微生物实验室管理规范.doc

XXXX饮料工业有限公司文件类型：SOP文件颁布日期：20061215微生物室管理规范密级：仅供内部使用文件代码： SOP-PK-067版本号： 第 1.0 版Page 10 of 10 微生物室管理规范编制审核批准生效日期 修订记录修订次数修订日期修订内容1.0 目的确保微生物是有一个良好的环境，以便准确完成常规微生物分析试验。以对生产环境，设备的清洗消毒和人员卫生进行有效的控制。确保生产原料和成品的微生物指标合格。2.0 范围适用于微生物实验室人员，环境卫生，设备，试剂，培养基及常规操作的各项要求及管理。3.0 职责3.1 微生物品控员负责具体工作的执行。3.2 品控经理负责监督此项工作的进行。、4.0 定义无。5.0 程序5.1 人员5.1.1微生物操作人员需要有相关的工作经验，并具有微生物操作的基本技能，如铺平板、菌落计数、无菌操作等。5.1.2应确保微生物操作人员接受足够的微生物专业培训，以确保其能独立的进行操作、准确地完成测试，并做好培训记录。5.2 环境5.2.1 微生物操作室配备超净工作台。5.2.2 微生物操作室的墙壁、地面、天花板和桌面应是否光滑平整、易于清洁消毒，不宜使用木质材料，若有此种材质，则须将其完全包裹。5.2.3 工作区域里应方便使用电源、抽滤系统，便于取用培养基和实验用品。5.2.5 可有适当的通风条件，须在空调出安装空气过滤气，确保空气质量达到10,000级。平时关闭门窗，尽量减少空气对流引起的扬尘。5.2.5 微生物操作辅助区域包括样品的储藏、培养基准备、清洗消毒、微生物培养等。 工作台上要有足够的空间处理样品，存放培养基、玻璃器皿和小型仪器设备；要留有间安放固定的仪器设备（如培养基、水浴锅、冰箱）等。 工作区域要有充足的灯光，光强不小于300lux。5.2.6 实验室应保持整洁。5.2.7 环境监控 实验室必须考虑实验室内外环境污染的 可能性，并对之进行有效的监控。要建立一个有效的检测系统，如定期使用落菌法，来监控、空气中的微生物数。5.3 卫生5.3.1 应配备实验室专用服装（包括鞋，帽等），实验室工作服避免在实验室以外的区域穿着，应定期更换，清洁。5.3.2 好的卫生习惯：实验室人员要注意个人卫生，应形成经常洗手的习惯，手指甲要剪短。进入无菌室前要先用热肥皂水洗手，实验前用75%酒精消毒双手。实验时穿着干净的实验服，袖口带松紧或者挽起袖口。不得在微生物测试区域吸烟，吃喝食物。5.3.3日常清洁消毒 每天打扫实验室，避免灰尘。常用75%酒精或者浓度为50mg/L氯水消毒工作区域。5.4 设备维护、校验和验证5.4.1实验室应具有完成所有分析项目所需的设备。(1) pH计精度范围应在0.1单位之内。电极应根据供应商建议进行维护。每次使用前，pH计应根据测量范围，用pH7.0，pH4.0，pH10.0的标准缓冲液校准，并留有记录。pH缓冲液只可使用一次。 市售缓冲液应标明收货和启用日期，并保证在保质期内使用。(2)天平天平应有0.1g的精度。天平在每天使用前须用检验码校验，根据校验砝码的类型，定期送质量监督部门校验（1kg一小为一年一次，1kg以上为两年一次）。应保存供应商及内部维修保养计划和保养记录。(3)测温装置玻璃、表盘或电子温度计的分度值应不大于0.5，玻璃温度计的溶液不得间断。不得使用无法校验的表盘温度计。温度计须每年校验，并留有校验记录。若温度计与参考温度计误差超过1，则不可再使用。