毛细管电泳的手性拆分(文献综述).pdf

毛细管电泳的手性拆分 文献综述 朱 晓峰林 炳承 中国科 学院大 连化学物理研究所 大连 1 1 6 0 2 3 提 要根 据最近文献 对毛细管电 泳在手 性拆分领域中的应用和发展进行了评述 包括各种操作模式和各类 手性选择剂 进一步评 述了手性拆分机理的研究 显示出毛细管电 泳是手 性拆分的一种高效 快速 简便的 分离 手段 关键词毛细管电泳 手性拆分 机理 分类 号 O 6 5 8 1 前言 生物活性物质 包括药物 虽然并不都是手性 的 但具 有手性 灾 中 心 的生 物 物镏 剩 具 对 杂映程 体 寮 间 涞活往 往 存 在 着 差 异 手 性 左 右 旋 异 构 体 中 每 个 对 映 异 构体有不同的三维结构 而人体中的受体和酶一般 都是 鞘 终餍缘 模 也 具 有 三维 结 构 它只选 择外庀 消旋药 物中的某一对映体与之结合 而起到治疗作用 对剩 余的另一对映体来说 是非活性的或是有害的 因而 显示出不同的疗效和毒理学性能 在药物方面 据统 计世界 上使用的 1 8 5 0 种药物中 天然的及半合成的 有5 2 3 种 全合成的有1 3 2 7 种 1 2 在天然和半合成 的 5 2 3 种中 非手性 只有 6 种 手性药有 5 1 7 种 在 手性药物中 单一对映体有 5 0 9 种 外消旋药物有 8 种 在全合成的1 3 2 7 种药物中 非手性药有 7 9 9 种 手性药有5 2 8 种 在手性药物中 单一的对映体只有 6 1 种 其余的4 6 7 种为外消旋药物 可以 看出 在现 在合成的药物中 有相当的药物有手性中心 批准使 用的并非单一的异构体 而是外消旋混合物 从药物 管理部门来说 现在越来越需要了解现用药中每一 个异构体的药理学及毒理学性能 最后导致生产和 使用手性纯的化合物 1 9 9 2 年美国F D A提出 制药 公司必须测定每个药物的立体异构体的组成 对每 个异构体的药理学活性都要有 比较 特别是新药的 报批都应有这些材料 1 9 9 2 年6 月 美国F D A正式 公布了 关于手性药物研究开发市场销售的准则性文 件 这是制药工业盼望已 久的 也将进一步激励手性 药物的开发 手性中间 体及分离技术是许多制药及化学公司 正在研究发展的重点 这就需要一种快速有效简便 的 分 析 技 术对 映 体 的 物 理 化 学 性 质 相 似 分 离 难 度 大 色谱技术是目前手性分离的主要方法 毛细管电 泳是 8 0 年代以来新兴的一种分离分析技术 由于它 高 效 快 速简 便 等 特点而 被 还广 泛 应 用 于 药 物生 物 大分子 临床医 学等领域 在手性分离方面 毛细 管 电泳显示了巨大的潜力 下面对毛细管电泳分离手 性化合物及对拆分机理的研究作一评述 2 分离方式 按照毛细管电 泳的 操作模式 分离方式可分为 毛细管区带电 泳 胶束电 动毛细管色谱 毛细管凝胶 色缀和兔 毛细 管艿电 色谱 滋 体系 2 1 毛细管区 带电泳 2 1 1 金属离子配合物的毛 细管区 带电 泳体系 在金属离子配合物手性拆分的毛细管电 泳中 通常用 C u 2 金属离子和 L型氨基酸或缩二氨酸的 络合物作为手性添加剂 通过改变实验条件如p H 值 金属离子和配体的比例 温度 配体的种类及表 面活性剂 能 够改变手性选择性 分离机理基于金属 离子络合物和手性对映体形成三元络合物的稳定性 不同 从而实现分离 Z a r e 等 3 在2 5 m m o l L C u S O 4 5 H 2 O 5 m m o l L A s p a r t a m e p H7 2 的乙酸铵 条件下分离了 丹酰化氨基酸对映体 G o z e l 等 4 优化 了分离条件 对 1 4 种丹酰化氨基酸对映体实现了分 国 家自 然科学基金资助项目 2 9 6 3 5 0 2 0 通讯联系人 本文收稿日 期 1 9 9 7 1 1 1 2 修回日 期 1 9 9 8 0 3 0 4 离 C o h e n 等 5 报道了用C u 2 d i d e c l y L a l a n in e S D S 体系对几种丹酰化氨基酸衍生物的手性分离 在该体系中 最佳的p H值在7 8 之间 