木醋液初稿.doc

木醋液的制取、抑菌与抗氧化活性测定木醋液的制取、抑菌与抗氧化活性测定摘 要：本文以核桃壳和核桃枝为原料，采用干馏釜制取，分三个温度段收集，经静置、木炭粉处理，制得核桃壳木醋液。对其抗氧化活性和抑菌活性进行了研究；核桃壳和核桃枝各温度段木醋液对测试菌均有抑制作用，核桃壳木醋液尤其是对细菌的抑制作用最好，且高于对照抗菌素，对霉菌和植物病原菌的抑制效果较差；核桃枝木醋液对测试菌均也均有抑制作用，核桃枝木醋液尤其是对植物病原菌的抑制作用最好；核桃壳和核桃枝木醋液对测试菌的抑制随浓度增加抑菌作用减弱；采用 FRAP 法J检测其总抗氧化能力，用邻苯三酚自氧化法、邻二氮菲-Fe+氧化法和DPPH法检测其清除自由基活性，结果表明核桃木醋液对O2- 、OH 和DPPH的清除能力呈量效关系。从核桃木醋液对不同抗氧化反应的清除效果来看，其对DPPH的清除作用要略低于对O2- 和OH的清除作用。关键词：核桃壳；核桃枝；抗氧化活性；木醋液；抑菌 Abstract:Key words: Walnut shell; Walnut sticks;Anti-oxidative activities; pyroligneous acid; antifungal activity木醋液，是由木材干馏热解后的气体产物经过冷凝得到的液体组分。木醋液成分复杂，含有有机酸、醛、酮、醇、酚及其衍生物多种有机化合物，其中酸为主要成分，还有胺类、甲胺、吡啶等少量碱类物质及Ca,Mg,Na,Fe 等微量元素1。木醋液的性质随原材料的种类、含水量、收集温度及热分解方法不同而有所不同。木醋液的制取过程中木材炭化方法一般可分为烧炭和干馏两大类。此外，还有把锯屑或制材时产生的板皮等废材在裸地上或混凝土上烧炭的平炉法，以及用回转炉工业化烧炭等方法。干馏釜平炉法生成的木醋液通常比土窑烧炭法得到的要醋液比重大、溶解焦油含量高。粗木醋液的精制方法目前主要有静置法、木炭(或活性炭) 精制法、药品精制法、简单蒸馏法、减压蒸馏法2 、分配法3. 木醋液的静置法是由于木醋液中的不稳定成分发生氧化、聚合等作用而达到澄清分离作用。蒸馏法是利用溶液中成分沸点之间的差别来分离混合物的一种方法,蒸馏法又可分为简单蒸馏和减压蒸馏两种：1.简单蒸馏过程中，首先将比醋酸沸点低的组分和以醋酸为主要成分的组分分别与大量的水一同蒸馏出，而后蒸馏出含有酚类的高沸点部分。进行反复蒸馏已蒸馏出的馏分，以达到出去较多不稳定化合物和可溶解焦油，同时达到减少馏分中化合物种类的目的。2.减压蒸馏中减压时，组分的蒸汽压下降，因此可比简单蒸馏时低的温度条件下进行蒸馏，从而可将对热不稳定的化合物进行分离、精制。减压干馏法与简单蒸馏的不同在于，其可通过调节减压程度、加热浴的温度来促进目的成分的馏出。对含水量大的木醋液可用一般的简单蒸馏法，但是为了得到所需要的具共23页第22页木醋液的制取、抑菌与抗氧化活性测定有活性的木醋液馏分，用减压法较好。木醋液广泛地应用于化工业、林业、农业、畜牧业、食品加工业和医药卫生业。在农业上4，木醋液具有杀菌、治虫、抗病、提高水和土壤有益微生物活性5、促进作物生长等作用，可作为绿色无公害农药、微肥使用，提高作物产量和品质6。与化学农药、化肥混合使用，可提高农药、化肥的效能，并能降解农药残留7。木醋液用于稻田可防治水稻立枯病8，用于防治苹果腐烂病效果优于常用药“病必清”，防治西瓜枯萎病优于常用药“甲基托布律”，防止黄瓜霜霉病效果高于“乙磷铝” 9。木醋液能够影响植物的发根力。在试管内观察日本梨种子的萌发过程, 发现加入木醋液能够促进日本梨根系在试管内的萌发生长。除了能够促进植物生长外, 木醋液还能促进食用菌的生长。不同浓度的木醋液加入食用菌的培养基(锯屑) 中,均会促进食用菌菌丝体、子实体的生长, 其中, 当每kg 培养基中含有01050125 ml 木醋液时, 对食用菌生长的促进效果最佳10 。用于食菌可增产2142%。在畜牧业上，用木醋液作饲料添加剂可改善肉质，提高增重和蛋鸡产蛋量及蛋品质量，还可消除粪便臭味。在医药上，木醋液对脚气病、皮肤病、肝脏病和糖尿病有良好的效果。在轻工业上，木醋液用于化妆品添加剂、沐浴液和食品饮料添加剂11。