肝抗体谱产品预期用途.doc

。自身免疫性肝病(ALD)检测试剂盒预期用途一、产品预期用途：本品基于酶免斑点方法，蛋白芯片技术检测血清中的抗肝抗原抗体。将AMA M2、M2-3E (BPO)、Sp100、PML、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP和 Ro-52等9种抗原固定在膜上制备成蛋白芯片；此蛋白芯片用来捕捉被测样本中的相应抗体（IgG），并利用过氧辣根化物酶标记抗IgG抗体来检测样品中的不同抗原IgG类抗体。抗肝抗原抗体检测在临床上是自身免疫性疾病诊断的重要工具。通过对9种抗肝抗原抗体的检测，可有助于适用于自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、不明原因的转氨酶增升高等自身免疫性肝病的辅助诊断和鉴别，能够为临床医生诊断自身免疫疾病提供重要的参考依据。二、与产品预期用途相关的背景情况：（一）产品检测指标的筛选及临床意义自身免疫性肝病(ALD)是一类原因不明的以肝脏为靶器官的自身免疫性疾病,主要包括以肝细胞胞实质损害为主的自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis ,AIH) 、和以胆管病变为主的原发性胆汁性肝硬化(primary billiary cirrhosis,PBC) 、原发性硬化性胆管炎(primary sclerosingcholangitis ,PSC)以及这三种疾病中任意两者之间的重叠综合征（overlap syndromes）等自身免疫性肝病。自身免疫性肝炎患者大多数起病比较隐匿，临床表现 为 ALT超 过正常 27倍，有 轻微黄疸，在临床表现上基本与其他类型肝炎相似，在实验室检测方面，自身免疫性肝炎的主要特点为血清中存在一系列高滴度的 自身抗体，所以自身抗体检测是诊断ALD最直接最准确的方法。常见的自身抗体有 AMA M2、SMA、Sp100、PML、gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP和 Ro-52等。以下就简述这些相关抗体与相关疾病的关系。（1） 。AMA-M2：AMA可分为M1-M9共9个亚型，与PBC密切相关的是M2、M4、M8、M9，其中M2诊断PBC的特异性最高。M2的靶抗原为线粒体上2-氧酸脱氢酶复合体(2-OADC)的一些成分。2-OADC包括丙酮酸脱氢酶复合体E2亚单位(PDC-E2)、支链二酮酸脱氢酶复合体E2亚单位(BCOADC-E2)、2-酮戊二酸脱氢酶复合体E2亚单位(OGDC-E2)以及二氢硫辛酰胺脱氢酶结合蛋白(E3BP)，最常见的反应是针对PDC-E2。PDC的抗原表位主要位于内酯酰区和部分外酯酰区，在PBC病人血清中阳性率为95；BCOADC和OGDC的抗原表位位于酯酰区，阳性率分别为38、3988。采用重组技术表达融合蛋白BPO，该蛋白具有BCOADHE2、PDHE2、OGDHE2的3个硫辛酰基结合功能区24，三种抗原之间无交叉反应，其联合检测阳性率可达9599。以线粒体内膜上的2-酮酸脱氢酶复合物为靶抗原的AMAM2亚型抗体，是PBC患者的高度特异性自身抗体，敏感性为9598，特异性达97。有学者认为当AMAM2亚型抗体高滴度时，确诊PBC不再需要肝组织活检病理证实。在自身免疫性肝炎、非肝脏原发性免疫性疾病(6进行性系统性硬化症患者和干燥综合征患者)、PBC重叠症、其它慢性肝脏疾病、其它风湿性疾病(如系统性红斑狼疮)患者中可检测到低滴度的AMA。（2） SP100：抗Sp100抗体靶抗原为分子量100KD的可溶性酸性磷酸化核蛋白(Sp100)，该抗体在PBC中特异性约为97，其敏感性为1030。