DNA的粗提取.doc

2009年江苏省洪泽中学高三生物第一轮复习教学案-高三生物备课组【课 题】： 课题5 dna的粗提取与鉴定 【备 课 人】：【备课时间】： 【上课时间】：【课 型】：复习 【课 时 数】：1课时 【复习目标】本课题通过尝试对植物或动物组织中的dna进行粗提取，了解dna的物理化学性质，理解dna粗提取以及dna鉴定的原理。【复习重点与难点】复习重点：dna的粗提取和鉴定方法。复习难点：dna的粗提取和鉴定方法。【知识回顾】一、实验原理提取生物大分子的基本思路是选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。对于dna的粗提取而言，就是要利用dna与rna、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取dna，去除其他成分。1dna的溶解性 dna和蛋白质等其他成分在不同浓度的nacl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使dna充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。此外，dna不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将dna与蛋白质进一步的分离。2dna对酶、高温和洗涤剂的耐受性 蛋白酶能水解蛋白质，但是对dna没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080oc的高温，而dna在80oc以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对dna没有影响。3dna的鉴定 在沸水浴条件下，dna遇二苯胺会被染成蓝色，因此二苯胺可以作为鉴定dna的试剂。二、实验设计1 实验材料的选取 凡是含有dna的生物材料都可以考虑，但是使用dna含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。2破碎细胞，获取含dna的滤液 动物细胞的破碎比较容易，以鸡血细胞为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。如果实验材料是植物细胞，需要先用洗涤剂溶解细胞膜。例如，提取洋葱的dna时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。注意：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出dna。加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于dna的释放；食盐的主要成分是nacl，有利于dna的溶解。如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响?研磨不充分会使细胞核内的dna释放不完全，提取的dna量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？可能含有核蛋白、多糖和rna等杂质。2 去除滤液中的杂质 方案一的原理是dna在不同浓度nacl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白质，不分解dna；方案三的原理是蛋白质和dna的变性温度不同。注意：为什么反复地溶解与析出dna，能够去除杂质？用高盐浓度的溶液溶解dna，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使dna析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出dna，就能够除去与dna溶解度不同的多种杂质。方案二与方案三的原理有什么不同？方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的dna与蛋白质分开；方案三利用的是dna和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与dna分离。