企业培训_尿液分析试纸条产品培训讲义

尿液分析试纸条产品培训讲义 第一章尿液分析试纸条发展史 多联试纸之所以受到重视 是因为它使用非常方便 便于保存 具有快速 准确等殊多好处 所以在本世纪受到科技界的重视 并得以快速发展 试纸条问世于1956年 由美国Ames和Lilly两家公司几乎同时创建了尿糖试纸产品Clinistix和TestTape 1957年Ames研制出尿蛋白试纸 1959年研制出GLU PRO pH试纸Combistix 直至现在的十项尿液分析试纸条 自从1956年出现正式的用于尿检的试纸以来 14年间未见国内有任何关于尿液分析试纸检验的报道 直到1972年才见到上海市第六医院和北京首都医院关于BLD PRO GLU KET pH尿液试纸等5篇报道 由于当时的客观条件限制 没能得到进一步发展和应用 所以1956年到1985年的29年间国内没有正式独立的研制 生产机构 1986年国内企业从日本引进了试纸的生产技术和设备 为实现试纸的国产化 缩小与世界先进技术水平的差距 1992年我公司开始这一课题的研究 生产 迅速平抑了国内市场的价格 结束外国8A试纸在中国的经济 技术垄断地位 随后我公司在1994年在国内率先研制出10联试纸 增加LEU SG 于1997年研制出VC试纸 这标志着我公司尿试纸的科研生产达到了世界先进水平 近十年来 临床检验试剂及仪器在科研 技术 生产等方面具有成熟期短 更新快等特点 尿液试纸将向着品种多 技术性能强的方面发展 由于计算机技术的高速发展 进一步推动尿液分析技术更新 硬件更新 提高了检验结果的可靠性 提高了工作效率 第二章尿液试纸反应原理及应用注意事项 第一节尿液酸碱度 反应原理pH的反应原理是基于pH指示剂法 目前 一般的尿pH试纸中含有甲基红 pH4 2 红 6 2 黄 溴百里香酚蓝 pH6 7 黄 7 5 蓝 结果判断 pH测定结果的判断比其它试验结果的判断难一些 因为尿pH的波动幅度大而快 而正常人和病人的尿pH没有明显的不同 所以尿pH单独使用的意义不大 但与其它临床资料配合起来一同分析 则可能成为重要的资料 它的临床意义如下 A尿pH的变化可了解体内酸碱平衡的情况在代谢性酸中毒 癫风 糖尿病 肾结石 IV型肾小管酸中毒 白血病 坏血病时常伴有强酸性尿 B在碱中毒 原发性醛固酮增多症 肾小管酸中毒 型 泌尿系统变形杆菌感染时 可呈碱性尿 注意事项 3 1尿标本不宜长时间存放 否则可因细菌分解脲产生氨 使尿液呈碱性 3 2该pH试纸无任何pH缓冲能力 操作不当会因其它试剂区流过来的酸碱试剂干扰造成结果的偏差 也会因试纸载台大量存有前几次测试时留下来的试剂及尿的污染物造成本次实验的污染 使检验结果出现偏差 第二节尿比重的测定 反应原理比重试纸的反应原理是基于高分子电解质 甲基乙烯基醚 顺丁烯二酸的共聚物是弱酸性 COOH基 离子交换体 而尿中以盐形成存在的电解质 M X 在尿中离解出M 阳离子 以Na 为主 它与离子交换体中的氢离子置换 释放出氢离子 H 而 H 使pH指示剂溴麝香草酚蓝产生颜色变化 结果判断2 1尿比重的参考值在1 015 1 025之间 早晨第一次尿的比重最高 通常 1 020 在多次随机尿标本中 尿比重在1 025以上 提示肾浓缩功能正常 2 2尿比重增高 表示尿液浓缩 见于急性肾炎 蛋白尿 糖尿病 高热 大量出汗脱水 心功能不全等 2 3尿比重减低 表示肾脏浓缩机能减退 见于尿崩症 使用利尿剂 慢性肾炎 精神性多饮等 2 4尿比重比较固定 尿比重变化不大 一般固定在1 010左右 呈等张尿 表示肾实质性严重损伤 2 5尿比重的应用 对尿液中红细胞是否出现溶血具有参考意义 尿比重偏低 可使红细胞形态均一性向多形性转变或崩解 注意事项3 1强酸强碱尿会影响目测测定结果 