木醋液在美国、日本、韩国等国家的农业生产中均有应用。在美国, 木醋液主要应用于花园园艺, 就目前而言日本的农业生产对木醋液的应用最为普遍。其作用主要是促进作物生长及控制线虫、病原菌和病毒12 。在中国, 木醋液在农业生产上的研究工作起步并不晚。1989 年, 延边农学院13即与有关厂家合作,根据日本、韩国的技术资料, 率先试生产木醋液,并开展了一系列用木醋液防治作物、蔬菜和果树病害的室内外实验。1 试验材料与方法1.1 试验材料与仪器1.1.1 试验材料核桃枝、核桃壳三吡啶三吖嗪（tripyridyltriazine,TPTZ）、1，1-二苯基-2-苦味肼基（DPPH）；L-抗坏血酸、领三苯酚、硫酸亚铁、三氯化铁分析纯试剂；供试菌种(1) 大肠杆菌（E.coli）； (2) 金黄色葡萄球菌（S.aureus）； (3) 产气杆菌（E.aerogenes）；（4）变形杆菌（Proteus species）；（5）灵杆菌；（6）青霉菌（Penicillium sp）； (7) 康氏木霉菌（Trichoderma koningii）；(8) 绿色木霉菌（Trichoderma viride）；(9)辣椒晚疫菌；(10)黄瓜炭疽菌；(11)小麦赤霉菌；(12)小麦根腐菌；(13)苹果腐烂菌；(14)番茄早疫菌等均由西北农林科技大学微生物实验室提供。细菌培养基(牛肉膏-蛋白胨培养基)蛋白胨10 g,牛肉膏3 g, 琼脂18-20 g, 食盐5 g，水1000 mL。（pH7.2-7.4）真菌培养基(PDA培养基)马铃薯汁1000 mL, 葡萄糖20 g, 蛋白胨5 g , 琼脂18-20 g。（取马铃薯200 g，放入1000 mL自来水中文火煮沸30 分钟，双层纱布过滤，滤液加水至1000 mL。）药敏试纸 庆大霉素药敏试纸1.1.2 仪器干馏釜，冷凝装置，温度计（水银温度计，电偶温度计），超净工作台（苏净集团安泰公司制造），高压灭菌锅（江阴摈江医疗设备厂），303型电热恒温培养箱，培养皿，酒精灯，接种环，脱脂棉，试管，容量瓶。1.2 试验方法1.2.1 木醋液的制取与处理 木醋液的制取 分别称取一定量核桃枝、核桃壳,放入干馏釜内干馏, 电压调至1.2KV将不同温度段干馏热解后的气体产物经过冷凝得到的液体组分分别收集(温度段分为:90150、150310、310以上三段。) 当温度达到540时停止加热。 木醋液的精制：将木炭粉按照粗木醋液质量的5%加入，震荡10 min后，静置吸附30min，通过布氏漏斗减压抽滤，将收集过滤好的木醋液再次过滤以获得无杂质及悬浮颗粒的纯净木醋液，静置48h，吸出上层清液备用。1.2.2 抑菌试验 菌液、菌饼的制备将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、变形杆菌、灵杆菌接种于普通牛肉膏-蛋白胨培养基28培养24 h 备用；青霉菌、康氏木霉菌、绿色木霉菌接种于PDA斜面培养基中,28 培养3 d 后备用；辣椒晚疫菌、黄瓜炭疽菌、小麦赤霉菌、小麦根腐菌、苹果腐烂菌和番茄早疫菌接种于PDA平面培养基中，28 培养6 d 后备用。药敏纸片的制备：用打孔器将优质滤纸打成直径6 mm 的圆片,装于培养皿中,灭菌2h，备用。细菌抑菌试验预先将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、产气杆菌、变形杆菌、灵杆菌等供试菌菌种分别从已经活化的斜面培养基进行，然后各挑取数环菌苔，用接入以消毒的无菌水试管分别制成菌悬液。将固体培养基溶化倒入培养平皿，待冷却凝固后，加入数滴供试菌悬液，然后用无菌涂抹棒涂抹匀。再等距离、平稳地将3个已灭菌并沾取木醋液的药敏试纸放在含菌的固体培养基平面上，同时以庆大霉素和无菌水作为对照。每个处理重复2次，最后将各皿放入培养箱中，在条件28培养24 h。取出后，测量其抑菌圈直径的大小。抑菌率（%）=（抑菌直径对照直径）/对照直径100抑菌试验统计方法：根据试验数据求出各浓度梯度与抑菌率的回归曲线方程。 霉菌抑菌试验预先将青霉菌、康氏木霉菌、绿色木霉菌等供试菌菌种分别从其已经活化的斜面培养基上，各挑取数环菌苔，用接入以消毒的无菌水试管分别制成菌悬液。