3dna的析出与鉴定 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等、冷却的酒精溶液，静置23min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的dna。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分。取两支20ml的试管，各加入物质的量浓度为2mol/l的nacl溶液5ml，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4ml的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较两支试管溶液颜色的变化，看看溶解有dna的溶液是否变蓝。三、实验步骤以洋葱为实验材料1称取30克已切碎的洋葱，放入研钵中，加入少量石英砂助研，倒入10ml 2mol/l的氯化钠溶液，充分研磨。洋葱含有挥发性刺激物，有效减少刺激，才能使实验顺利进行。上课前，教师可先将洋葱放入冰箱冷冻一会儿，使其凉透但又不能结冰；或将洋葱切成几大块，放入清水泡一会儿，让其挥发性刺激物溶于水，可以减轻刺激。然后将洋葱切碎备用。研磨的目的主要是使洋葱细胞破裂，使dna溶于2mol/l的氯化钠溶液，没必要将洋葱研成粥糊状，后者既浪费时间又影响实验效果。研磨时，切忌使用搅拌器（榨汁机）。使用搅拌器虽可以提高研磨效率，但搅拌器将洋葱切成极细小的颗粒，无法通过过滤将洋葱颗粒剔除。只能将酒精直接倒入滤液中，许多洋葱小颗粒因为轻会漂浮起来，dna藏在其中，无法分辨。学生看不到白色纤维状粘稠物的dna。2研磨后，用漏斗和纱布将汁液过滤到小烧杯中，得到滤液。3向滤液中加入95%的酒精溶液20ml，沿烧杯壁缓缓倒入，不要震动或搅拌。此时，烧杯中的液体分为上、下两层，下层较浑浊，上层澄清，很快上层溶液中就会有白色纤维状粘稠物析出，用玻璃棒可将其轻轻卷起。这就是记录生命遗传信息的重要物质dna。dna析出的过程中，切忌震动和搅拌（不震动易于分层，我们就能很容易观察到上清液中的丝状物；搅拌会使非常柔软的dna断裂成小段，不易取出）。如果用玻璃棒dna不易卷起，可改用表面打毛的牙签，dna提取物就缠绕在牙签上了。4鉴定：取两支试管，编为1、2号，各加入2mol/l的氯化钠溶液2ml，向1号试管中加入一些白色纤维状物，振荡使其溶解，然后向两支试管中各加入2ml二苯胺试剂，沸水浴加热5分钟。四、注意事项1以血液为实验材料时，每100ml血液中需要加入3g柠檬酸钠防止血液凝固。2加入洗涤剂后，动作要轻缓、柔和，否则容易产生大量的泡沫，不利于后续步骤地操作。加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓，以免dna分子的断裂，导致dna分子不能形成絮状沉淀。3二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果。4dna的溶解度与nacl溶液浓度的关系：当nacl溶液浓度低于0.14mol/l时，随浓度的升高，dna的溶解度降低；当nacl溶液浓度高于0.14mol/l时，随浓度升高，dna的溶解度升高。5盛放鸡血细胞液的容器，最好是塑料容器。鸡血细胞破碎以后释放出的dna，容易被玻璃容器吸附，由于细胞内dna的含量本来就比较少，再被玻璃容器吸附去一部分，提取到的dna就会更少。因此，实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，这样可以减少提取过程的dna的损失。【典例解析】本实验中有三次过滤：过滤用蒸馏水稀释过的鸡血细胞液过滤含粘稠物的0.14mol/lnacl溶液过滤溶解有dna的2mol/lnacl溶液以上三次过滤分别为了获得（ ）a含核物质的滤液、纱布上的粘稠物、含dna的滤液b含核物质的滤液、滤液中dna粘稠物、含dna的滤液c含核物质的滤液、滤液中dna粘稠物、纱布上的dnad含较纯的dna滤液、纱布上的粘稠物、含dna的滤液 【习题巩固】一、选择题（10个）1.在研究dna的基因样本前，采集来的血样需要蛋白水解酶处理，然后用有机溶剂除去蛋白质。用蛋白水解酶处理血样的目的是（ ）a.除去血浆中的蛋白质 b.除去染色体上的蛋白质 c.除去血细胞表面的蛋白质d.除去血细胞中的所有的蛋白质，使dna释放，便于进一步提纯2与析出dna粘稠物有关的叙述，不正确的是（ ）a.操作时缓缓滴加蒸馏水，降低dna的溶解度 b.在操作a时，用玻璃棒轻缓搅拌，以保证dna分子完整 c.