【人教版】选修一生物：2.2《土壤中分解尿素的细菌的分离与计数》ppt课件.pptVIP

成才之路 生物 路漫漫其修远兮吾将上下而求索 人教版 选修1 微生物的培养与应用 专题二 课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题二 1 理解培养基的选择作用 2 利用选择培养基从土壤中分离分解尿素的细菌 3 利用稀释涂布平板法计数细菌的数目 4 对培养结果能进行分析与评价 一 自然界中目的菌株的筛选1 依据 根据它对 的要求 到相应的环境中去寻找 2 实例 PCR技术过程中用到的耐高温的 就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离到的 二 实验室中目的菌株的筛选人为提供有利于 生长的条件 包括 等 同时 或 其他微生物生长 生存环境 DNA聚合酶 目的菌株 营养 温度 pH 抑制 阻止 三 选择培养基指在微生物学中 允许 种类的微生物生长 同时 或 其他种类微生物生长的培养基 四 研究思路1 统计菌落数目 1 常用方法 法 统计依据a 当样品的 足够高时 培养基表面生长的一个菌落来源于样品稀释液中的一个 b 通过统计平板上的菌落来推测样品中大约含有的活菌数 特定 抑制 阻止 稀释涂布平板 稀释度 活菌 注意事项 为保证结果准确 一般选择菌落数在 的平板进行计数 2 其他方法 利用 直接计数 2 设置对照目的是排除实验组中 对实验结果的影响 提高实验结果的 30 300 显微镜 非测试因素 可信度 土壤微生物种类最多 数量最大的原因是什么 土壤中营养物质含量丰富 环境条件适宜等 教材P22 本课题使用的培养基配方 分析1 在该培养基配方中 为微生物的生长提供碳源的是葡萄糖 提供氮源的是尿素 2 该培养基对微生物具有选择作用 其选择机制是只有能够以尿素作为氮源的微生物才能在该培养基上生长 教材P22 旁栏思考题 统计某一稀释度下平板上的菌落数 最好能统计3个平板 计算出平板菌落数的平均值 然后按每克样品中的菌株数 C V M 其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积 mL M代表稀释倍数 进行计算 教材P22 统计菌落数目 实例分析第一位同学只涂布了一个平板 没有设置重复组 因此结果不具有说服力 第二位同学考虑到设置重复组的问题 涂布了3个平板 但是 其中1个平板的计数结果与另2个相差太远 说明在操作过程中可能出现了错误 因此 不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值 教材P24 旁栏思考题 这是因为土壤中各类微生物的数量 单位 株 kg 是不同的 例如在干旱土壤中的上层样本中 好氧及兼性厌氧细菌约为2185万 放线菌约为477万 霉菌约为23 1万 因此 为获得不同类型的微生物 就需要按不同的稀释度进行分离 同时还应当有针对性地提供选择培养的条件 不同 103 107倍稀释液 1 概念 在微生物学中 将允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 称作选择培养基 选择培养基相关问题分析 2 原理 根据不同微生物的特殊营养要求或其对某化学 物理因素的抗性不同而制备培养基 例如 用培养基选择能分解尿素的微生物的原理培养基的氮源为尿素 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 以尿素作为氮源 缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素 缺乏氮源 而不能生长 繁殖 所以用此培养基就能够选择出能分解尿素的微生物 3 方法 1 在培养基中加入某种化学物质 例如 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 加入高浓度的食盐可以得到金黄色葡萄球菌 这里的 加入 是在培养成分的基础上加入 2 改变培养基中的营养成分 例如 缺乏氮源时可以分离固氮微生物 石油作为唯一碳源时 可以分离出能消除石油污染的微生物 3 改变微生物的培养条件 例如 将培养基放在高温环境中培养可以得到耐高温的微生物 用来判断选择培养基是否起到了选择作用需要设置的对照是 A 未接种的选择培养基B 未接种的牛肉膏蛋白胨培养基C 接种了的牛肉膏蛋白胨培养基D 接种了的选择培养基 解析 将菌液稀释相同的倍数 在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目 因此 牛肉膏蛋白胨培养基作为对照 对照遵循的原则是单一变量原则 答案 C 下面是某一课题将用到的培养基配方 请根据下表回答下面的问题 1 在该培养基的配方中 为微生物提供碳源的是 提供氮源的是 2 绝大多数微生物能利用 但是 只有能合成脲酶的微生物才能分解 3 分析该培养基的配方 该培养基对微生物是否具有选择作用 如果具有 又是如何进行选择的 答案 1 葡萄糖尿素 2 葡萄糖尿素 3 具有 以尿素为唯一氮源的培养基可以分离到产生脲酶的微生物 即分解尿素的微生物 解析 碳源是提供碳元素的物质 氮源是提供氮元素的物质 所以碳源是葡萄糖 氮源是尿素 绝大多数微生物都能利用葡萄糖 但是 只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素 所以这种培养基对微生物有选择作用 选择的原则是只有能够利用尿素的微生物才能够生长 稀释涂布平板法常用来统计活菌数1 原理当样品的稀释度足够高时 培养基表面生长的一个菌落 来源于样品稀释液中的一个活菌 通过统计平板上的菌落数 就能推测出样品中大约有多少活菌 细菌数目的计数 2 操作设置对照组 增强实验的说服力与准确性 