将固体培养基溶化倒入培养平皿，待冷却凝固后，加入数滴供试菌悬液，然后用无菌涂抹棒涂抹匀。再等距离、平稳地将3个已灭菌并沾取木醋液的药敏试纸放在含菌的固体培养基平面上，同时以无菌水作为对照。每个处理重复2次，最后将各皿放入培养箱中，在条件28培养48 h。取出后，测量其抑菌圈直径的大小。抑菌率（%）=（抑菌直径对照直径）/对照直径100 植物病原菌抑菌试验木醋液对植物病原菌菌丝生长的抑制作用采用菌落直径法16。加热PDA培养基倒入250 mL的三角瓶中，每瓶200 mL。少待冷却后，每瓶用移液管加入8 mL相应温度段木醋液摇匀，同一温度段木醋液培养基倒14 皿。并设灭菌水对照。用灭菌的内径1.2mm 的打孔器的培养6d 菌种的PDA平板培养基上打孔，每皿接入1个菌饼，带菌面朝下。28 培养，48h后观察核桃壳木醋液对植物病原菌的抑菌效果，6 d 后观察核桃枝对植物病原菌的以军效果，选择抑菌效果较好的温度段进行木醋液对植物病原菌的毒力测试。菌落净生长直径(mm) = 测量直径 1.2mm抑菌率（%）=（对照菌落直径处理菌落直径）/对照菌落直径1001.2.3抗氧化能力测定 总抗氧化能力的测定 采用 FRAP 法17-18。取 10ul 样品溶液,用 10mL 蒸馏水定容,再加入 1.8mL TPTZ 工作液由 25mL 0.3mol/L 醋酸盐缓冲液（3.6）、2.5mL 10mmol/L TPTZ 溶液40mmol/L 盐酸、2.5mL 20mmol/L FeCl3 溶液组成,于 37条件下反应 10min, 593nm 处测吸光度。以 1.0mmol/L 硫酸亚铁为标准， 样品总抗氧化力（Totalanioxidative capacity， 简写TAC）以达到同样吸光度所需的硫酸亚铁浓度（mmol/L）表示。计算式为: TAC=118cm式中 TAC样品总抗氧化能力,mmol/gc达到同样吸光度所需FeSO4的浓度,mmol/Lm试样质量(干样),g 羟基自由基(OH)的生成及清除率的测定羟基自由基的生成及清除率的测定用邻二氮菲-Fe+19-20氧化法检测 H2O2Fe2 +产生的OH。H2O2/Fe2+体系可通过 Fenton 反应产生OH，邻二氮菲 Fe2+水溶液被OH 氧化为邻二氮菲 Fe2+ 后，在 536 nm 处的最大吸收峰消失，吸光值A536 明显降低。当反应体系中加入OH 清除剂时，此过程受到抑制，A536 降低不明显。通过计算得到样品对OH 的清除能力。向试管中依次加入 2.0 mL 150mmol/L 磷酸盐缓冲液 （pH 7.4 ）、2.0mL 0.75mmol/L 邻二氮菲、2.0ml 0.75mmol/LFeSO4、 0.5mL 样品液， 立即混匀后， 加入 1.0mL 0.01%H2O2， 总体积为7.5mL， 作为 样 。以 0.5mL 蒸馏水代替样品液， 混匀后加入 1.0mL H2O2作为损 。所加其它试剂同前， 以 1.5 mL 蒸馏水补足总体积， 作为 未损 。以 L- 抗坏血酸为标准抗氧化剂。OH 清除率计算公式是：OH 清除率 （%）（样 损 ）（损 未损）100 超氧阴离子的生成及清除率的测定采用改良的邻苯三酚自氧化法产生O2- 21-22。邻苯三酚在弱碱条件下发生自氧化， 产生O2-。O2-清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在 325nm 处的吸收峰减弱，通过吸光值A325 的变化率计算对 O2- 的清除能力。取 4.5mL 50mmol/L磷酸盐缓冲液 ( pH8.34 )、4.2mL蒸馏水,混匀后在 25 水浴中保温 20min ，取出后立即加入25 预热的 0.2mmol/L 邻苯三酚 0.3mL ，总体积 9mL 。迅速摇匀后，在 325nm 下每隔 30s 测吸光值， 计算线性范围内每分钟吸光度的增加值（即 A0）。除用样品液代替蒸馏水外， 待测样所取试剂同前， 按上述方法计算线性范围内每分钟吸光度的增加值（即 样）。按下式计算清除率。清除率（）（A0 A样）A0100 DPPH清除能力的测定取 2mL 样品溶液,加入 0.065mmol/L DPPH乙醇溶液 2mL ,室温下避光静置 30min 后,于波长517nm处测吸光值。