加蒸馏水可同时降低dna和蛋白质的溶解度，两者均可析出d.当丝状粘稠物不再增加时，此时nacl的浓度相当于0.14mol/l3洗涤剂能够瓦解（ ），但对dna没有影响。a.细胞壁 b.细胞膜 c.细胞核 d.细胞质4在沸水浴的条件下，dna遇（ ）会被染成蓝色。a.斐林试剂 b.苏丹染液 c.双缩脲试剂 d.二苯胺5在dna提取过程中，最好使用塑料试管和烧杯，目的是（ ）a.不易破碎 b.减少提取过程中dna的损失 c.增加dna的含量 d.容易洗刷6下列操作中，对dna的提取量影响最小的是（ ）a.使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出dna等核物质b.搅拌时，要使用玻璃棒沿一个方向轻缓搅拌c.在“析出dna粘稠物”时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中粘稠物不再增加d.在用酒精沉淀dna时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却e在dna的溶解和再溶解时，要充分搅拌7dna的粗提取中，将与滤液体积相等的、冷却的（ ），静置23min，溶液中会出现白色丝状物。a.09%的nacl b.0.14mol/l的nacl溶液 c.质量分数15%的hcl d.体积分数为95%的酒精溶液8.以血液为实验材料时，需要向血液中加入（ ），防止血液凝固。a.醋酸钠 b.龙胆紫 c.柠檬酸钠 d.醋酸洋红9.在向溶解dna的nacl溶液中，不断加入蒸馏水的目的是（ ）a.加快溶解dna的速度 b.加快溶解杂质的速度 c.减少dna的溶解度，加快dna析出 d.减小杂质的溶解度，加快杂质的析出10.去除滤液中的杂质时，直接在滤液中加入嫩肉粉，利用嫩肉粉中的（ ）分解蛋白质。a.胃蛋白酶 b.胰蛋白酶 c.木瓜蛋白酶 d.肠肽酶二、非选择题（3个）1提取鸡血中dna时，要除去血液中的上清液，这是因为什么？2填写本实验完成下列实验操作时所用试剂。提取鸡血细胞中核物质 溶解核内dna： 析出2mol/lnacl溶液中的dna dna粘稠物的再溶解 提取杂质较少的dna白色乳状丝状物 dna的鉴定 3.关于dna粗提取的实验材料的选择，也经过了多次实验效果的比较，最终选择鸡血做实验材料的原因是什么？请回答下列问题：鸡血细胞中红细胞 ，家鸡属于鸟类，新陈代谢旺盛，因而血液中 细胞树木较多，可以提供丰富的 。实验前由老师制备血细胞液供同学们做实验材料，而不用鸡全血，主要原因是 。生活在牧区的人们，采集牛、羊和马血比较方便，若他们按实验要求完成实验步骤后，结果是 ，这是因为这些动物和人一样，成熟的红细胞中 ，但若改用动物肝脏做实验材料，实验能顺利进行。这是因为 。若选用动物肝脏做实验材料，在提取之前，最好增加 程序，使组织细胞更易分离。课题5 答案 dcbdb bdccc1答案：因为上清液是血浆，不含有血细胞，dna存在于沉郁试管底部的鸡血细胞的细胞核中，所以提取鸡血中的dna时，要除去血液中的上清液。2答案：蒸馏水2mol/lnacl溶液蒸馏水2mol/lnacl溶液冷却的95%的酒精二苯胺3答案：含细胞核；红；dna 鸡血细胞液中dna相对含量很难提取到dna；无细胞核；肝细胞有细胞核研磨dna的粗提取与鉴定【知识讲解】“dna的粗提取与鉴定”实验较为复杂，对材料的用量及实验过程都有较高的要求，教师既要让学生了解生物组织中dna的存在部位和形式，又要让学生初步掌握dna的粗提取和鉴定方法。由于在分组实验教学中存在着“教师难备难教、学生难做难懂”等困难，所以笔者尝试从实验原理、方法步骤、常见错误和思维拓展与训练等方面进行分析，以飨读者。1.实验原理分析提取原理：dna主要存在于动植物(鸟类血液的红细胞、新鲜菜花、蒜黄和菠菜等)细胞的细胞核内，且往往与蛋白质结合形成染色质。首先，利用dna在nac1溶液中的溶解度具有二重性和蛋白质的盐溶现象，析出dna，并分离出蛋白质；其次，利用dna不溶于酒精，但细胞中其他物质(某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质)可溶于酒精的特点进一步提取较纯净的dna；最后，利用dna遇二苯胺试剂呈蓝色的特异性显色反应或紫外灯照射法等均可鉴定提取dna。鉴定原理：dna中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成戊糖，它再和二苯胺起反应而显现蓝色。