因为当尿pH 7 0时 尿液中将存在 OH 离子 它的存在会中和比重测试反应过程中释放出来的氢离子 H 减少 H 与指示剂的反应 使结果偏低 所以在目测时 当尿pH 7 0时 应在测定结果上加0 005作为对由碱性尿造成偏差的补偿 而在酸性尿时 由于试纸的缓冲体的作用 影响较小 所以在目测时不予修正 但在使用尿分析仪时 则不用人工修正 因为它本身带有修正程序 自动修正由尿pH不同引起的偏差 3 2尿中含有葡萄糖或大量尿素等非离子化合物时 可导致锤式比重计和折射式比重计测定结果偏高 而试纸的测定结果偏低 因为试纸测比重是基于离子反应原理 临床判断时 应以比重计测值为准 3 3当尿蛋白浓度增高时 对比重计的测定会产生影响 教科书规定 溶液中蛋白质每增加1g dl 折射仪法应在原测定值的基础上减去0 005 而锤式比重计应减去0 003 3 4因为试纸灵敏度及精度不够 试纸法测新生儿尿比重方面具有局限性 因为新生儿的尿比重较低 波动范围小 仅在1 002 1 004之间 3 5NCCLS 国际医学检验标准化组织 建议 折射式比重计作为试纸法测定比重的参比方法 折射式比重计可用去离子水或蒸馏水和已知浓度溶液监测其测量结果的准确性 如纯水比重为1 000 氯化钠溶液 0 513mol l 比重为1 015 0 856mol l比重为1 022 第三节尿蛋白试纸 反应原理某种pH指示剂在一定的条件下产生出阴离子 与带阳离子的蛋白质 主要是白蛋白 结合发生颜色的变化 称为指示剂蛋白误差法 这一原理现被应用于蛋白质的测定 结果判断 尿蛋白在临床上是一个重要指标 如果出现阳性 就表示不正常的警告 它主要用于肾脏和其它疾病的诊断及辅助诊断 注意事项 3 1试纸在对具有高度缓冲能力的碱性尿 如pH 8 且SG 25时 使试纸进行目测可得到假阳性反应 在仪测时 某些仪器没有对这方面的修正 可因上述因素产生假阳性结果 如对检验结果有疑问时可将尿用醋酸调pH5 6 再进行实验 3 2不同的方法学对不同的蛋白的敏感度不同 试纸法对白蛋白的灵敏度高 对球蛋白灵敏度低 当球蛋白达到550mg dl才出现 反应 而加热乙酸和双缩法对白蛋白和球蛋白具有相同的灵敏度 由于方法学的不同 测定结果可能会出现很大的差异 如果加热乙酸或双缩脲测定结果高于试纸 将预示着尿中含有球蛋白 试纸对蛋白的灵敏度 白蛋白 球蛋白 粘蛋白 3 3季胺盐 聚乙烯吡咯烷酮 喹啉等含氮杂环化合物 可造成试纸的阳性反应 而某些洗涤剂污染尿液时 会得到较低的结果 3 4大量地饮水 则尿量增大 可对尿液产生稀释作用 使其含量达不到试纸的灵敏度 造成漏检 3 5阴道分泌物造成的假阳性 有人建议用中段尿进行检验 但可因受检人掌握不好 或因尿量小 不能排除分泌物的影响 另外 有时需要前段尿检验 更难排除这个问题 所以在这方面应予注意 采取必要的方法 可参照NCCLSGP16 A文件的规定 以取得可信的结果 D 葡萄糖GOD葡萄糖酸 H2O2H2O2PODH2O O 新生态 O 指示剂 还原态 指示剂 氧化态 第四节尿糖试纸反应原理 结果判断正常人群中尿糖含量极微 24小时尿的尿糖浓度为5 15mg dl 用一般常规方法检查不出来 而尿糖不正常的出现是由两类情况引起的 一是生理性的 饮食 应急 妊娠 二是病理性的 注意事项 3 1在临床上有时会用班氏试剂法对照尿糖试纸测定的结果 由于试纸采用酶法原理 而班氏法采用铜还原法 这将导致两法的测定结果存在差异 试纸的特异性强 而班氏法可与尿内所有的还原性糖 乳糖 半乳糖等 及维C等反应 在试纸法中呈阴性的标本 在班氏法中有可能呈阳性反应 3 2试纸法的灵敏度高 30 50mg dl可呈阳性反应 而班氏法灵敏度低 150mg dl呈阳性反应 3 3尿中的VC可对试纸法测定葡萄糖的结果产生影响 