参考温度计须每三年校验一次。 (4)培养箱 培养箱须有内部测温装置，培养温度保持恒定，应每天记录校验后的温度。培养箱内放置一杯清水，以保持一定的湿度，并每周更换清水。培养箱应每月清洁一次，并用75%的酒精消毒内表面。(5)压力锅压力锅应具有内部加热源，温度传感器，压力表和安全阀。如要完成1215分钟灭菌过程，整个周期不应超过45分钟。灭菌结束后，应缓慢降压，避免培养基爆沸，防止倒置试管中产生气泡。应保存供应商几内部维护保养计划和保养记录。压力锅每年至少维护保养一次。每季度自动计时器应使用其他准确的计时器校准。应清洁压力锅密封圈，除去炭化的培养基，还应经常清洁压力锅内部。(6)烘箱烘箱应能保持至少两小时的灭菌温度（170180），避免装量过满。(7)冰箱冰箱应维持在15。温度计的最小分度值为1。每天检查温度一次。(8)接种用具可使用无菌的金属或一次性塑料接种环，木质涂棒，无菌擦拭棒，无菌一次性塑料移液枪头。木质涂棒须用干热法灭菌。金属接种环或接种针应为镍合金或铂金。（对于大肠菌群和其他氧化实验不宜用镍合金接种环，以免干扰氧化实验）。(9)膜过滤设备膜过滤设备的材料须为不锈钢，玻璃或可灭菌的塑料，不可用易损易腐蚀的材料。若使用带刻度的透明玻璃或塑料容器量取样品，则须用标准量筒校正，误差小与2.5%。膜过滤器可用市售的无菌包装或者在使用前用121 10分钟灭菌。(10)培养皿须使用无菌塑料或可灭菌的玻璃培养皿。为保持玻璃培养皿的无菌，须用不锈钢或铝罐存放，或者用铝膜或耐热纸包裹。一次性培养皿的包装在使用后应重新封口。(11)移液管玻璃移液管可放在不锈钢或铝罐中消毒或单独用耐热纸或铝膜包裹灭菌。移液管刻度清晰，无破损。一次性移液管在使用后应重新封口。10mL以内的移液管误差须小于2.5%。(12)取样容器取样容器为可反复灭菌的广口塑料或玻璃瓶，或无菌塑料袋。也可使用其他合适的取样容器。取样容器至少为120mL。玻璃或塑料在用压力锅灭菌前先烘干。空的容器应加几滴水以免灭菌失败。(13)紫外灯每月应关断电源后用软布沾酒精擦拭干净。每季度可使用如下方法检测紫外灯的杀菌效果：用含菌落200250的培养皿暴露于紫外灯下两分钟，若杀菌率小于99%，则需更换灯管。5.4.2实验室中仪器应定期清洗，检视破损，主要设备的维护应根据其使用频率来确定维护周期，参见附表1。5.4.3 对直接影响测试结果的设备建立校准和验证程序，参见附表2，3。仪器上应贴校验标签，记录校验人、校验结果、校验日期和待校日期。5.4.4 注意避免仪器的交叉污染。一次性器具使用后要消毒。重复使用的玻璃仪器皿应有效地清洗。最好能配备一台以上的灭菌锅。5.5 试剂和培养基5.5.1 使用合格的试剂和培养基 实验室人员应确保使用合格的试剂和培养基，向有良好信誉的供应商采购，建议使用无水培养基或市售已配好的培养基。受潮结块或变色的培养基应丢弃。5.5.2 市售培养基应标明培养基名称，收货日期和启用日期。实验室培植的培养基应表明培养基名、配制日期或过期日期、配制人。试剂还需标明性质：可燃、腐蚀、有毒和普通四类。5.5.3 根据供应商的水明来配置培养基、溶液及缓冲液。在配置培养基、溶液及缓冲液时要使用蒸馏水或去离子水。5.5.4 遵循“先进先出”的原则，各种试剂培养基应在产品保质期内使用。无菌培养基应贮存在低温、干燥处、可保存三年。包装打开后，须在6个月内使用。过期的培养基应丢弃。5.5.5 配置好的培养基在使用前应在室温下培养过夜，若染菌则丢弃。