在体小肠吸收实验.doc

专业：_姓名：_学号：_日期：_地点：_实验报告课程名称：_指导老师：_成绩：_实验名称：_实验类型：_同组学生姓名：_一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得一、实验目的1、掌握大鼠在体肠管泵循环法研究吸收的试验方法。2、掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数（ka）和吸收半衰期t1/2 的方法。二、实验原理1、研究药物消化管吸收试验方法：体外试验法、在体试验法和体内试验法。2、消化管吸收药物主要方式是被动扩散。 这种形式的吸收不消耗能量，其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：-dQ/dt=DKS(C-Cb)/h（1） -dQ/dt=PSC/h=kC（2）dQ/ dt：分子型药物的透过速度D ：药物在膜内的扩散系数k ：药物在膜/水溶液中的分散系数C ：消化管内药物浓度Cb ：血液中的药物浓度h ：膜的厚度式（2）说明药物透过速度属于表观一级速度过程：以消化液中药物量的变化率dx/dt表示透过速度，则：-dX/dt=KaX lnX=lnX0-KatlnX对取样时间t作图，可得一直线，从直线的斜率可求得吸收速度常数ka，其吸收半衰期t1/2为：t1/2 0.693/Ka 小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余的药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试液的体积，再根据测定的药物浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。三、实验仪器及试剂仪器：蠕动泵试剂：供试液（SD浓度：20ug/ml、酚红浓度：20ug/ml）、酚红液（酚红浓度：20ug/ml）、20%乌拉坦、生理盐水、0.1%NaNO2溶液、1mol/L盐酸、0.2mol/L NaOH、0.5%氨基磺酸铵(NH2SO3NH4 )溶液、0.1%萘乙二胺溶液四、实验步骤1、循环试验的操作（1）恒温水浴调节：将水浴温度调节为370.5。（2）供试液的准备：量取75-80ml供试液加入循环装置的烧瓶中，置恒温水浴中预热至370.5。（3）生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37备用。（4）蠕动泵流速的调节：调节流速为5ml/min和2.5ml/min。 （5）大鼠麻醉：取大鼠一只称重，按1.1g/kg体重腹腔注射乌拉坦（浓度为20%）麻醉，并固定于固定台上。（6）小肠两端插管；沿大鼠腹部中线打开腹腔（约3cm），在12指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径为0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。（7）肠管洗涤：用注射器将37的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。（8）作成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，作成回路，开动蠕动泵，其流速为5ml/min。（9）取样：以5ml/min流速循环10min后，将流速调节为2.5ml/min时，立即自供试液烧瓶中取样两份（1ml和0.5ml各一份），分别作为SD和酚红零时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2ml，其后每隔15min亦按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。 2、SD的测定取样品1ml置10ml带塞试管中加入1mol/LHCl 5ml，摇匀，加0.1% NaNO2 1ml，摇匀，放置3min加0.5% NH2SO3NH4 1ml，摇匀，放置3min再加0.1%萘乙二胺2ml，摇匀，放置20min。在550nm的波长处测定吸收度。比色空白液:取酚红液1ml代替样品，其余操作与样品处理一致。3、酚红的测定取样品0.5ml置10ml带塞试管中，加0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀，在555nm的波长处测定吸收度。比色空白液：0.2mol/LNaOH五、实验数据记录和处理1、标曲回归方程：SD：y=0.0210x-0.0332(R2=0.9981)酚红：y=0.0153x+0.0082(R2=0.9973)2、SD和酚红样品浓度计算计算结果如下表：表 1 大鼠在体小肠吸收量的计算取样时间（h）SD酚红供试液体积ml剩余药量X（ug）lnXabs浓度ug/mlabs浓度ug/ml循环前20207515007.313 00.387 20.010 0.32620.771 72.22 1444.992 7.276 0.250.380 19.676 0.35422.601 66.76 1343.579 7.203 0.50.366 19.010 0.35922.928 66.07 1315.555 7.182 0.750.354 18.438 0.35122.405 67.87 1339.359 7.200 10.344 17.962 0.35522.667 67.37 1325.705 7.190 1.250.333 17.438 0.36823.516 65.19 1279.366 7.154 1.50.322 16.914 0.36823.516 65.39 1274.777 7.151 1.750.311 16.390 0.37223.778 64.87 1257.372 7.137 20.300 15.867 0.36223.124 66.89 1280.043 7.155 lnXt作图，得一条直线，作图如下：图 1 大鼠在体小肠吸收后剩余药量对时间的曲线求得Ka=0.0528，t1/2=13.125 h3、每小时吸收率计算 每小时吸收率（%）= （零时间剩余药量-1h的剩余药量 ）/零时间剩余药量 * 100% =8.26%六、实验结果及分析实验结果详见实验数据记录七、讨论心得思考题：1、在体吸收实验法的特点是什么？在体试验法不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走,能避免胃内容物排出及消化管固有运动等的生理影响，对溶解药物是一种较好的研究吸收的试验方法。但本法只限于溶解状态药物，并有可能将其它因素引起的药物浓度的变化误作为吸收.。2、影响实验结果的主要因素有哪些？主要因素有：大鼠手术是否顺利，小肠内容物是否洗净，所取得药物量是否准确，蠕动泵的转速调节等。3、供试液中为什么要加入酚红？小肠在吸收过程中，不仅吸收