2.方法步骤分析21 制备鸡血细胞液课前先提取鸡血细胞液、鲜鸡血与10柠檬酸钠的体积比为3：9：5，准备充足的鲜鸡血，然后用离心机以l000 rmin的速度离心2 min，并用吸管除去上清液(血浆)，就可获取所需鸡血细胞液。22 提取细胞核物质取510 ml鸡血细胞液注入烧杯中，加蒸馏水20 ml，用玻璃棒沿一个方向快速充分搅拌5 min以上，然后用单层纱布覆盖烧杯口直接过滤(目的是为了缩短实验操作时间，下同)取其滤液。该步骤中，加蒸馏水的目的是为了使外界溶液浓度低于细胞液浓度，细胞过度吸水胀破释放细胞核物质，但是，释放出来的dna和rna往往与蛋白质结合在一起。搅拌的目的是为了加速细胞破裂。23 分离dna和蛋白质在滤液中加入40 ml 2 moll物质的量浓度为naci溶液，充分晃动烧杯，用玻璃棒沿一个方向搅拌l min，即可将染色质中的dna与蛋白质分离。该步骤中，加naci的目的是为了溶解dna，原因是在浓度较高(物质的量浓度为2 moll)的nac1溶液中核蛋白容易解聚，游离出dna。因此，当加入nac1后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中dna与蛋白质分离，让dna充分游离并溶解在nac1溶液中。搅拌的目的是为了使nac1与dna混合均匀。24 dna的析出与获取根据dna在浓度较低(物质的量浓度为014 moll)的nac1溶液中溶解度低而rna溶解度高的原理及蛋白质的盐溶现象，向上述溶液中加入约500 ml蒸馏水稀释nacl溶液至0。14 moll。同时，用玻璃棒缓缓搅动使dna黏稠物出现并聚集其上。然后，多层纱布过滤，取纱布上的黏稠物。此步骤亦可用离心机以4 000 rrain的速度离心15 min后，除去含有蛋白质的上清液，取离心管下部的dna沉淀物。该步骤中，加蒸馏水的目的是降低nac1溶液的浓度，使dna溶解度降到最低点，这样，dna分子可以从nacl溶液中析出。搅拌的目的是为了稀释nac1溶液，并析出含dna的黏稠物。25 dna的再溶解取含dna的黏稠物或沉淀物，放入盛有20 ml2 moll nac1溶液的烧杯中，用玻棒沿一个方向充分搅拌3 rain，然后，用两层纱布过滤dna原naci溶液，取其滤液。该步骤中，加nacl的目的也是为了dna的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。搅拌的目的是为了使含dna的黏稠物尽可能多地溶于溶液中。26 dna的沉淀和浓缩用酒精沉淀法沉淀和浓缩已除去大量蛋白质的核酸溶液，可获取较纯净的dna。即在上述滤液中加入相当于其两倍体积的冷的无水乙醇，用玻璃棒沿一个方向轻轻地搅拌混匀，缓缓旋起玻璃棒，可见乳白色dna丝状聚焦其上。由于丝状物实际上是由许多dna分子凝集成丝后盘聚形成的，故其直径并不表示一个dna分子直径的大小。该步骤中，必须使用至少在5以下冷却24 h以上的无水乙醇，而且将l份dna的naci溶液加入到2份冷无水乙醇中。若悬浮在溶液中的dna丝状物较少，可将混合物放入冰箱中冷冻约15 min。搅拌的目的是为了提取含杂质较少的dna。27 dna的鉴定利用dna遇二苯胺呈蓝色的特性，可以鉴定dna的存在。取两支试管各加入5 ml物质的量浓度为0015 moll naci溶液，将dna丝状物放入其中一支试管中，搅拌使其充分溶解后，向两支试管中分别加入4ml二苯胺试剂混匀。将试管置于沸水浴加热5 min，待试管冷却后，比较两试管的颜色变化，可见加入dna丝状物的试管中溶液呈蓝色(溶液蓝色的深浅与溶液中dna含量的多少有关)，从而鉴定dna的存在。同样，该步骤中加的nac1溶液浓度虽比前2次低很多，但还是为了溶解dna。而且，沸水浴说明了dna能耐高温(100)，高温有利于加快染色的反应速度，室温有利于dna的析出。3 常见错误分析31 dna提取量不足原因： 经蒸馏水处理的红细胞在用玻璃棒搅拌时的时间偏少，使得红细胞破裂的数量少； 用naci进行盐析时，所调制的naci浓度达不到014moll，因此dna析出的少； 玻璃棒搅拌的方向不一致，影响dna黏稠物再溶解。32 dna丝状物断裂原因：用玻璃棒搅拌时直插烧杯底部，致使dna分子断裂。33 dna染色不够原因：未进行沸水浴或沸水浴时间过短。