抗Sp100抗体亦少见于风湿性自身免疫病患者，但阳性率低(一般3)，且阳性患者多与PBC密切相关，并在临床上常出现于肝损伤之前，如原发性干燥综合征、硬皮病等。抗SP100抗体与PBC的临床表现密切相关。该抗体阳性的PBC患者出现肝硬化的几率明显增加，血清中胆红素升高，患者病情进展速度快，预后较差。抗Sp100抗体在AMA阴性PBC患者中的阳性率(60)显著高于AMA阳性者(20)，该抗体对AMA阴性的PBC患者的诊断具有重要意义。（3） PML：抗PML抗体靶抗原为异常表达于前髓(早幼粒)白血病细胞的蛋白。约90的PBC患者可同时检测到抗PML抗体和抗SP100抗体，两者具有相同的敏感性和特异性。且出现抗Sp100抗体和抗PML抗体的PBC患者病情进展快，预后较差。以上说明，在PBC中这种特殊的抗Spl00抗体和抗PML抗体实际上预示了PBC的早期诊断，提高了PBC检出率，并且具有高度特异性，是检测PBC的重要诊断标志。（4） gp210：抗gp210抗体的靶抗原为位于核孔复合物上的210KD跨膜糖蛋白，所识别的表位是gp210羧基末端上的15个氨基酸残基。该自身抗体被一致认为是PBC的高度特异性抗体。以gp210抗原决定簇的重组蛋白或合成多肽作为抗原，应用免疫印迹法或ELISA法检测抗Gp210抗体，其诊断PBC的特异性可高达99，敏感性为1041。约14(1040)的PBC患者中，抗gp210抗体可与AMA同时出现，抗gp210抗体也存在于2047AMA阴性的PBC患者中。对于临床、生化和组织学表现疑诊PBC而AMA阴性的患者，或AMA阳性而临床症状不典型、存在重叠综合征(如与干燥综合征重叠)的患者，抗gp210抗体检测有重要价值。抗gp210抗体与PBC患者的肝外临床表现具有一定的相关性，抗体阳性较阴性患者发生关节炎的几率增高。抗gp210抗体的存在及抗体滴度一般不随患者诊断的时间及临床过程而变化，但抗体阳性与阴性患者的预后有显著性差异，阳性患者死于肝衰竭者明显多于阴性者。抗gp210抗体可能作为一种独立的预后指标，阳性提示患者预后不良。（5） LKM-1：抗LKM抗体包括三种与微粒体酶细胞色素P450反应的亚型抗体，其中抗LKM-1抗体被认为是型AIH的特异性抗体。其靶抗原已被证实为细胞色素P4502D6(CYP2D6)，主要是分子量为50KDa的微粒体抗原结构表位。抗LKM-1抗体为型AIH血清特异性抗体，敏感性为90，在AIH中检出率较低(约10左右)。AIH中抗LKM-1抗体阳性患者，多具典型自身免疫现象，大多为儿童和青年女性，自身抗体滴度较高，血清免疫球蛋白显著增高，病情比较严重。慢性丙型肝炎患者中约210也可检测到抗LKM-1抗体，HCV感染伴有抗LKM-1抗体阳性患者，大多年龄较大，女性并不多见，自身抗体滴度较低，血清免疫球蛋白不高，病情为慢性肝炎表现。抗LKM-1抗体阳性与否对该病的治疗有参考意义。在给HCV感染患者进行干扰素治疗之前应先检测抗LKM-1抗体，如果阳性应慎用干扰素，因为有研究表明抗LKM-1抗体高滴度阳性的HCV感染患者应用干扰素后病情恶化，其机制可能是由于干扰素刺激肝脏产生了自身免疫反应。（6） LC-1：抗LC-1抗体被认为是型AIH的另-个标记抗体，属器官特异性而非种属特异性自身抗体，识别的靶抗原存在于肝细胞的细胞溶质中，其成分为亚甲基转移酶环化脱氢酶，这是-种分子量为58KD的肝脏特异性代谢酶。抗LC-1抗体为型AIH的特异性抗体，在型AIH患者中的阳性率约为30，在型AIH患者的血清中可与抗LKM-1抗体同时存在，也可作为唯一的自身抗体出现。在临床上，抗LC1抗体多见于年龄小于20岁的年轻AIH患者，年龄大于40岁的AIH患者少见，该抗体的滴度与型AIH的疾病活动性具有相关性，对疾病的早期治疗有很大的帮助，为AIH的疾病活动标志及预后指标。