因为在反应的后一步是氧化还原反应 既可氧化指示剂又可氧化尿中的VC 当尿糖与试纸反应生成新生态氧时 VC与指示剂竞争还原新生态氧 使测试结果偏低 或出现假阴性 所以应选用有抗VC能力的试纸 3 3 1尿标本存放时间过长 可因细菌酵解及氧化作用使葡萄糖浓度下降 特别是低浓度 100mg dl左右 的标本受到的影响非常大 8小时25 C尿糖标本可能降到30mg dl以下 而尿标本采取防腐措施时尿糖几乎不会下降 3 3 2血糖增高尿糖也同样增高 它具有一定的相关性 但不是必然性 因为血糖高峰期时 并不是尿糖高峰期 这需要一个代谢过程 有的学者认为尿糖的高峰期约为餐后2h 因为有些轻微糖尿病患者没进餐前尿糖的水平并不高 甚至呈阴性反应 这有可能造成误诊或对病情估计不足 3 3 3重症糖尿病患者的尿糖水平持续不下 可以用餐前做尿液检验 有利于重症糖尿病的早期发现 第五节尿酮体试纸 尿酮体包括乙酰乙酸 丙酮 羟基丁酸 后者虽不属于酮类 但经常与前二者伴随出现 因而统称为酮体 酮体是脂肪分解代谢过程中的产物 脂肪氧化后产生乙酰辅酶A 在肝脏内乙酰辅酶A可缩合成乙酰乙酸 而乙酰乙酸可被还原成 羟基丁酸或脱羧后形成丙酮 正常人血液中酮体约为2 4mg dl比例分别为 乙酰乙酸20 丙酮2 羟基丁酸78 尿中酮体含量为20 50mg 24h 其中乙酰乙酸为9mg 丙酮约为3mg 羟基丁酸为25mg ONa2 Fe CN 5NO CH3COCH2 COOHNaOHNa3 Fe CN 5N CH C CH2 COOH 亚硝基铁氰化钠乙酰乙酸紫色OH紫色 尿酮体检测反应原理 H2O 结果判断 正常情况下 肝脏产生的酮体经血液运送到组织 氧化生成二氧化碳和水并产生能量 当糖代谢发生障碍时 脂肪的分解代谢增多 这时肝内酮体产生的速度超过组织利用的速度 血中酮体增多 过多的酮体从尿中排出 可大概分为以下四种情况 2 1糖尿病酮酸中毒由于糖吸收减少 为满足机体需要 体内分解脂肪产生酮体 2 2非糖尿病性酮症如感染性疾病 肺炎 伤寒 败血症 结核等发热期 严重呕吐 腹泻 饥饿 全身麻醉后 孕期等 可出现酮尿症 2 3中毒 如氯仿 乙醚麻醉 磷中毒等 注意事项 3 1尿中的乙酰乙酸 丙酮等 都是挥发性物质 不能长期存放 3 2乙酰乙酸受热后逐渐变成丙酮 这会使对丙酮不敏感的试纸测定产生偏差 3 3尿中乙酰乙酸存在的量比丙酮多 所以有的厂家侧重于乙酰乙酸的检验 而有的试纸侧重于丙酮的检验 较好试纸对乙酰乙酸 丙酮都能测试 因此 各厂家的试纸测定结果难能统一 应加以区分 3 4不同病程及病因的酮体成分不同 在糖尿病酮酸中毒早期尿酮体的主要成份是 羟基丁酸 而试纸对其不反应 可导致对酮体估计不足 在糖尿病酮酸中毒缓解后 乙酰乙酸含量反而比急性期初始多 因此 要注意病程发展分析判断 第六节胆红素试纸 胆红素是血红蛋白分解代谢的中间产物 是胆汁中的主要成份 在临床上将胆红素分为直胆和间胆 在胆汁和尿中存在的胆红素是直接胆红素 反应原理胆红素在酸性条件下与重氮盐偶联生成偶氮胆红素 即重氮盐作用于胆红素中央的碳 使其断开并与其结合形成2个分子的偶氮胆红素 偶氮染料 结果判断2 1肝细胞损伤肝细胞对胆素原的清除功能下降 尿中胆红素排出量增多 可较敏感地反映肝细胞的损伤 临床经验表明在病毒性肝炎早期未出现黄疸之前 往往已可发现尿中胆素原族增多 2 2溶血性黄疸如败血症 蚕豆病 异型输血使红细胞大量破坏 血红蛋白释放过多 转化为胆红素 这时血中未结合胆红素 间接胆红素 增多 而尿胆红素为阴性 注意事项 3 1尿中的胆红素 放置时间长会氧化变成胆绿素 产生假阴性反应 光照会加速这个反应 3 2当尿中VC浓度大于1 4mmol l时及含有大量的亚硝酸盐时 会使较低浓度的胆红素产生假阴性 3 