DPPH的清除率为23DPPH 清除率（%）=1-(Ai-Aj)Ak100%式中 :Ak2.0mL DPPH与2.0mL 体积分数50%乙醇混合液的吸光度;Ai2.0ml DPPH与 2.0mL 样品混合液的吸光度;Aj2.0ml 体积分数50%乙醇与 2.0ml 样品混合液的吸光度.2 结果与分析2.1 木醋液的制取：2.1.1 核桃壳与核桃枝木醋液的制取采用干馏法制取核桃壳、核桃枝木醋液的总得率、不同温度段所得所占百分数数据结果如表1所示表1 核桃壳、核桃枝木醋液的总得率、不同温度段所得所占百分数表木醋量g材重g碳重g总得率90150得率150310得率310得率核桃枝1680.86 3547.54 966.43 65.12 13.54 69.84 16.40 核桃壳726.57 1668.42 529.60 63.80 8.81 72.56 18.63 由表1 可以看出核桃壳和核桃枝木醋液的得率均大于60，且核桃枝蒸馏所得率稍大于核桃壳蒸馏所得率。核桃枝和核桃壳木醋液中均是150310得率最高，所得核桃枝木醋液中在150310温度段所得率达到69.84、核桃壳木醋液中达到72.56由图1 可以看出核桃壳木醋液在170310之间所得率较大，而核桃枝蒸馏中190370得率较大。2.1.2核桃壳与核桃枝木醋液的精制用木炭粉按照粗木醋液质量的5%加入，经震荡、静止吸附后，过滤制取精制木醋液数据结果如表2所示表2 核桃壳、核桃枝不同温度段木醋液精制所得率表枝90枝150枝310壳90壳150壳310原木醋液g126.85 594.60 141.00 37.98 305.20 66.70 碳用量g6.45 30.10 7.05 2.03 15.54 3.42 碳处理液g118.80 510.78 111.30 34.58 261.96 54.60 所得率 %89.12 81.76 75.18 86.43 81.67 77.87 核桃枝与核桃壳不同温度段粗提木醋液经木炭吸附、精制处理可发现90150段的粗木醋液精制所得率最高，且随提取温度的升高粗提木醋液中焦油等可被木炭吸附的物质的含量增加其精制所得率逐渐降低。精制所得率核桃枝木醋液中在90150温度段达到89.12、核桃壳木醋液中达到86.432.2 核桃壳与核桃枝的抑菌效果2.2.1 核桃壳对细菌的效果采用试纸片扩散法，以庆大霉素药敏试纸抑菌直径的平均值作为对照。其结果如表3 所示。表3 核桃壳木醋液对细菌抑菌圈的测量结果试样金黄葡萄球菌变形杆菌巨大芽孢杆菌北京棒状杆菌大肠杆菌产气杆菌90.217619169790.2.1137.5947.5490.2.2105243490.2.300140090.2.4000000150.214121818249150.2.1121416132115150.2.21191691511150.2.384871410150.2.44022107310.213131716.5230310.2.19149142010310.2.289791814310.2.346571313310.2.4033696庆大1191011144注：90.1表示90-150温度段粗木醋液原液，90.2表示90-150温度段精制木醋液原液，150.1表示150-310温度段粗木醋液原液，150.1.1表示150-310温度段粗木醋液对半稀释一次，150.1.2表示150-310温度段粗木醋液对半稀释两次，以此类推，下同。由表3可知，90.2对金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌、北京棒状杆菌的抑制效果最好，并且优于对照庆大霉素对以上三种菌的抑制作用；150.2和310.2对所有测试细菌都有较好的抑制效果并优于对照组，具有广谱抑菌的作用；三个温度段对细菌的抑制效果随浓度的降低而减弱。90.2木醋液在对半稀释3次后几乎无抑菌效果，而150.2和310.2在对半稀释4次时依然有一定的抑菌效果。2.2.2 核桃壳对细菌毒力试结果将各温度段不同浓度木醋液对细菌的抑制效果进行回归，其结果如表46所示。