（7） SLA/LP：目前认为SIA和LP是同-抗原，SIALP抗原是分子量为50KDa的细胞溶质分子，被称为UGA抑制物tRNA相关蛋白。抗LP抗体和抗SLA抗体合称为抗SLALP抗体，为I型AIH高度特异性抗体。虽然抗SLALP抗体的确切功能和作用还不清楚，但已发现它与疾病严重程度相关，参与了AIH的发病过程，与AIH的发病机制有关。AIH存在种类较多的自身抗体，但多数自身抗体并非AIH特异性抗体。抗SLALP抗体为少数公认的AIH高度特异性自身抗体，在AIH所有相关自身抗体中最具有诊断价值。抗SLALP抗体在AIH中的阳性率为1030，可单独存在，也可与SMA或ANA同时存在，而且多出现在ANA、SMA和抗LKM-1抗体阴性的AIH患者血清中。抗SLALP抗体阳性患者多为年轻女性，有高免疫球蛋白血症。约30的I型AIH仅该抗体阳性，而缺乏所有其他自身抗体标志，但对免疫抑制治疗有效，抗SLALP抗体测定对发现这一部分AIH患者有重要意义。（8） RO-52：抗SS-A（Ro52）抗体在自身免疫性疾病中是一个非特异性指标，与多种自身免疫性疾病都有相关性，在很多疾病处于稳定期、控制好的情况下会显示阴性；如果阳性会提示复发或者优先于其它指标预警，起到预防提示作用。此指标合并其它指标阳性，常会提示预后不好。（二）与预期用途相关的临床适应症的背景情况介绍如下：自身免疫性肝病（autoimmune liver diseases, ALD）是一组由异常自身免疫介导的肝胆损伤，根据其临床表现、生化、免疫学、影像学和组织病理学特点，可简单分为以肝炎为主型，即自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）和以胆系损害及胆汁淤积为主型，即原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis, PBC）和原发性硬化性胆管炎（primary sclerosing cholangitis, PSC）。此外，还有这三种疾病中任意两者之间的重叠综合征（overlap syndromes），主要以AIH-PBC重叠综合征多见。上述疾病均可表现为严重的肝脏病变，并可进展至肝硬化。（1）. 自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis, AIH）：自身免疫性肝炎（AIH）是一种累及肝脏实质的特发性疾病。临床以高球蛋白血症、波动性黄疸、特征性循环自身抗体及内分泌失常为特点，可发展为肝硬化，患者或一级亲属常伴有其他被认为具有自身免疫基础的疾病，特别是甲状腺疾病及风湿性关节炎。AIH无明确病因，形态学特征以界面性肝炎和从门脉向周围肝实质内分布密集的淋巴-浆细胞为主的炎性浸润，伴有门脉周围肝细胞的碎片状坏死，缺少提示为其他肝病的典型改变如胆道损害。AIH常为隐形爆发，疲劳不适，关节痛，波动性黄疸，右上腹痛或昏睡，没有特殊体征，偶有一些病情严重的病例，其表现几乎和急性或暴发性病毒性肝炎相似，相当多的患者可无明显的肝病征兆或症状。 目前AIH的发病机制尚未明了，分类仍有争议。根据自身抗体的不同，有多种AIH分型方法，临床上沿用多年的方法是将AIH分为3个亚型：1型AIH的特点是血清中以ANA和（或）SMA抗体为主，1型是最常见的类型；2型AIH以LKM-1和较少出现的LKM-3为主。多见于儿童患者，阳性率为30%。如发病年龄更早，起病就更为严重，也更易发展为肝硬化3型AIH以抗SLA/LP为主。（2）. 