氨基酸配体 和金属离子的摩尔之比为 2 1 时对分离最为有利 选择不同的配体可以改变氨基酸对映体的出峰次 序 当选择 A s p a r t a m e 天冬酰胺 为配体时 D型氨 基酸先出峰 同样 L h i s t i d i n e 为配体时 带有芳香环 和极性侧链的D型氨基酸先出峰 而对于脂肪族类 氨基酸 出峰次序正好相反 2 1 2 环糊精 毛细管区 带电 泳体系 在毛细管电泳中 环糊精是最常用的手性选择 剂 除了3 种天然的环糊精 C D外 还有大量 的衍生物 当选择电中性的 C D作为手性选择剂时 它所能适用的对象是带电 物质 我们 6 已对1 2 3 种 手性药物进行了 第一轮拆分筛选工作 发现 类C D 的分离能力最强 以H P C D最为出色 这不仅与 C D分子空腔大小有一定关系 而且还和 C D的对称 性有关 我们 认为 对于碱性化合物 适宜的p H值 为 2 5 对于弱酸类化合物 最佳的p H值为p K a 0 5 影响拆分的实验操作参数有 p H值 电压 温 度 C D的浓度等 其中以C D的浓度和p H值为主要 参数 缓冲液的种类及其离子强度都会影响分离结 果 除此以 外 有机添加剂如甲 醇 四 烷基铵类 高分 子化合物羟丙基甲 基纤维素等可改善分离情况 若 分离的对象为中性化合物 也可用带电的C D 如某 些衍生环糊精 对其进行拆分 S t a lc u p 等 7 用S u l f a t e d C D分离了约5 0 种手性化合物 新的 聚阴离子 C D引 起了广泛的注意 T a it 等 8 用丁磺酸基 C D分离了 胺类手性化合物 他们指出 该类选择剂 优于中 性环糊精 如 C D H P C D等 G a r e il 等 9 使用二元环糊精体系分离了中 性化合物 并对该体 系作了 理论研究 优化了分离条件 J ir a 等 0 用硼酸 盐 环糊精体系拆分二醇对映体 提出了可能拆分的 机理 G u t t m a n 等 11 用D M C D作为手性选择剂 在有效长度为7 c m的 毛细管内 仅用4 0 s 的时间 基 线分离了M e t a p r o t e r e n o l 对映体 被称为超速分离 2 1 3 冠醚 毛细管区带电 泳 1 8 冠 6 四羟酸是常用的冠醚类手性选择剂 K u h n 等 12 用1 8 冠6 四 羧酸 分 离了 氨 基酸 对映 体 使用冠醚和C D的混合物分离胺类化合物时 他们 发现存在着协同 效应 单个选择剂并不能实现手性 分离 最近 S c h m id 和G u e b it z 1 3 用1 8 C 6 H 4 分离了 带有两个手性中性缩二氨酸 d ip e p t id e 的4 个对映 体 但是由 于此类化合物具有毒性 使其应用受到一 定的限制 2 1 4 蛋白 质 毛细管区 带电 泳 用于毛细管手性分离的白 蛋白 有 人血清白 蛋 白 H S A 牛血清白蛋白 B S A 抗生物素蛋白 a v id i n 卵类粘蛋白 o v o m u c o i d l 酸性糖蛋白 l g l y c o p r o t e in 纤维素二糖水解酶 c e ll o b i o h y d r o la s e 粘多糖 m u c o p o l y s a c c h a r id e 菌质纤维素 酶 f u n g a l c e ll u l a s e 伴清蛋白 c o n a l b iu m 酪蛋白 c a s e i n 等 这些蛋白 通常作为添加剂加入缓冲液 中 成为亲合毛细管电 泳分离方式 也有把它们 键合 到凝胶 硅胶微粒和糊精聚合物上 H a g in a k a 等 14 用胃蛋白酶键合柱分离 了碱性和电中性手性化合 物 L i 等 1 5 还用 l 酸性糖蛋白 微粒填充毛细 管电 色谱分离了 酸性和酸性手性药物 F e r e n c 16 选用人 血清铁传递蛋白 t r a n s f e r r in 分离了4 种手性药物 Y a n g 和H a g e 1 对蛋白手性分离的机理进行了研 究 同时由于蛋白质本身有紫外吸收 高浓度的使用 受到一定的 限制 最近 T a n a k a 等 18 利用 部分灌柱 