表中r代表相关系数。表4 90.2木醋液对细菌的毒力作用菌种浓度抑菌圈抑菌率y=a+bx=cx2+dx3+ex4金黄葡萄球菌r=0.994250.0625庆大1713100010.561.904823.8095-4.7619-100.0000-100.0000y=0.2770278+1.135133x变形杆菌r=0.9983250.0625庆大67.55009.33-35.6913-19.6141-46.4094-100.0000-100.0000y=0.093750+1.83253x+23.2117x2-86.072955x4巨大芽孢杆菌r=0.9955250.0625庆大251587010.33142.013645.2081-22.5557-32.2362-100.0000y=0.587077+0.477947x北京棒状杆菌r=0.935250.0625庆大2210101001283.3333-16.6667-16.6667-16.6667-100.0000y=0.062500+1.760423x+3.156241x2大肠杆菌r=0.9983250.0625庆大97.530014.33-37.1947-47.6622-79.0649-100.0000-100.0000y=0.093750-13.55877x-41.534269x2-31.165376x3产气杆菌r=0.97250.0625庆大744009.67-27.6112-58.6350-58.6350-100.0000-100.0000y=0.093750-5.755233x-8.979486x2由表4可知，90.2木醋液对细菌的抑制效果除了对北京棒状杆菌和产气杆菌的毒力测试相关系数略低于0.99以外，对其它供试菌种的毒力测试相关系数均大于0.99，呈线形相关。表5 150.2木醋液对细菌的毒力作用菌种浓度抑菌圈抑菌率金黄葡萄球菌0.9999250.0625庆大1412118410.533.333314.28574.7619-23.8095-61.9048y=0.197843-1.815707x-1.847x2变形杆菌r=0.9495250.0625庆大14129409.3350.053628.6174-3.5370-57.1275-100.0000y=0.242529+3.091407x-9.250388x2巨大芽孢杆菌r=0.9689250.0625庆大24222214810.33132.3330112.9719112.971935.5276-22.5557y=0.090871+1.334653x4+1.12373x3北京棒状杆菌r=0.9994250.0625庆大24191513812100.000058.333325.00008.3333-33.3333y=0.421246+0.88886x+0.544049x2大肠杆菌r=0.9895250.0625庆大242115141014.3367.480846.54574.6755-2.3029-30.2163y=0.1788+2.690245x3产气杆菌r=0.9695250.0625庆大151110709.6755.118913.75393.4126-27.6112-100.0000y=0.349522+1.10131x由表5可知，150.2木醋液对细菌的抑制效果除了对北京棒状杆菌和金黄葡萄球菌的毒力测试相关系数略高于0.99以外，对其它供试菌种的毒力测试相关系数均小于0.99，线性相关低至非线性相关。其中对金黄葡萄球菌的毒力测试效果线性相关值最大为0.9999，但对其相对于庆大霉素的抑菌率最大值为33.3333低于90.2对其的抑制率大于310.2对其抑制率。对巨大芽孢杆菌的抑制率最高。对所有供试菌种的抑制率都随浓度的减小而递减。