原发性胆汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis, PBC）原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosi，PBC)是以肝内细小胆管非化脓性进行性破坏伴门脉炎症性改变为主要特征，并有长期持续性肝内胆汁淤积、最终导致纤维化和肝硬化的慢性进展性 自身免疫性疾病PBC在中老年女性中多见近年来，该病在城市人口中有增高的趋势这种趋势可能与人们对疾病认识的加深和诊断技术的增高，特别是对自身免疫性肝病相关 自身抗体筛选的临床应用有关，但也不排除该病发病率增加的可能PBC的病因不明，该病常合并其他器官 自身免疫性疾病在该病中几乎所有患者均存在特异性身抗体和自身反应性T细胞反应，因此被称为是一种器官特 异性的自身免疫性疾病在疾病的早期治疗选用的是熊脱氧胆酸 DCA)，其在临床中显示了很好的治疗效果而在疾病的晚期通常使用的是肝移植的方法，术后患者生活质量较高。临床上可将 PBC分为三型： 无症状 PBC(A PBC) 症状性 PBC(sPBC) 混合型 PBC (CAH-PBC)。叉可根据病程分为 无症状期 皮肤瘙痒期 黄疽期(血清总胆红素34.2 mmool L) 晚期(多在 3个月内死亡).PBC的诊断包括肝功能检测（检测碱性磷酸酶、天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶）、血清脂质的检测、AMA和ANA的检测以及与其它慢性炎症性肝脏疾病（如慢性病毒性肝炎、自身免疫性肝炎或者原发性硬化性胆管炎）的区别诊断。但目前临床出现AMA-M2阴性PBC患者，SP100、GP210、PML的抗体检测指标的出现，弥补了上述检测缺陷，同时这几个指标联合检测显著提高了PBC患者的检出率和准确性。三、相关的临床或实验室诊断方法自身免疫病的实验室诊断包括免疫学实验检查和其他实验室检查。免疫学检查有细胞免疫和体液免疫检测。由于检测抗原特异性T细胞技术较为繁琐，临床实验室难于常规开展，所以实际上有关自身免疫病的特异性实验室诊断主要是自身抗体的检测。所有自身免疫病均具有特异或相对特异的自身抗体，为自身抗体检测的广泛应用奠定了基础。检测自身抗体的常用方法包括免疫双扩散法（DID）、免疫荧光测定法（IIF）、免疫印迹法（WB）、免疫斑点法（IB）、酶联免疫吸附法（ELISA）、蛋白芯片法（Protein chip）等。这些检测方法各有特点，也都存在一定的局限。1、免疫双扩散法（DID）免疫双扩散法是经典的检测ENA抗体的方法。此方法是通过抗原与抗体在琼脂(或琼脂糖)凝胶中扩散形成沉淀线，然后通过对沉淀线的鉴别和用阳性血清作对照来进行判断。该方法的优点是价格低廉，特异性高，但操作费时费力，需要用肉眼来观察沉淀环，结果判断带有一定的主观性，对实验室技术人员技术水平和经验要求较高，操作结果一致性较差。2、间接免疫荧光法（IIF）间接免疫荧光分析法是检测自身抗体的常用技术。其实验基质是HEp-2细胞或不同灵长类肝脏组织冰冻切片，含有完整的抗原谱。许多组织经IIF着染可提示自身抗体存在，但不能对自身抗体种类进行客观评价，结果阳性时应进一步做特异性抗核抗体项目检查。且对IIF着染的鉴定有一定的主观性，因不同观察者、新老组织切片不同而有所不同，对试验技术人员要求较高。3、 免疫印迹法（WB）免疫印迹法是一种将凝胶电泳、抗原抗体反应和免疫固定技术结合在一起的生物化学实验技术。主要用于抗ENA抗体谱的检测，从抗原的蛋白质多肽水平识别不同的抗核抗体。该方法的特异性和敏感性较免疫双扩散法高，且一次检测能同时完成对多种特异性抗核抗体的识别和过筛。但抗原经SDS-PAGE后发生变性，许多抗原决定簇的构象可能遭到破坏，不能与特异性抗体发生反应或发生特异性结合，造成结果判断错误。另外，蛋