将待测样品经一系列10倍稀释 然后选择三个稀释度的菌液 分别取0 1mL接种到已制备好的平板上 然后用无菌涂布器将菌液涂布于整个平板表面 放在适宜的温度下培养 计算菌落数 为使结果接近真实值 可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上 经涂布 培养 计算出菌落平均数 3 计数规则为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板进行计数 用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数 在对应稀释倍数为106的培养基中 得到以下几种统计结果 正确的是 A 涂布了一个平板 统计的菌落数是230B 涂布了两个平板 统计的菌落数是215和260 取平均值238C 涂布了三个平板 统计的菌落数分别是21 212和256 取平均值163D 涂布了三个平板 统计的菌落数分别是210 240和250 取平均值233 解析 在设计实验时 一定要涂布至少3个平板 作为重复组 才能增强实验的说服力与准确性 所以A B不正确 C项虽涂布了3个平板 但是 其中1个平板的计数结果与另两个相差太远 说明在操作过程中可能出现了错误 因此 不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值 答案 D 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时 通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数 原因是 A 平板上的一个菌落就是一个细菌B 菌落中的细菌数是固定的C 此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D 此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同 答案 C 解析 用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时 平板上的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌 但偶尔也能来自两个或以上细菌 所以此方法统计的菌数可能与活菌的实际数不相同 土壤取样从肥沃 湿润的土壤中 用无菌小铁铲铲去表层土 迅速取土壤并装入无菌信封密封 制备培养基准备选择培养基 以尿素为唯一氮源制备9个平板培养基 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数过程 样品的稀释在火焰旁称取土壤10g 放入盛有90mL无菌水的三角烧瓶中 振摇使土样与水充分混合 将菌分散 制成101倍土壤稀释液 用一支1mL无菌吸管从中吸取1mL土壤悬液注入盛有9mL无菌水试管中 吹吸三次 使充分混匀 制成102倍土壤稀释液 以此类推制成103 104 105 106倍土壤稀释液 培养观察将培养基平板倒置于30 37 温室中培养1 2天 每隔24h统计一次菌落数目 选取菌落数目稳定时的记录作为结果 菌落计数常用稀释涂布平板法 设计如下表格记录并计数 能够测定样品活菌数的方法是 A 稀释涂布平板法B 直接计数法C 重量法D 比浊法 解析 直接计数法是利用特定的细菌计数板 在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量 不能区分死菌与活菌 重量法是用于微生物测定的一种方法 有湿重和干重 测蛋白质和DNA含量反映细胞的物质量 比浊法是在一定范围内 菌的悬液中细胞浓度与浑浊度成正比 即与光密度成正比 菌越多 光密度越大 活菌在适宜培养基和良好生长条件下通过生长形成菌落 此法又称活菌计数法 答案 A 用做土壤分解尿素的细菌的分离与计数的培养基要严格 A 防腐B 消毒C 灭菌D 化疗 答案 C 解析 用来培养微生物的培养基均需灭菌 1 选择培养基 1 选择培养基的含义 在培养基中加入某种化学物质 以抑制不需要的微生物的生长 促进需要的微生物的生长 目的是从众多微生物中分离所需要的微生物 2 常见的选择培养基 加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌 加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌 无氮源培养基可以分离固氮微生物 石油是唯一碳源的培养基 可以达到分离出能消除石油污染的微生物的目的 将培养基放在高温环境中培养 分离耐高温的微生物 选择培养基的选择作用 寻找目的菌株应用了类比推理的思想 以热泉中寻找耐高温酶为思路指导 推及以尿素为唯一氮源环境中分离分解尿素的细菌 筛选微生物的方法是利用选择培养基进行选择培养 其实质就是应用了微生物特定的生存需求或差异 利用营养 光照 温度 pH 射线 抗生素等特殊条件 进行筛选目的微生物 2 稀释涂布平板法计数活菌 为了保证结果准确 一般选择菌落数在30 300的平板上进行计数 为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板中 经涂布 培养计算出菌落平均数 涂布平板法所选择的稀释度很重要 一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好 3 对照实验 1 对照实验 是指除了被测试条件之外 其他条件都相同的实验 其目的是对照实验组 排除任何其他可能的原因对实验结果产生影响 从而证明所测试的条件确实能引起某种结果 2 设置对照的主要目的排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的