人乳腺癌组织中p53基因单核苷酸多态性位点变异的研究.docx

588主堡塞堕处魁盘查垫!q笙旦筮12鲞蔓i魈曼b也垦翌!玛：丛型垫!qt!尘：!z丛!：墨实验研究人乳腺癌组织中p53基因单核苷酸多态性 位点变异的研究王平任玮 张玉和赵亮 张玉宝【摘要】 目的观察乳腺癌患者p53基因的单核苷酸多态性位点(snps)变异，探讨p53基因 在乳腺癌癌基因学中的意义。方法选取p53基因位于外显子及内含子的共3对引物，利用sscp (单链多肽构象)分析方法对30例乳腺癌样品进行分析及dna测序。结果在检测的30例乳腺癌 组织样品中，p53基因在第一内含子和第七内含子中共有4个碱基替换被检测出，其中3个为hapmap (hapolotype map project，国际单倍型图谱计划)中已公布的snp位点，另外1个从未被确认。在p53 第7内含子位置处发现一高突变率(20)的ga(玛12947788)类型基因替换，在其上游20个碱基 位置处存在另一已知高突变率的snp位点ac(rsl2951053)，此两者联合出现，在所检测的30例 乳腺癌组织样本中共发现6例，占所检测标本的20。结论p53基因的snps分析对乳腺癌的早 期发现、治疗和预后有一定意义。【关键词】乳腺癌；p53基因；snpsp53 gene mutation in henmn breast caner恤su鹤wrag!pf增。，rewei，z黝旧地一|ile，z黝d1血ng，幻删vg地bao。department ofinterventive radoogy，affiliated tumor hospital，harbin medical【，妇e巧毋，har6in 150040，chinacorresponding,author：z陋lb yhbao【abstract】 objec6ve to investigate the possible implication of the substitution at single nucleo- tide polymorphisms(snps 1 sites in 1353 genes in the carcinogenesis of breast callcermethods the snps irt p53 gene regions from 30 patients with breast cancer were analyzed by polymerase chain reactionsin- sic strand eonformational polymorphism(pcr-sscp)and subsequent dna sequencingresults 1he totally4 nucleotide substittution sites at tle regions of intron i and intron 7 of p53 detected were found in 30 cases 0f breat cancerwhich involved 3 published snps sites and l uncharacterized siteamong these substitutionsa ga(rsl294_7788)mutation which occurred at the intron 7 was coupled with the cystidine nucleotide at a snps site a屺(rsl2951053)of 20th nucleotide at its upstream，which occupied 20of the breast cancer patients，implicaing the sigrlificance of the coupling of these two sites in the carcinogenesis of the breast cancercondusion the dna substitution analysis at the snps sites of gs3 may selve ag a helpful tool forthe early diagnosis of breast cancer【key words】breast carcinoma；p53 gene；snps乳腺癌的发生、发展是基因表达调控改变的结材料与方法 果 ，研究证实p53基因的突变使肿瘤具有更加侵袭、转移、恶性的特点【2】。