技术克服了检测问题 并用 l 酸性糖蛋白作为手性 添加剂成功地分离了2 9 种碱性外消旋体 2 1 5 低聚糖和多聚糖 毛细管区带电泳 麦 芽糖 糊精 ma l t o d e x t r i n 为 D 葡萄糖 以 1 4 糖苷键相连结的线性低聚物 它和环糊精不同 的是其没有疏水性空腔 淀粉水解成直链淀粉 继续 水解成低聚糖 低聚糖的聚 合度过高 它的 水溶 性就 差 而且一般的都为混合物 最纯的商品化麦芽糖糊 精的聚合度为7 D H u l s t 等 19 用麦芽糖糊精和玉米 糖浆作为手性选择剂对某些酸性手性药物进行了分 离 并对不同低聚糖类的手性选择剂 进行 了考察 S o in i 2 0 用麦芽糖糊精分离了一些酸性和碱性药物 并用1 H和1 C 核磁共振谱证实了 麦芽糖糊精的螺旋 结 构和对映体相互作用导致手性分离 V e r b e k e 等 2 1 用 2 的G l u c i d e x2 作为手性添加剂分离了5 种抗炎药物 S t a lc u p 和 A g y e r i 2 用肝素 h e p a r i n 和酸性粘多糖作为手性选择剂 根据分离物分子的 大小和分析物氮原子的相互静电作用 对拆分的机 理进行了研究 2 1 6 大分子抗生素 毛细管区带电泳 大分子抗生素是相对新型的手性选择剂 这类 选择剂的使用浓度一般都比 较低 1 5 m m o l L A r m s t r o n g 等 2 3 用万古霉素 v a n c o m y c in 利托菌 素A r is t o c e t i n A 和t e i c o p la n in 等3 种糖肽类大分 子抗生素分离了 手性化合物 并对它们的结构和选 择性作了 讨论 t e ic o p l a n in 具有表面活性 其选择性 受到一定限制 加入 S D S可增加分离效率 改变 出 峰次序 利托菌素是一种具有应用前景的手性选择 剂 W a r d 等 24 在p H为6 的条件下 利用万古霉素 和分析物带相反的电荷 产生反方向泳动 分离了抗 炎药物和丹酰化氨基酸 除此之外 其它大分子抗生 素如 A 8 2 8 4 6 B 利福霉素S V r i f a m y c i n S V 利福霉 素 B r if a m y c in B 糖 肽 抗 体 g l y c o p e p t i d e a n t ib io t ic 等都被选为手性选择剂 目 前使用大分子 抗生素已有 3 5 0 多个酸性和阴离子外消旋体被拆 分 2 1 7 非水 体系 毛细管区带电 泳 非水体系 毛细管区带 电泳最近引起 了广泛的 注意 它能扩大毛细管电泳的应用范围 在有机溶剂 中 加上高电场和高离子强度的缓冲液都成为可能 而且非水溶剂的不同酸 碱化学和离子 溶剂化作用 效应 在电 迁移过程中 能够导致不同的选择性 在非 水体系中 Y e 和 K h a le d i 2 5 首次用 C D成功地分 离了t r im ip r a m in e 对映体 K h a le d i 等 26 进一步系统 地研究了非水体系中的手性拆分 考察 了环糊精的 种类及其浓度 缓冲液的 离子强度 p H值 电渗流的 控制和温度的影响 并求解了碱类药物和C D的结 合常数 S t a lc u p 等 2 7 用奎宁 Q u in i n e 作为手性选 择剂在非水体系中 分离了某些氨基酸和有机酸 2 2 胶束电 动毛细管色谱 M E C C 2 2 1 单一胶束体系 M E C C 是毛细管电 泳的一种操作方式 它涉及 到电 渗电泳和色谱分配过程 特别适用于亲脂性化 合物的分离 分离机理是基于分析物在水相和胶束 相中的多次分配达到分离 目的 单一胶束体系在 M E C C中只有一种胶束存在 其本身可以是手性或 非手性 若是非手性胶束体系 还需要加入一种手性 选择性 Wa r n e r 首次用 p o l y D S UV C D分 离了 4 种对映体 认为使用此类手性选择剂可以消 除胶束单体和 C D的包合作用 高聚合胶 束 p o l y m e r iz e d 没有临界浓度 因此有广泛的浓度范围可 供 选择 而且此类胶束比普通胶束更有刚性 所以分 