表6 310.2木醋液对细菌的毒力作用菌种浓度抑菌圈抑菌率金黄葡萄球菌r=0.9466250.0625庆大13984010.523.8095-14.2857-23.8095-61.9048-100.0000y=0.666923+1.040395x变形杆菌r=0.8133250.0625庆大13149639.3339.335550.0536-3.5370-35.6913-67.8457y=0.409564+0.623807x巨大芽孢杆菌r=0.992250.0625庆大23151311910.33122.652545.208125.84706.4860-12.8751y=0.534482+0.720912x北京棒状杆菌r=0.9583250.0625庆大22.5201513121287.500066.666725.00008.33330.0000y=0.507794+0.962347x大肠杆菌r=0.989250.0625庆大23201813914.3360.502439.567325.6106-9.2812-37.1947y=0.206171+3.566934x3产气杆菌r=0.8898250.0625庆大14136409.6744.777734.4364-37.9524-58.6350-100.0000y=0.499791+0.669106x由表6可知，310.2木醋液对细菌的抑制效果对巨大芽孢杆菌的抑制率最高，且线性相关系数最高拟核率高但低于150.2木醋液对其抑制率。对所有供试菌种的抑制率都随浓度的减小而递减。2.2.3核桃枝对细菌的验效果采用试纸片扩散法，以庆大霉素药敏试纸抑菌直径的平均值作为对照。其结果如表7 所示表7 核桃枝木醋液对细菌抑菌圈大小的测量结果试样金黄葡萄球菌大肠杆菌变形杆菌灵杆菌产气杆菌庆大霉素15.7515.2513.7514.87515.75水0000090.138.7590.24.5308.250150.127.751721.962526.57150.219.2519.2519.7522.7518.25310.118.521.2521.2520.2516.75310.215.2517.520.7519.516.75由表7可知，90.1对大肠杆菌、产气杆菌的抑制效果最好，90.2对灵杆菌的抑制效果最好，但是无对照庆大霉素的抑菌效果好；150和310对所有测试细菌的抑制效果均高于对照，且优于核桃壳同温度段提取木醋液对供试菌种的抑菌效果，具有广谱抑菌的作用；其中150.1的抑菌效果最好。 2.2.4核桃枝对细菌毒力试结果将各温度段不同浓度木醋液对细菌的抑制效果进行回归，其结果如表8所示。表中r代表相关系数。表8 核桃枝木醋液对细菌的毒力作用样液金黄葡萄球菌大肠杆菌变形杆菌灵杆菌产气杆菌150.1抑菌率76.190573.114859.709168.067268.698498420.000030.909113.613411.1111150.1.2-26.9841-10.491816.3636-24.3697-9.5238150.1.3-49.2063-52.4590-1.8182-34.4538-25.3968150.1.4-53.9683-100.0000-23.6364-44.5378-44.4444150.1.5-55.5556-100.0000-54.5455-54.6218-100.0000相关系数r=0.996156r=0.690926r=0.884815r=0.992941r=0.833970150.2抑菌率22.222226.229543.636452.941215.87303029.836130.90919.2437-3.1746150.2.2-23.8095-55.73773.6364-19.3277-19.0476150.2.3-34.9206-59.0164-54.5455-32.7731-28.5714150.2.4-41.2698-80.3279-69.0909-42.8571-39.6825150.2.5-50.7937-100.0000-83.6364-51.2605-50.7937相关系数r=0.906555r=0.864764r=0.770043r=0.987791r=0.905794310.1抑菌率17.460339.344354.545536.13456.3492310.1.1-12.6984-9.83613.63645.8824-3.1746310.1.2-22.2222-32.7869-3.6364-21.0084-12.6984310.