遗传实验课总结.ppt

有丝分裂 材料 黑麦根尖 1 材料的准备和取材选取黑麦种子浸泡于水中 使种子吸胀 浸泡时间视不同作物而异 然后将吸胀的种子捞出 放在垫有滤纸的培养皿中 再将培养皿置于25度条件下 温箱 发芽 待根长约1 1 5cm时此时大量细胞进行分裂时剪根 一般以上午10 30 11 30为宜 2 预处理 a 目的 为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数 在固定之前应用理化因素进行预处理 这样可以改变细胞质的粘度 抑制或破坏纺锤丝的形成 促使染色体缩短和分散等 b 预处理方法 低温预处理 剪取黑麦根尖放入盛有蒸馏水的指形管中 再将指形管置于冰水共存的冰瓶中 将冰瓶置0 3度冰箱处理24小时 染色体数较多的材料可适当延长处理时间 固定 a 目的 采用各种渗透力强的固定液将植物的组织 细胞迅速杀死 使蛋白质沉淀并尽量保持其原有状态 b 固定液的配制 Carnoy s固定液 冰醋酸 纯酒精 1 3固定时间 24hr 4 解离 染色解离 酸解法 用清水冲洗根尖几次 将根放入1mol L盐酸溶液中 解离是为了使胞间连丝离解掉 使细胞分散 便于压片 染色 染液 醋酸洋红将根取出后 用清水冲洗几次 冲掉残留在组织间地酸 用醋酸洋红染色 5 制片取一条根置于载玻片上 切取根尖分生组织约0 5mm 大小2 3段 加一滴醋酸洋红 盖上盖玻片 用挑针尖轻敲根尖材料成雾状 用拇指轻压材料 镜检 减数分裂 偶线期 同源染色体相互纵向靠拢配对 称为联会 这样联会的一对同源染色体 称为二价体 偶线期所表现的这一特征时间很短 一般较难观察到 粗线期 配对后的染色体逐渐缩短变粗 含有两条姐妹染色单体 这样一个二价体中就包含了四条染色单体 故又称为四合体 在此期间各同源染色体的非姐妹染色单体间可能发生片段交换 中期 核仁和核膜消失 所有二价体排列在赤道板两侧 细胞质里出现纺锤体 每个二价体的两条染色体的着丝点分别趋向纺锤体的两极 此时最适于计数染色体的数目和观察各染色体的形态特征 第一次减数分裂后期完成染色体数目的减半 二分体 减数分裂末期I出现 一个细胞分裂形成两个染色体数目减半的子细胞 四分体 减数分裂II末期形成 最终形成四个配子 1 取材及固定 取材的时间及材料大小必须十分恰当 才能获得更多的花粉母细胞分裂相 以供观察 蚕豆 蚕豆现蕾后 于上午8 10时 视气温而定 但必须在上午11时前 摘取茎顶有效花序 将周围小叶与苞叶去掉 将花苞放入卡诺固定液中 减数分裂 2 染色制片 取出经固定的花苞 至于吸水纸上 吸去保存液或固定液 移至载玻片上 剥出花药 用解剖针截断花药 轻轻挤压 使花粉母细胞在切口处散出 滴一小滴醋酸洋红染色液 用镊子把药壁夹碎 将细胞壁残渣除去 静置染色5 10mim 再盖上盖玻片 后用挑针背部或铅笔橡皮头处轻敲 用拇指压片 镜检 果蝇唾腺染色体的观察 双翅目昆虫的幼虫期都具有很大的唾腺细胞 因为这些细胞发育到一定阶段后就不再进行有丝分裂 停止在间期 但是染色质还是不断地复制 形成约1000 4000拷贝的染色质丝 比普通的有丝分裂中期的染色体大得多 称为多线染色体和巨大染色体 巨大 是多线染色体 正常 间期DNA复制两条染色单体着丝点裂开子染色体核分裂胞质分裂果蝇 有丝分裂停止在分裂间期 DNA不断自我复制 着丝点不裂开同源染色体紧密配对 体细胞联会 所以染色体只呈现单倍数 形成染色中心 从染色体中心处伸出5条长臂 1条短臂 染色后 出现一系列宽窄不同 染色深浅不一的横纹 这些横纹的数目 位置 宽窄及排列顺序都具有种的特异性 一旦染色体上发生了缺失 重复 倒位 易位等 也可较容易地在唾腺染色体上观察识别出来 可见唾腺染色体技术是遗传学研究中一项基本的技术 果蝇唾腺染色体特点 