实验1大肠杆菌的培养和分离.ppt

第一章微生物的利用 实验1大肠杆菌的培养和分离 什么是微生物 乳酸杆菌 黑曲霉 微生物 结构简单 形体微小的单细胞 多细胞或没有细胞结构的低等生物 什么是培养基 三角瓶 培养皿 试管 液体培养基 扩大培养 工业生产 固体培养基 分离纯化 鉴定菌种 计数 保藏 凝固剂 琼脂 培养基的配制 提供碳元素 主要是糖类 提供氮元素 蛋白胨 牛肉膏 尿素 维生素 氨基酸和含氮碱基 H2O 良好的溶剂 NaCl 维持一定的渗透压 LB培养基的配制 LB固体培养基 蛋白胨0 5g 酵母提取物0 25g 氯化钠0 5g 加水50mL 琼脂1g 调节pH至7 6 封口膜 菌落 单细菌的克隆 菌落 在固体培养基上 由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体 霉菌 大肠杆菌 菌落的作用 鉴定菌种的重要依据 菌落特征 菌落的形状 大小 隆起程度和颜色等 大肠杆菌 大肠杆菌 革兰氏阴性 兼性厌氧的肠道杆菌 怎样无菌操作 高压蒸汽灭菌 培养皿 试管 三角瓶 枪头 玻璃三角刮刀 接种环 镊子 在121 下灭菌15min 高压蒸汽灭菌锅 培养皿 三角瓶 玻璃三角刮刀 接种环 微量移液器 枪头 棉花塞 封口膜 牛皮纸或旧报纸 橡皮筋 不能用脱脂棉 易吸水 容易引起污染 酒精灯和酒精棉球 灭菌 杀死所有微生物 消毒 杀死部分微生物 不包括芽孢和孢子 超净工作台 打开紫外灯和过滤风 灭菌30min 点燃酒精灯 酒精棉擦拭桌面 酒精棉球擦手 酒精灯火焰附近旁进行 灼烧灭菌 防止杂菌污染 用细菌过滤器除菌 尿素加热会分解 用G6玻璃砂漏斗过滤 什么是倒平板 将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中 冷却凝固后制成的培养基 Step1 培养基的配制和灭菌 将50mLLB液体培养基 50mLLB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌 无菌水 培养皿用牛皮纸包扎 Step2 倒平板 在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基 冷却到60 倒入灭菌的培养皿中 置于水平放置上 并轻轻晃动 待凝固后形成平面 超净台 Step3 接种后扩大培养 将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中 使其在37 摇床培养12h 恒温摇床 Step4 平板划线分离 用接种环在培养大肠杆菌的三角瓶中蘸取菌液一次 在固体培养基的平板上连续划线 将培养皿倒置 放在37 恒温箱中培养12 24h 怎样在平板上划线 1次 2次 3次 4次 连续划线法 分区划线法 原因 随着划线次数的增加 菌数越来越少 最终在划线的末端出现由一个细菌繁殖而来的单个菌落 为什么通过划线分离可得到单菌落 原因 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基中造成污染 恒温培养时培养皿倒置 培养皿倒置 皿盖 皿底 恒温培养箱 Step5 菌种的斜面保存 将接种环将单菌落取出 用划线法接种在斜面培养基上 37 培养24h后 置于4 冰箱中保存 斜面培养基 试管斜面培养基的制作 方法 将未凝固的含有琼脂的培养基加入试管中 灭菌后将试管斜放 令其冷却 固体培养基即成为斜面 平板划线分离法 灼烧接种环 外焰 先灼烧后冷却 以免接种环温度太高 杀死菌种 接种环冷却后 蘸取带菌培养物 在近火焰处 让带菌接种环在固体培养基上划线 恒温培养箱中倒置培养 分区划线法 每次划线之前都要灼烧接种环 总是从上一次划线的末端开始划线 稀释涂布分离法 用无菌吸管吸取1mL细菌培养液加入另一个盛有9mL无菌水的试管中 混合均匀 以此制成10 1倍的稀释液 梯度稀释菌液 10 5 10 7倍 滴加菌液 用无菌吸管取0 1mL稀释度不同的菌液 加在培养皿的固体培养基上 用玻璃刮刀涂布 玻璃涂棒 将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧 待玻璃刮刀冷却后 在酒精灯旁打开培养皿 将菌液涂布到整个培养基表面 将培养皿倒置 在37 恒温箱中培养24 48h 恒温培养箱中培养 恒温培养箱 结果 以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适 10 1 10 2 10 3 10 4 10 5 倒平板 平板划线分离 练一练 识一识 稀释涂布分离 接种环 玻璃刮刀 例题 要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种 一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养 并利用纯化技术得到单菌落的菌种 请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题 1 对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养 一般用LB培养基 在培养基中为微生物提供碳源 氮源和能源的物质主要是 为调节渗透压 要加入一定量的 为进行大肠杆菌的分离 还要加入配制成固体培养基 并进行倒平板的操作 蛋白胨和酵母提取物 氯化钠 琼脂 2 获得纯净微生物培养物的关键是 为此 必须对培养器皿 接种用具和培养基进行严格灭菌 培养器皿和培养基一般采用法灭菌 接种环采用灼烧法灭菌 同时在接种或倒平板操作时 除了在超净台上进行操作并对实验者的衣着 手和实验空间进行严格清洁和消毒外 还必须以防止空气中的杂菌污染 3 大肠杆菌菌种的扩大培养一般采用液体培养基 接种后将培养基置于37 摇床振荡条件下培养12h 菌种的分离一般在固体培养基上采用法 并将培养皿以状