1.3-31.7460-39.3443-32.7273-34.4538-26.9841310.1.4-49.2063-52.4590-43.6364-37.8151-53.9683310.1.5-100.0000-100.0000-47.2727-42.8571-79.3651相关系数r=0.905794r=0.848921r=0.957036r=0.983137r=0.629779310.2抑菌率-3.174614.754150.909131.09246.3492310.2.1-38.0952-19.6721-7.272712.6050-3.1746310.2.2-46.8254-27.8689-7.2727-24.3697-11.1111310.2.3-53.9683-45.9016-29.0909-41.1765-15.8730310.2.4-100.0000-49.1803-40.0000-46.2185-30.1587310.2.5-90.4762-100.0000-49.0909-78.1513-47.6190相关系数r=0.811282r=0.741255r=0.944356r=0.850994r=0.693692由表8可知，150.1核桃枝木醋液对植物病原菌的抑制效果对金黄葡萄球菌的抑制率最高，且线性相关系数最高拟核率高，150.2木醋液对灵杆菌的抑菌效果最好。310.1和310.2木醋液均对变形杆菌的抑菌效果最好，1核桃枝木醋液对所有供试菌种的抑制率都随浓度的减小而递减。于庆大霉素对比核桃枝木醋液原液的抑菌效果均优于庆大霉素，但随着对半稀释次数的增加其抑菌效果明显无庆大霉素原液好，核桃枝木醋液在对半稀释4次之后其抑菌效果不再明显或已无抑菌效果。2.3核桃壳与核桃枝对霉菌的效果2.3.1 核桃壳对霉菌的效果不同温度段木醋液对霉菌的抑制效果如表9所示。由表9可以看出，不同温度段木醋液的抑菌效果随浓度的递减而递减。三个温度段的木醋液中，310.2对黑曲霉和青霉的效果最好；150.2对绿色木霉的效果最好，其次是康氏木霉；90.2对所有供试霉菌的抑制效果都较差。表9 核桃壳木醋液对霉菌抑菌圈大小测量结果（mm）Table9 The measured results of fungi inhibition rings effected by the Pyroligneous Acid试样samples黑曲霉D.niger青霉P.sp绿色木霉T.viride康氏木霉T.koningii90.2253090.2.1102090.2.2001290.2.3001190.2.40030150.2993116150.2.124199150.2.21284150.2.30111150.2.40000310.214105.56310.2.14822310.2.20100310.2.30000310.2.400002.3.2 核桃枝对霉菌毒力试验结果不同温度段木醋液对霉菌的抑制效果如表10所示。表10 核桃枝木醋液对霉菌抑菌圈的测量结果24h(mm)Table10 The measured results of fungi inhibition rings effected by the Pyroligneous Acid试样samples康氏木霉T.koningii绿色木霉T.viride青霉P.sp90.103090.2000150.19.2510.256.7555.75553.75523150.1.4020150.1.5000150.27.759.75554.752.7552.751.2551.250150.2.4000150.2.5000310.17.511.758.539.756.25355.255351.253.253500310.1.5000355.25352.253.25352.753502.5310.2.4000310.2.5000由表10可以看出，不同温度段木醋液的抑菌效果均优于核桃壳相应温度段木醋液的抑菌效果。三个温度段的木醋液中，所有木醋液对绿色木霉的效果最好，其中310.1对绿色木霉的效果最好，且对所有供试霉菌的抑制效果都最好大于150.1的抑菌效果；310.2木醋液的抑菌效果也优于150.2的抑菌效果，故可知核桃枝木醋液中大于310温度段提取木醋液的抑菌效果最好。