1 幼虫选取果蝇的三龄幼虫活体当幼虫爬上瓶壁准备化蛹前 即为三龄幼虫 肥大 行动迟缓 取三龄幼虫 置于载玻片上 并滴加一滴生理盐水 观察幼虫结构 具一钝尾和带黑色口器的尖头端 2 腺体剖取 取两支解剖针 一针压住幼虫身体的近头端1 3处 固定幼虫 另一针压住幼虫头部 压点尽可能靠头部口器处 将解剖针平稳前移 使头部与身体拉开 口器部分断开 体内各器官从切口挤出 一对唾腺也随之而出 唾腺 脂肪体 解剖针 解剖针 果蝇的杂交试验 果蝇作为遗传学研究的材料的优点 果蝇的生活史 四个阶段 卵 幼虫 蛹 成虫 在20 25 培养下 14天完成一个周期 卵到幼虫大约一周左右 幼虫到成蝇大约一周左右 成蝇的寿命大约在一个月左右 为了不让亲本与F1 F1和F2成虫交配 导致数据不正确 因此 要在配好组合后一星期内移去亲本 左 雄性果蝇的左前足中 跗节基部的性梳右 雌果蝇无性梳 白眼 红眼 眼色性状 翅形性状 刚毛性状 直刚毛 卷刚毛 我们实验课涉及的果蝇类型 黑体 黑体 红眼 长翅 直刚毛三隐性 灰体 白眼 小翅 卷刚毛野生型 灰体 红眼 长翅 直刚毛 处女蝇 因为雌果蝇生殖器官有受精囊 可保存交配所得的大量的精子 能使大量的卵细胞受精 因此 在做果蝇杂交实验的时候 亲本雌果蝇必须是处女蝇 保证实验结果的可靠性 雌果蝇自羽化开始12小时之内尚未成熟而无交配能力 选择处女蝇时 先把培养瓶中的老果蝇全部除去 收集12小时之内羽化出来的新果蝇 麻醉后用放大镜在白瓷板上将果蝇雌雄分开 这时得到的雌果蝇应该全部都是处女蝇 如果要验证选取的处女蝇是否准确 先不要放入雄蝇 3天后看雌蝇是否产卵 如果产卵就不是处女蝇了 当证明确实是处女蝇的情况下再放入雄蝇 进行遗传杂交实验 分离规律一对等位基因的杂合子中 各自保持其独立性 在配子形成时 彼此分开 随机进入不同的配子 在一般情况下 F1杂合子的配子分离比例为 1 1 F2表型分离比是3 1 F2基因型分离比为1 2 1 自由组合定律支配两对 或两对以上 不同性状的等位基因 在杂合状态保持其独立性 配子形成时 各等位基因彼此独立分离 不同对的基因自由组合 在一般情况下 F1配子分离比是1 1 1 1 F2基因型分离比 1 2 1 2 F2表型比为 9 3 3 1 伴性遗传由性染色体所携带的基因在遗传时与性别相联系的遗传方式 正交 黑体 aaX X 三隐性 AXWY F1 灰体红眼 AaX XW AaX Y F2 灰红9 灰白3 黑红3 黑白1 两对性状的独立遗传实验 反交 三隐性 AAXWXW 黑体 aaX Y F1 灰体红眼 灰体白眼 AaX XW AaXWY F2 灰红3 灰白3 黑红1 黑白1 考察性状 眼色 性别正交 X X XwY反交 XwXw X Y配子X XwYXwX YF1X Xw X YXwX XwYF2X X X YX XwXwYXwXwX YX XwXwY红眼与白眼的比例为3 1红眼与白眼的比例为1 1 雌雄各占一半没有白眼雌蝇 伴性遗传 隔代遗传 交叉遗传 连锁遗传 XwsnmXwsnm 三隐性 X Y 野生型 F1 三杂合体 XwsnmX XwsnmY 三隐性 配子Xwsnm X Xw m X sn Xwsn X m X snm Xw XwsnmY姊妹交Ft 眼色w 刚毛sn 翅形m 三点测验 对于果蝇连锁遗传实验 眼色 刚毛和翅型基因在X染色体上的排列顺序以及相互间的遗传距离可以参考书本100 102页 卡方测验参考书本81 82页 实验结果分析 相符 不相符合的原因 由于果蝇麻醉过渡 致使群体数量有限 雌雄果蝇的发育不同步 雌果蝇相对发育的比较快 而雄果蝇发育的比较慢 果蝇雌雄识别以及性状的鉴别可能有误 卡方测验 遗传研究中 检验杂交试验得到的k种表现型的数目是否符合一个预期的理论比例 公