析物在胶束表面与其发生作用 比在普通胶束中具 有更高的传质速率 胆汁酸盐是一类通用的阴离子 手性表面活性剂 包括胆酸钠 S C 去氧胆酸钠 S D C 牛胆酸钠 S T C 和去氧牛胆酸钠 S T D C 等 几种 其中去氧牛胆酸钠因其在低 p H值条件下不 像其它胆汁酸盐那样容易形成凝胶而被应用得最为 广泛 T e r a b e 等 2 9 用 5 0 m m o l L S T D C 在p H为 3 的条件下 成功地分离了几种丹酰化氨基酸 胆汁酸 盐单体的极性比S D S的强 使 ME C C的容量因子变 小 特别 适合强疏水性化合物的分离 它具 有逆胶束 结构 可允许使用高浓度的有机添加剂 这些特点显 示出 它比S D S 更具优越性 合成的 新型手性表面 活 性剂在M E C C中 有着广泛的应用 2 2 2 混合胶束 体系 混合胶束体系通常是在加入一种手性胶束的同 时再加入另一种非手性胶束 如S D S 甘草酸 g l y c y r r h iz ic a c id 和 七叶素 e s c in 已被用于混合 胶束体系中 具有手性识别能力 30 甘草酸o c t y g lu c o s id e S D S 和 e s c in S D S 混合胶束可拆分衍生 化的 氨基酸对映体 C lo t h ie r 等 3 1 用胆汁酸 盐 o l y o x y e t h y l e n e e t h e r 混合胶束体系拆分了v e r a p a m i l 对映体及其它化合物 除此之外 十二烷酰氨基酸钠 十二烷基硫酸钠 S D V a l S D S 混合胶束用来分离 Wa f a r in 对映体 32 还可根据分离对象的不同选择 胆汁酸盐 S D S等拆分体系 2 2 3 手性乳胶体系 微乳体系是由表面活性剂 辅助表面活性剂 油 相和水相组成 在H P C E中特别适于分离脂溶性化 合物 使 用加入亲 油性手性 选择剂 的微乳体系 0 5 2 R 3 R 酒石酸二正丁脂 0 6 S D S 1 2 正丁醇 1 5 mm o l L T r i s p H 8 1 在 8 m i n内较好 地分离了 麻黄碱的对映体 3 3 2 3 毛细管凝胶电泳体系 C G E G u t t m a n 等 3 4 把 C D加入到聚丙烯酰胺介质 中 用毛细管凝胶电泳分离了丹酰化氨基酸 环糊精 共聚物凝胶可通过丙烯酰胺和烯丙基 甲氨酰化 环糊精共聚得到 应用此凝胶体系可以分离丹酰化 氨基酸和h o m a t r o p i n e 对映体 B ir n b a u m等 35 把 B S A在毛细管中用戊二醛化学交联成凝胶 采用毛 细管凝胶亲 和 电泳方式 实现了对色氨酸对 映体的拆 分 S u n 等 36 用溴化腈作催化剂将B S A与高分离量 环糊精共价交联聚合 并将其填充在用聚丙烯酰胺 涂层的毛细管中 用以分离l e u c o v o r in 对映体 最 近 L in 等人 3 7 用分离烙印高聚物作为手性选择剂 用毛细管凝胶电 泳分离了3 种氨基酸对映体 2 4 毛细管电色谱体系 C E C 2 4 1 填充柱毛细管电 色谱 L i 3 8 把a l 酸性糖蛋白 键合到5 m的硅胶上 并把其填充到内 径为5 0 蘭 m的毛细管中 作为 手性固 定相 用毛细管电泳对 b e n z o i n等 1 0 种化合物进行 手性分离 填充柱的 E O F比 开管毛细管柱的小 低 浓度的缓冲液和高的电场能提高 E O F 随着有机溶 剂的加入分离度减小 C D 键合柱可拆分中 性和阴 离子化合物 选择磷酸盐和三乙基乙酸铵 T E A A 可改变E O F 的方向 39 2 4 2 壁键合柱开管毛 细管电 色谱体系 壁键合柱和填充柱不同 它可以把环糊精直接 键合到毛细管壁上 而且柱寿命相对较长 S c h u r i n g 40 在1 9 9 2 年把C D键合到毛细管壁上 制备出 耐缓冲液冲刷具有手性分离能力的微径 5 0 1 0 0 蘭m 毛细管柱 他用C h i r a s i l D e x 柱分离了1 苯基 乙 醇对映体 并对p H值 涂层厚度 电压等参数作 了考察 A r m s t r o n g 4 