3尿中只能出现直接胆素 胆红素双葡萄酸 极化的 可溶于水 不会出现间胆 游离胆红素 非极化 不溶于水 第七节尿胆原 反应原理尿胆原测定在试纸中有醛法和重氮盐法 醛法 在酸性条件下与对 二甲氨基苯甲醛发生醛化反应 即URO与醛缩合生成红色的缩醛化合物 目前试纸大多数采用重氮盐法 其原理是尿胆原在酸性条件下 与重氮盐偶联生成紫红色染料 结果判断希拉 希洛克是临床尿胆原方面的世界著名的权威之一 她强调尿胆原是反映肝细胞功能紊乱的灵敏指针 尿胆原比胆红素更能代表肝功能 另外 尿胆原对肝炎恢复期可提供有用的监护资料 下表注明各种不同情况下尿液中尿胆原出现的情况 现代临床上找出了它们的对应关系 对尿胆原和胆红素的不正常出现 分为肝前性 溶血 败血症 蚕豆病 异型输血等 胆原性 病毒性肝炎 中毒 肝硬化等 胆后性 梗阻性黄疸 见下表 表1 注意事项 3 1正在使用抗菌治疗中的患者尿胆原会大幅度下降 这是由于抗生素治疗过程中 肠道正常的菌群受到抑制 不能将胆红素转化成尿胆原 所以在使用抗生素治疗过程中的人 在尿胆原检验时无临床意义 3 2尿胆原放置时间长时变成尿胆素 光照可加速这个反应 或长菌后出现大量的NIT 会使URO测定结果偏低 甚至出现假阴性反应 3 3利用重氮盐法反应原理的试纸 可因长时间光照降低灵敏度 阳光破坏重氮盐 3 4凡是能干扰Ehrlich试剂的药物都能干扰醛法试纸 如内源性干扰物 卟胆原 吲哚 与黑素原产生红色反应 与磺胺类 对氨基水杨酸盐产生蓝浊反应 与氯丙嗪等噻吩化合物显紫色等 第八节亚硝酸盐试纸 尿中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸或对氨基苯砷酸发生重氮化反应 生成重氮化合物而重氮化合物与四氢苯并喹啉 3 酚 见式 1 或N 1 萘乙二胺盐酸盐 见式 2 偶联 生成红色偶氮染料 反应原理 结果判断 用于因含有硝酸盐还原酶细菌感染引起的泌尿系统疾病的诊断 亚硝酸盐如果出现阳性反应 预示着尿中含有10万个 ml以上的细菌 注意事项3 1当尿中硝酸盐缺乏时 虽然尿中有细菌也不能被检测出来 3 2由于尿中亚硝酸盐的出现受到其它因素的影响 如尿中是否存在硝酸盐 细菌是否含硝酸盐还原酶 是否有足够长的时间使细菌的还原酶还原硝酸盐等诸多因素限制 亚硝酸盐的量并不与细菌的量呈正比关系 3 3引起菌尿症的微生物 表 3 3 4由于尿液存放超过3 4小时后 空气中的细菌在尿中繁殖产生假阳性反应 在夏季30 C存放6h时 有80 的尿会出现假阳结果 3 5使用抗生素的人 由于尿中的细菌活性受抑制产生假阳性反应 3 6尿中含有大量的VC 达50mg dl时 可造成NIT检验假阴性结果 3 6大量饮水稀释尿中本已含量极微的NIT超过了试纸的灵敏度 出现阴性结果 第九节血试纸 尿液中的红细胞或其被破坏释放出的游离血红蛋白均含有亚铁血红素 亚铁血红素具有过氧化物酶样活性 可使过氧化物分解释放出新生态氧 新生态氧氧化指示剂 使指示剂出现颜色反应 其颜色的深度与血的浓度呈正比 结果判断尿中含血是肾脏或泌尿道损伤的一个重要指标 尿出现血对于不同的对向患者有不同解释 应根据临床情况进行判断 注意事项3 1由于女性分泌物 经血常可引起测定结果 出现假阳性 应采取必要的采尿措施 否则无法判断血是来自于泌尿道还是阴道 如果没能避免这个问题 血这项检验在女性人群中是没有意义的 3 2试纸既可测定红细胞又可测血红蛋白 而显微镜只能观察到有形物质 如红细胞破碎了 这时镜检为阴性 而试纸测检为阳性 有时被误认为假阳性 由于这个问题试纸法与镜检法难能有统一对应的关系 同时也体现出试纸在这方面的优越性 3 3当尿中含有大量VC时 100mg dl 会导致假阴性结果 为了避免这个问题我公司研制出了抗VC的BLD试纸 