2.4 核桃壳与核桃枝对植物病原菌的效果2.4.1 核桃壳对植物病原菌的效果核桃壳木醋液对植物病原菌的抑菌效果如表11所示表11 核桃壳木醋液对植物病原菌抑菌圈大小测量结果48h（mm）试样黄瓜炭疽辣椒晚疫棉黄萎苹果腐烂葡萄灰霉90.2323335343590.2.136036343690.2.2363436333690.2.3353538343790.2.43737373435150.23126242625150.2.13333302730150.2.23232353033150.2.33232353134150.2.43232353035310.22728272526310.2.13033313030310.2.23228323128.5310.2.33228323130310.2.43030323231由表11可以看出，48h后，90.2对植物病原菌的抑制效果总体要低于其它两个温度段的效果，150.2与310.2的抑菌效果相差不大。对于黄瓜炭疽，310.2的效果较150.2好，抑菌效果随着浓度的降低而降低，在降低到一定程度后便不再变化；对于辣椒晚疫150.2原液好于310.2原液 ，但稀释后效果不如310.2；对于棉黄萎150.2效果同样优于310.2；对于苹果腐烂150.2与310.2的作用效果相当，但是150.2稀释后的效果稍微优于310.2 ；对于葡萄灰霉，虽然150.2段原液效果好，但稀释后，310.2的效果要更加优于150.2。总体说来核桃壳木醋液对植物病原菌效果较差。2.4.2核桃枝对植物病原菌毒力试验结果核桃枝木醋液对植物病原菌的抑菌效果测量值计算抑制率后进行回归所得结果如表12和13所示表12 核桃枝木醋液对植物病原菌抑菌抑菌率值表6d（mm）试样辣椒晚疫小麦赤霉黄瓜炭疽苹果腐烂小麦根腐番茄晚疫抑菌率%校正抑菌率%抑菌率%校正抑菌率%抑菌率%校正抑菌率%抑菌率%校正抑菌率%抑菌率%校正抑菌率%抑菌率%校正抑菌率%90.1 14.6 0.6 18.1 4.0 24.9 10.9 18.3 4.3 22.6 8.6 100.0 26.4 90.2 14.0 0.0 15.2 1.1 22.1 8.0 16.6 2.6 19.5 5.5 40.7 26.7 150.1 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 150.1.1100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 150.1.256.3 42.4 61.0 47.1 60.7 46.8 68.3 54.5 55.9 42.0 71.8 57.9 150.1.344.7 30.7 43.6 29.6 51.0 37.1 53.6 39.7 47.6 33.6 62.2 48.3 150.1.436.4 22.4 33.2 19.3 37.8 23.9 35.5 21.6 35.0 21.0 45.0 31.0 150.1.516.9 2.9 14.0 0.0 27.8 13.8 23.2 9.2 21.8 7.8 37.0 23.0 150.2 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 150.2.1100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 100.0 39.4 55.9 42.0 54.7 40.8 61.3 47.4 59.2 45.3 65.0 51.1 150.2.339.3 25.3 38.4 24.4 46.1 32.2 50.4 36.5 36.7 22.7 58.5 44.5 150.2.429.5 15.5 29.2 15.2 31.8 17.8 29.5 15.5 29.8 15.8 47.0 33.0 150.2.514.6 0.6 11.5 2.6 18.3 4.3 18.9 4.9 16.6 2.6 25.2 11.2 3