1 用这种柱成功地分离了甲 基 苯巴 比妥 m e p h o b a r b i t a l 外消旋体 K o n is h 42 考察 了 C D键合柱 得出对 S 1 4 5的包合强 度依次为 C D C D C D 3 拆分机理研究 在所有的手性选择剂中 环糊精是用得最为广 泛的一种 它促使对映体分离的最根本原因是它们 之间形成包合物 并且各自 的包合作用产生着差异 从而导致在分离过程中表现出不同的迁移率 在一 定分离体系中 通过毛细管电泳只能知道对映体是 否能被拆分 很难直接了解对映体在环糊精空腔 内 的空间位置 以及形成包合物的络合比 用毛细管电泳求解环糊精和对映体之间的稳定 常数及热力学参数已 有报道 4 3 通过所得的结果 可以对其拆分有初步的了解 核磁共振是研究主客 体分子之间怎样作用的有利手段之一 通过 N M R 谱中的化学位移和谱峰分裂可以分析其作用机理 C h a n k v e t a d z e 等 4 用 1 3 C N MR研究了用中性和带 电环糊精拆分 M ia n s e r in e 的手性识别机理 指出对 映体1 3C的谱线移动大小和对映体的出峰次序对应 并用化学位移的变化求出主客体的络合比 B o t s i 等 45 用N MR研究了蒎烯对映体和环糊精 三甲 基 环糊精在水溶液 中的手性选择性和空间位置选择 性 并求解了包合比和包合常数 指出对于手性选择 性并不一定能形成氢键或具有芳香环 S a lv a d o r i 等 46 用 N MR及二维 N MR对 F l u b i p r o fe n F lu r b i p r o f e n 和 C D的相互作用进行了研 究 计算了它们的稳定常数 并提出了相互作用的结 构模型 C o lq u h o u n 等 4 7 用 N M R研究了 C D对 n a r in g in 的手性识别 L ip k o w it z 等 48 49 运用分子模型技术 计算了 包 合物稳定构型的能量 解释了用三甲 基 C D拆分 对映体的 机理 认为驱动包合物形成的主要动力是 短距离的色散能 而提供手性选择性是短程范德华 作用力 它比 包合能力小 1 2 个数量级 H a m il t o n 等人 5 0 利用晶体结构数据详细研究了 C D和 F e n o p r o f e n 对映 体包合物的空间 结构 此外 微量热 法 m ic r o c a l o r im e t r y 也是研究主客体分子相互作 用的有力手段 它不仅能给出包合比 而且还能给出 相应 的 热 力 学函 数值 5 1 4 结束语 毛细管电泳在手性拆分中显示了强大的实力 具有广阔的应用前景 虽然人们对手性拆分的机理 尚 不十分清楚 但发展和研究新型手性选择剂仍是 手性拆分研究的新方向 参考文献 1 H i g h T e c h S e p a r a t i o n N e w s O c t o b e r 1 9 9 4 5 6 2 C h e m i c a l E n g i n e e r in g N e w s 1 9 9 0 6 8 1 2 3 8 4 4 3 Ga s s ma n E Ku o J E Z a r e R N S c i e n c e 1 9 8 5 2 3 0 8 1 3 8 1 4 4 G o z e l P G a s s m a n E Mi c h a e l s o n H e t a l A n a l C h e m 1 9 8 7 5 9 4 4 4 9 5 C o h e n A S P a u l u s A K a r g e r B L C h r o m a t o g r a p h i a 1 9 8 7 2 4 1 5 2 4 6 L i n B ig c h e n g Z h u X i a o f e n g K o p p e n h o e f e r B e t a l L C G C 1 9 9 7 1 5 1 4 0 4 6 7 S t a l c u p A M G a h m K H A n a l C h e m 1 9 9 6 6 8 1 3 6 0 1 