抗VC干扰能力达到100mg dl 具体见下表 静注VC5小时内不宜用尿液分析试纸进行尿BLD的测定 因为尿中可能出现280 610mg dl的VC 高峰尿 可能干扰实验出现假阴性结果 此时建采用镜检法 口服VC100 400mg 三次 d 晨尿中的VC可达到15 80mg dl 如试纸是有抗VC能力 这个浓度不足以干扰实验 试纸测值 Vc浓度 第十节白细胞试纸 反应原理吲哚酚酯在中性粒细胞中的酯酶的水解作用下 酯键断开 产生游离酚 而游离酚与试纸中的重氮盐偶联 生成紫色偶氮染料 或游离酚氧化缩合成蓝紫色染料 注意事项2 1镜检与试纸法由于方法学的不同检验结果难以对应 试纸法是计算个 l 而镜检方法很多 通过我们在临床上调查 有如下情况 a取10ml尿离心 取沉渣镜检 b取尿1滴 用高 低倍镜镜检 c取尿1滴或沉渣在血计池中镜检 a b两法只能是定性 现在有一种尿定量分析板 庖氏计数板 与过去的区别是 过去是按高 低倍镜每个视野来报 1995年中华医学会组织的全国20多位专家在武夷山召开的尿液标准化推荐了一个是体操作规程 并建议逐步推广定量板报告方式 xx l 这有利于显微镜检验的程度与试纸法测定结果的相对统一性 2 2一定要用混匀后的尿进行检验否则会因有形物质在尿溶液中分布不均匀造成偏差 2 3有时仪器载台上带有污染物 试剂 污染试纸造成假阳性反应 2 4白细胞试纸可因受潮 产生水解反应 出现假性性 所以要避免试纸受潮 另外 试纸受阳光的强烈照射 破坏重氮盐 出现假阴性反应 反应原理VC结构式中有1 2 烯二醇的还原性基团 能还原2 6 二氯酚靛酚使其变成还原态的2 6 二氯二对酚胺 试纸由蓝色变成黄色 第十一节VC试纸 结果判断 2 1正常人VC的排泄量为20 30mg dl 2 2口服VC500mg后 3 10mg 4h时为正常 10mg 4h为充裕 3mg 4h为不足 2 3高浓度VC对某些不抗VC干扰的试纸会产生严重的影响 而带VC的试纸条 可根据VC的测定结果 估计其影响的程度 注意事项 3 1当尿中会有其它还原剂时 可干扰测试 使结果偏高 如 半胺氨酸 硫代硫酸钠 二硫代苏糖醇等 3 2当尿中含有氧化剂时 可干扰测试 使结果偏低 如重铬酸钾 三氯化铁 高锰酸钾 碘酸钾等等 3 3VC在碱性尿中极不稳定 容易分解 所以尿样应及时测定 以免测定结果偏低 第三章工作中的注意事项 第一节各种阴性尿的调配 一总则1 所有阴性尿均要求pH和比重 SG pH用酸度计进行测试 SG用折射式比重计进行测试 2 所有阴性尿是指用四份符合要求的自然尿混合成的尿样本 3 当阴性尿的pH不符合要求时 用满足要求 除pH外 的自然尿来调节pH 即当pH低于要求时 用高pH的自然尿来调节 当pH高于要求时 用低pH的阴性尿来调节 4 当阴性尿的SG不符合要求时 用满足要求 除SG外 的自然尿来调节SG 即当SG低于要求时 用高SG的自然尿来调节 当SG高于要求时 用低SG的阴性尿或蒸馏水来调节 5 特殊情况下 pH可用顺丁烯二酸或NaOH溶液调节 SG可用NaCl溶液往高调 6 PRO和BLD特尿调配时可用一份或多份符合要求的自然尿 二各种阴性尿的要求 第二节标准液的配制 1 每天必须在一小时内配完当天所需的所有项的标准液 2 标准液的具体配制方法见各项的工艺文件 3 在配制中应注意移液管的使用和清洁 第四节半成品和成品的检验 1 具体检验标准和抽样标准见工艺文件 2 检验记录应及时 真实 无涂改 3 每项半成品和成品均需检测质控液 4 外包装检验即是检测产品的外包装 进行塑封工序后的产品检验 是产品出厂前的最后一个检验点 外包装检验应注意如下事项 1 产品所用的包装与产品是否配套 与标准封样是否一致 出口产品与定单要求是否一致 2 外包装物是否干燥