5.6 取样5.6.1 取样人员须受过无菌取样操作培训。5.6.2 样品的标示 为了实现产品的可追溯性，从收货到产品分析整个过程，每一样品的标识要明确和唯一。样品应标明名称、批号、取样时间、地点、取样人、送样人。5.6.3 样品应在收到样品4小时内完成分析，若当天无法完成分析，则须4以下冷藏过夜。5.7 微生物污染废弃物的处置 使用后的含有微生物的器具应以安全方式处置，高压消毒或烧成灰烬。所有培养物在121下灭菌30分钟后方可丢弃或清洗。5.8 实验室常规操作5.8.1 高压蒸汽灭菌 应根据仪器说明书使用高压灭菌锅，我公司杀菌锅的使用请参照文件准备工作中3.3条。5.8.2 火焰法灭菌请参照文件NBZQB/SOP017.34.QC微生物检验准备工作标准中3.4条。5.8.3 实验准备（工作环境、培养基、无菌水、空瓶） 所有设备使用前必须消毒。有的材料（如滤膜、培养皿和移液管等）可购买无菌包装的产品。(1) 工作环境 在进行实验前必须对无菌室和超净工作台进行消毒，打开紫外灯消毒30分钟。实验完成后应及时整理和情节台面。(2) 培养基 不同的培养基配置方法也不同，可根据实际瓶上标明的方法配制。 一般方法是先用热蒸馏水是培养基完全溶解，在灭菌。注意，培养基的灭菌不可过热和超时，如发现灭菌后的培养基颜色过深，则丢弃重配。培养基装量不超过容器的75%体积。灭菌后冷却至室温，保存于4冰箱中。 在使用前，沸水浴15分钟，融化培养基，冷却后至46待用。为确保培养基的有效成分，灭菌后的培养机只可冻融一次。(3) 无菌水 再待旋盖的耐热耐压玻璃瓶中加入适量蒸馏水，旋上旋盖并留有空隙，切勿旋紧旋盖。在高压锅中121灭菌15分钟。(4) 空瓶 旋松空瓶瓶盖后，在高压锅中121灭菌15分钟。5.8.4 使用空白对照使用空白对照，以检测所用无菌水、设备和培养基的灭菌效果。每个系列的测试至少需做一个空白对照。在空白对照测试中，空白与样品检测须使用同一设备及试剂，完成同样的操作过程。5.8.5 培养 根据不同的测试目的选择培养条件，如细菌总数计数在351培养72小时，霉菌酵母计数在281培养5天，大肠杆菌菌群在351培养24小时。 完成实验后，培养皿需倒置在适当温度的恒温培养箱中培养。恒温培养箱中应放一杯水保持湿度，定期检视培养物。5.8.6 菌落计数 请参照GB4789.2-94 GB4789.3-94附表1设备维护设备要求频率培养箱、冰箱、烘箱清洗消毒设备内表每月一次水浴排空、清洗、消毒、灌注每月一次高压灭菌锅目测垫圈、清洗并排空水箱常规检查全面检修每年一次耐压舱安全检查每年一次无菌室全面检修，机械检查半年一次超净工作台检修，机械检查供应商建议显微镜清晰，全面检修半年一次PH计清洗电极使用时天平清洗使用时检修 每年一次无菌注射器清洗消毒 使用时实验室清洗消毒工作区域每天清洗消毒地板、水槽每周一次清洗消毒其他设备表面每季度一次紫外灯更换紫外灯管每半年一次附表2设备校正设备 要求频率参考温度计和参考热电偶可追溯性校正五年一次工作温度计工作温度范围内，用参考温度计校正每年一次天平可追溯性校正每年一次校正砝码可追溯性校正两年一次检验砝码用已校正的砝码校正每年一次玻璃量具用比重法校正每年一次显微镜可追溯性校正初次使用时湿度计可追溯性校正每年一次附表3设备性能验证设备 要求频率温控设备（培养箱、水浴、冰箱）确保温度的稳定性和一致性初次使用时，维修或调节后监控温度每天/每次使用灭菌锅