4、十大重要考点4.1 取材不可用植物细胞，因有细胞壁，难以破裂释出核物质；也不可用哺乳动物的血细胞，因哺乳动物的成熟红细胞无细胞核和细胞器，故dna极少。4.2 制备鸡血细胞液时，要加入柠檬酸钠（抗凝剂），使血液分层，取下层血细胞。4.3 获取dna时要向鸡血细胞液加入足量的蒸馏水，以便使细胞膜和核膜破裂，核内物质释放出来。4.4 实验中共三次过滤，过滤时使用的纱布层数与取其滤液或粘稠物有关。第1、3次要用其滤液，使用的纱布为12层，第2次是要用其滤出的粘稠物，使用的纱布为多层。4.5 实验中有6次搅拌，除最后一次搅拌外，前5次搅拌均要朝一个方向。并且，在析出dna、dna再溶解和提取中，各步搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插烧杯底部，防止dna分子断裂。4.6 实验中有2次加蒸馏水。一次是在第一步，加水是为了使血细胞吸水膨胀破裂，加水后必须充分搅拌，使血细胞充分破裂；第二次加蒸馏水是在第三步，是为了稀释氯化钠溶液。4.7 实验中有3次加氯化钠溶液。在第二步中，加氯化钠后，必须充分晃动烧杯，使二者混合均匀，加速染色质中dna与蛋白质分离，使dna充分游离并溶解在氯化钠溶液中。在第五步中，加氯化钠溶液也是为了dna的再溶解，这时溶液中的蛋白质含量已很少。在第八步中，加的氯化钠溶液的浓度比前2次低得多，但还是为溶解dna。4.8 在第七步中，必须使用冷酒精（至少在5度下存放24小时，对dna凝集效果较佳）。如果悬浮在溶液中的dna丝状物较少，可将混合液放入冰箱中再冷冻几分钟。4.9 因为dna易吸附在玻璃容器上，所以实验中最好使用塑料烧杯和试管，以减少dna的损失。盛放鸡血细胞液的容器最好也是塑料的。4.10 dna鉴定时，加二苯胺后需沸水加热5分钟，待试管冷却后观察溶液颜色变化。【典例精析】例1下列关于“dna的粗提取与鉴定”的实验原理中，说法错误的是adna在氯化钠溶液中的溶解度随溶液浓度的变化而改变b利用dna不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的dnacdna是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂ddna溶液中加入二苯胺试剂经沸水浴后会出现蓝色反应解析：该实验依据的原理是a、b、d，dna不溶于酒精（属有机溶剂），c说法错误。答案：c例2下列关于实验操作的说法中，有误的是（ ）a该实验中有两次加入蒸馏水，均是为了析出dnab该实验学生操作中多次用到搅拌，除最后一步未强调方向外，其余均要求单向搅拌c该实验中有3次过滤，过滤时使用纱布层数与需用滤液或黏稠物有关d实验三次加入nacl溶液，无论浓度是2mol/l，还是0.015mol/l，均是为了溶解dna解析：对照比较表可知，除a说法有误外，其余各项均正确。两次加蒸馏水，第一次是为了使细胞吸水破裂释放出核物质（dna），第二次是为了降低nacl溶液的浓度从而析出dna。答案：a例3填写本实验操作过程中所用试剂。提取鸡血细胞中核物质： ；溶解核内dna： ；析出溶液中的dna：；dna粘稠物的再溶解： ；提取杂质较少的dna白色乳状丝状物：；鉴定dna是否存在可用试剂：。解析： 鉴定dna是否存在常用：二苯胺试剂沸水浴为蓝色反应；也可选用甲基绿试剂，其颜色反应为蓝绿色。（其它略）答案：蒸馏水 2mol/l nacl溶液 蒸馏水 2mol/l nacl溶液 冷却的体积分数为95%的酒精 二苯胺试剂或甲基绿试剂例4：关于dna的粗提取与鉴定的实验：(1)该实验依据的原理是( )adna在nacl溶液中的溶解度，随nacl溶液浓度的不同而不同b利用dna不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的dnacdna是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂d在沸水中，dna遇二苯胺会出现蓝色反应(2)实验的正确操作步骤是( )a制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解析出dna的再溶解提取较纯净的dna鉴定dnab制备鸡血细胞液提取细胞核物质溶解并析出dandna的再溶解提取较纯净的dna鉴定dnac制备鸡血细胞液溶解dna提取细胞核中dnadna的再溶解提取较纯净的dnadna的鉴定d制备鸡血细胞的细胞核物质提取液溶解dna并析出滤取dna的粘稠物dna的再溶解提取较纯净的dnadna的鉴定(3)实验过程中第一次所用nacl溶液的浓度是_；第二次所用nacl溶液的浓度是_；第三次所用nacl溶液的浓度是_ 。