行病研究所 刊名 中华检验医学杂志 英文刊名 chinese journal of laboratory medicine 年 卷 期 2014 37 2 参考文献 12条 参考文献 12条 1 barati m alinejad f bahar ma comparison of wbc esr crp and pct serum levels in septic and non septic burn cases 2008 2 jekarl dw lee sy lee j procalcitonin as a diagnostic marker and il 6 as a prognostic marker for sepsis 2013 3 levy mm fink mp marshall jc 2001 sccm esicm accp ats sis international sepsis definitions conference 2003 4 philipp schuetz mirjam christ crain robert thomann effect of procalcitonin based guidelines vs standard guidelines on antibiotic use in lower respiratory tract infections the prohosp randomized controlled trial 2009 5 hampl j hall m mufti na upconverting phosphor reporters in immunochromatographic assa