样品采集的基本知识.doc

样品采集的基本知识（一）采样的原则采样时应从胸腔到腹腔，先采实质器官做到无菌，避免外源性的污染，最后采污染的组织，如胃肠组织、粪便等。采取的病料必须有代表性，采取的组织器官应病变部位明显。采取病料时应根据不同的疫病或检验目的，采其相应血样、活体组织、脏器、肠内容物、分泌物、排泄物或其他材料。病因不明时，应系统采集病料。病料应在使用治疗药物前采取，用药后会影响病料中微生物的检出。死亡动物的内脏病料采取，最迟不超过死后6小时 (尤其在夏季)，否则，尸体腐败，难以采到合格的病料。防止污染环境，防止疫病传播，做好环境消毒和废弃物的处理。（二）蹄疫样品的采集、保存和运送。口蹄疫病毒在病畜的水疱皮内及其淋巴液中含毒量最高。在水疱发展过程中，病毒进入血流，分布到全身各种组织和体液中。发热期血液内的病毒含量最高，退热后奶、尿、口涎、泪、粪便等都含有一定量的病毒。1、组织样品。（1）样品的选择：用于病毒分离、鉴定的样品以发病动物(牛、羊或猪)未破裂的水泡皮和水泡液为最好。对临床健康但怀疑带毒的动物可在扑杀后采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品作为检测材料。（2）样品的采集和保存：样品采集部位可用清水清洗(切忌使用酒精、碘酒等消毒剂消毒、擦拭)，剪取病畜的新鲜水泡皮3-5克放入灭菌小瓶中，加适量50%甘油-磷酸盐缓冲液 (pH7.4)，加盖密封；也可采用无菌器具采集水泡液至少1毫升，装入灭菌小瓶中(可加适量抗菌素)，加盖密封尽快冷冻保存。在无法采集水泡皮和水泡液时，可采集淋巴结、脊髓、肌肉等组织样品3-5克装入洁净小瓶内，加盖密封尽快冷冻保存。样品的包装瓶上均要贴上标签，写明采样地点、动物种类、编号、时间等。2、牛、羊食道-咽部分泌物(0-P液)样品。（1）样品采集:被检动物在采样前禁食(可饮水)12小时，以免胃内容物反流污染O-P液。采样探杯在使用前经0.2%柠檬酸或2%氢氧化钠浸泡5分钟，再用洁净水冲洗。每采完一头动物，探杯要重复进行消毒并充分清洗。采样时动物站立保定，将探杯随吞咽动作送入食道上部10-15厘米处，轻轻来回移动2-3次，然后将探杯拉出。（2）样品的保存:将采集到的8-10毫升O-P液倒入25毫升以上的灭菌玻璃容器中，容器中应事先加有8-10毫升细胞培养液或磷酸缓冲液(0.04摩尔/升、pH7.4)，密封后充分摇匀并尽快冷冻保存，用于病原检测，做出追溯性诊断。3、血清怀疑曾有疫情发生的畜群，错过组织样品采集时机时，可无菌操作采集动物血液，每头不少于5毫升。无菌分离血清装入灭菌小瓶中，加盖密封后冷藏保存，通过检测抗体，做出追溯性诊断。采集样品时要填写样品采集登记表。装样玻璃容器必须密封，需加贴防水标签。样品运送前将样品玻璃容器装入金属套筒中，套筒应填充防震材料，加盖密封，与采样记录一同装入专用运输容器中。专用运输容器应隔热坚固，内装适当冷冻剂和防震材料。外包装上要加贴生物安全警示标志。（三）禽流感的样品采集、保存和运输。病毒主要在呼吸道黏膜细胞内增殖。1、病禽：至少从5只濒死禽采集样品。（1）样品包括：泄殖腔拭子和气管拭子(置于缓冲液中)各5个(小珍禽可采集新鲜粪便)；气管和肺的混样5个，肠管及内容物的混样5个；肝、脾、肾和脑等组织样品(不能混样)各5个。 （2） 采集方法: 泄殖腔棉拭子：将棉拭子插入肛门并旋转，使粪便沾在拭子上，后放在运输缓冲液中或专用液中。气管棉拭子：活鸡采样时，将棉拭子插入活鸡的气管内，轻轻擦拭气管壁并放入缓冲液中。死亡动物采气管样品时，可在肺和气管离体情况下进行采集，应将棉拭子插入较深部位用力擦拭，并按上述方法将棉拭子放在运输缓冲液中。 （3）血样：分别采集5-10个病禽的血样(急性发病期血清)。采集时使用一次性采血器，心脏或翅静脉采血，每只禽采血样2-3毫升，经离心或自然析出血清后，将血清移到指形管中，封口，并贴好标签。不同禽只的血样不能混合。 2、病死禽。 无发病禽时，可从死亡不久的病禽采样，采样要求同病禽。棉拭子单独放入容器，容器中盛放含有抗菌素的PH值为7.0-7.4的磷酸盐缓冲液。抗生素的选择视当地情况而定，组织和气管拭子悬液中加入青霉素(2000国际单位/毫升)、链霉素(2000国际单位/毫升)、庆大霉素(50微克/毫升)、制霉菌素(10000国际单位/毫升)。但粪便和泄殖腔拭子所用的抗生素浓度应提高5倍。加入抗生素后pH值应调至7.4。 3、样品的保存和运输。血样要单独存放，不能混合；样品应密封于塑料袋或瓶中，置于有制冷剂的容器中运输，容器必须密封，防止渗漏;样品若能在24小时内送到实验室，冷藏运输。否则，应冷冻运输。若样品暂时不用，则应冷冻(最好-70或以下)保存。（四）猪瘟(蓝耳病）样品的采集。猪瘟病毒复制的主要部位是扁桃体，然后经淋巴管进入淋巴结，继续增殖，随即到达外周血液，从这时起病毒在脾、骨髓、内脏淋巴结和小肠的淋巴结组织繁殖到高滴度。 样品包括：血清、骨髓、淋巴结、扁桃体、肾脏、脾脏。（五）新城疫样品的采集。新城疫病毒存在于病鸡所有器官、体液、分泌物和排泄物，以脑、脾和肺含毒量最高，骨髓含毒时间最长。 样品包括：咽喉、泄殖腔拭子、脾、气管、肺、脑、血清等（3）30%甘油盐水缓冲液 甘油 30毫升 氯化钠 (NaCl) 4.2克 磷酸二氢钾 (KH2PO4) 1.0克 磷酸氢二钾 (K2HPO4) 3.1克 0.02%酚红 1.5毫升 蒸馏水(或无离子水)加至100毫升，加热溶化，校正pH为7.6， 100千帕15分钟灭菌，冷却后40冰箱中保存备用。（4） 棉拭子用抗生素PBS(病毒保存液) 取上述PBS液，按要求加入下列抗生素:喉气管拭子用PBS液中加入青霉素 (2000国际单位/毫升)、链霉素 (2毫克/毫升)、丁胺卡那霉素 (1000国际