我们应用聚合酶链反应-单 1一般资料：组织标本由哈尔滨医科大学附属肿 链构象多态性(pcrsscp)技术联合测序技术观察30 瘤医院提供，所有乳腺癌样本随机抽取自2005年9月 例乳腺癌患者p53基因部分单核苷酸多态性位点 至2007年2月经病理证实为浸润性导管癌的样本，共(snps)的变异，探讨乳腺癌的发病原因及可能的基因30例。正常对照样本为我院经手术切除病理证实为 诊断及预后。 乳腺增生的样本，共2例。根据美国国立生物信息中 心(ncbi)上已公布的snps，选择p53基因含有尽量多snps的扩增片段并使用c,enerunner软件设计引物并在ncbi上进行比对证明其特异性且尽量使所设计 doi：lo3760c咖jissn100l-9030201005016之扩增产物具有较高的纯度，引物序列见表l。 基金项目：黑龙江省科学技术厅资助项目(20010101)2pcrsscp和dna测序：各引物的扩增产物用 作者单位：150040哈尔滨医科大学附属肿瘤医院介入科(王平)， 琼脂糖凝胶检测纯度并切胶进行纯化。纯化产物进行腹部外科(赵亮、张玉宝)；哈尔滨血液病肿瘤研究所肿瘤内科(任玮)；pcrsscp分析，具体步骤参照文献3。序列分析：黑龙江省鸡西市杏花矿医院外科(张玉和)通信作者：张玉宝 将pcr产物用dna回收试剂盒回收纯化，定量后应万方数据主堡塞墅!e型盘查!q!q生!旦筮婴鲞箜!塑曼!也量盐墅强：丛型垫!q：!丛：!：堇589表1引物序列碱基替换率为333(130)。4统计学分析：结果显示实验组中m12951053位置 与欧洲人及北京汉族人差异有统计学意义，rsl2947788 位置与西班牙人及高加索人差异有统计学意义(p0。05)，rs2078486位置与北京汉族人、日本东京人及高加索人差异有统计学意义(p005，其余 、度内痔的治疗。也有在行pph术同 龄518岁。随机分成2组，对照组181p值均o05)，而观察组术后恢复快备受推荐，但该术式并不能完全替198例在传统混合痔外剥内扎术基础上，并发症更少，疗效优于对照组。 代传统手术。我们结合痔环形切除及混 采用皮瓣修复肛管外皮肤。三、讨论合痔外剥内扎术，合理将皮瓣用于环状痔2围手术期处理：所有病例嗣手术 痔是由于直肠肛管血液循环欠佳， 外剥内扎术。其内痔高位结扎，术后瘢痕 期处理原则相同，两组病例手术适应征 血液回流障碍引起静脉迂曲扩张形成的 收缩町使直肠下端黏膜一定程度向上回 禁忌征相同。术前8 h禁食，术前灌肠， 静脉团。目前比较认j的痔的发病机制 收；在痔最突出部位分别外痔剥离结扎， 术前安定10 nag肌肉注射。手术采用侧 有直肠肛管周围静脉回流障碍理论及肛 留下四处放射样切口，患者排便时肛门张 卧位，局麻或者鞍麻。术后每天换药1 垫下移学说 。肛垫位置恒定，位于截 力有效缓解，同时引流通畅；采用弧形切2次，大便后坐浴。术后服用缓泻剂保持 石位3、7、11点，齿线上方，肛垫充血肥 口，清除痔核及皮下结缔组织，排便时承 大便通畅，并同样抗炎治疗57 d。大下移导致内痔形成，stelzner称之为直受肛管的张力优于纵向切口的缝合，术后3手术方法：改良传统外剥内扎术 肠海绵体，向齿线下延伸，可出现外痔。 不易水肿；大部分伤口近似一期愈合，缩 式，以截石位3、7、11为中心内痔高位结 静脉反复充血引起黏膜和肛周皮肤赘 短病程；基本保留齿线及肛管皮肤，肛门 扎，根据齿状线下移及外痔脱出程度设 生。痔脱出不能自行还纳者是期痔， 形状完整，术后排便反射更易建立，更有 计皮瓣，1、5、7、11点处痔剥离后结扎， 一般认为期以上痔多数为混合痔，呈 利于防止肛门狭窄与肛门失禁。两组病11。1、15、57、711之间采用与肛环绕肛门一周者称为环状痔。齿状线、 例均获治愈，治疗组术后并发症少，患者 缘平行之弧形切口，剥离痔核之静脉团肛管区有高分化的感觉神经末梢，为肛 所受的痛苦轻。块，清除皮下结缔组织，整理出只含皮肤门反射中重要的感受装置，肛管皮肤是参考文献的皮瓣，剪除多余部分，两侧皮瓣无张力一种特殊保护性上皮，具有抗摩擦和抗缝合同时不留死腔。 损伤的特性，富有弹性，能随内外括约肌i张东铭，主编，大肠肛门局部解剖与手 术学合肥：安徽科学技术出版社，收缩、扩张而发挥弹性