所用酒精最好是_的，其体积分数为_。(4)鉴定dna是，向溶有dna丝状物的试管中加入_ml的_试剂，混合均匀后，将试管置于沸水中加热5min，冷却后可观察到溶液呈_；也可取少许dna丝状物于载玻片上，滴一滴_溶液，片刻扣用水冲洗，可见丝状物被染成_。该实验是高中实验修订本教中操作最复杂，要求也最严格的实验。(1)本实验依据的原理是a、b、d三个方面，必须明确的是当nacl的浓度为0.14mol/l时dna的溶解度最低，具体操作时用2mol/l的nacl溶液，再加水稀释至粘稠物不再增多时，表明该溶液浓度即为0.14mol/l。c项虽是dna的性质，担不能作为该实验的原理。(2)a项为正确的操作程序，b项漏掉了dna的溶解前要过滤，c项中提取细胞核中dna叙述欠妥，应是提取核物质，并且应放在溶解dna之前，d项明显叙述有误。(3)整个实验过程中三次用到nacl溶液，第一次是溶解细胞核内dna；第二次是dna粘稠物的再溶解；第三次是dna的鉴定。前两次浓度均是2mol/l，第三次是0.015mol/l。(4)鉴定dna的存在有两种方法，教材中的二笨胺加热法的优点在于易作对照实验，另一方法是用甲基绿溶液直接滴在有dna丝状物的载玻片或玻棒上，呈蓝绿色反应，即证明dna的存在。参考答案：(1)a、b、d (2)a； (3)2mol/l；2mol/l；0.015mol/l；冷却；95%；(4)4；二苯胺；蓝色；甲基绿；蓝绿色。【巩固练习】一、选择题1、在制备鸡血细胞液的过程中，加入柠檬酸钠的目的是 a 防止凝血 b 加快 dna 析出 c 加快 dna 溶解 d 加快凝血2、下列操作中，对 dna 的提取量影响较小的是a 使鸡血细胞在蒸馏水中充分破裂，放出 dna 等核物质 b 搅拌时，要用玻璃棒沿一个方向轻缓搅动 c 在析出 dna 黏稠物时，要缓缓加蒸馏水，直至溶液中黏稠物不再增加 d 在用酒精沉淀 dna 时，要使用冷酒精，甚至再将混合液放入冰箱中冷却3 含有 dna 的氯化钠（ 0 . 015mol / l ）溶液中加入二苯胺试剂后，加热煮沸5min ，溶液呈a 紫色 b 蓝色 c 砖红色 d 红色 4 在“ dna 的粗提取实验”中，有两次 dna 的沉淀析出，其依据的原理是 dna 在物质的量浓度为 0 . 14mol / l 的氯化钠中的溶解度最低 dna 在冷却的体积分数为 95 的酒精中能沉淀析出 a 两次都是 b 第一次是 ，第二次是 c两次都是 d 第一次是 ，第二次是 5 在向溶解 dna 的 nacl 溶液中不断加入蒸馏水的目的是a 加快溶解 dna 的速度 b 加快溶解杂质的速度 c 减小 dna 的溶解度，加快 dna 析出 d 减小杂质的溶解度，加快杂质的析出6 提取含杂质较少的 dna 所用的溶液是 a 体积分数为 90 的冷却的酒精 b 加热的、体积分数为 95 的酒精c 体积分数为 95 的冷却的酒精 d 加热的、体积分数为 90 的酒精 7 . dna 的粗提取和鉴定实验，与下列哪项原理无关a . dna 在0.14mol / l nacl 溶液中的溶解度最低 b . dna 易被龙胆紫染成紫色 c 在 dna 溶液中加入二苯胺，加热后产生蓝色 d 加入 95 的冷酒精， dna 会从溶液中析出8 下列图示中能反映 dna 溶解度与 nacl溶液浓度之间关系的是9 对三次过滤的叙述不正确的是a 第一次过滤后，核物质存在于滤出的固体物中b 第二次过滤时使用多层纱布， dna 存在于纱布上的黏稠物中 c 第三次过滤后， dna 存在于滤液中，可进一步除去非 dna 物质d 上述 b 、 c 均正确10 在 dna 的粗提取实验中，提取鸡血细胞中的核物质和析出 dna 粘稠物的操作过程均用到蒸馏水，其作用在于a 前者使血细胞破裂， 后者稀释氯化钠溶液 b 前者用来溶解血细胞，后者用来溶解 dna c 前者用来分离细胞核，后者用来保护 dna d 前者防止细胞核破裂，后者使 dna 析出二、非选择题1 在“ dna 的粗提取和鉴定实验”中有五次用玻璃棒搅拌。( l ）第一次搅拌加蒸馏水的鸡血细胞液是为了_; ( 2 ）第二次搅拌加 2mol / l 的 nacl 溶液的滤液是为了使其与 dna _; ( 3 ）第三次搅拌加蒸馏水至 0 . 14mol /