3 6 8 8 T a i t R J T h o m p s o n D O S t e l l a V J e t a l A n a l C h e m 19 94 6 6 4 0 1 3 4 0 1 8 9 L e l iv r e F G a r e i l P An a l Ch e m 1 9 9 7 6 9 3 9 3 4 0 1 1 0 J i r a T B u n k e A S c h m i d M G e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 9 7 7 6 1 2 6 9 2 7 5 1 1 A n t h o n y A u m a t e l l A n d r s C u t t m a n J C h r o m a t o g r 1 9 9 5 7 1 7 2 2 9 2 3 4 1 2 K u h n R S t e i n m e t z C B e r e u t e r T e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 9 4 6 6 6 3 6 7 3 7 3 1 3 S c h m i d M G G u e b i t a G J C h r o m a t o g r 1 9 9 5 7 0 9 8 1 8 8 1 4 J u n H Y u k i k o M Y u k i S e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 9 5 7 0 8 1 6 1 1 6 8 1 5 L i S L l o y d D K A n a l C h e m 1 9 9 3 6 5 3 6 8 4 3 6 9 0 1 6 F e r e n c K i a l r E l e c t r o p h o r e s i s 1 9 9 6 1 7 1 9 5 0 1 9 5 3 1 7 Y a n g J H a g e D S A n a l C h e m 1 9 9 4 6 6 2 7 1 9 2 7 2 5 1 8 T a n a k a Y T e r a b e S C h r o m a t o g r a p h i a 1 9 9 7 4 4 3 4 1 1 9 1 2 8 1 9 D H u l s t A V e r b e k e N J C h r o m a t o g r 1 9 9 2 6 0 8 2 7 5 2 8 7 2 0 H e l e n a S Mo r g a n S Ma r j a L i i s a R e t a l A n a l C h e m 1 9 9 4 6 6 3 0 5 4 3 0 5 9 2 1 S t a l c u p A M A g y e i N M A n a l C h e m 1 9 9 4 6 6 3 0 5 4 3 0 5 9 2 2 Ve r b e k e N D Hu l s t A E l e c t r o p h o r e s i s 1 9 9 4 1 5 8 5 4 8 6 3 2 3 G a s p e r M P B e r t h o d A N a i r U B e t a l A n a l C h e m 1 9 9 6 6 8 2 5 0 1 2 5 1 4 2 4 T i m o t h y J Wa r d C h a r l e s D a n n I l l A n d y P B r o w n C h i r a l i t y 1 9 9 6 8 7 7 8 3 2 5 Y e B K h a l e d i M G P r e s e n t e d a t t h e 1 9 9 4 H P C E Me e t i n g S a n D i e g o C A A b s t r a c t N o 1 3 3 2 6 Wa n g F a n g Mo r t e z a G K h a l e d i A n a l C h e m 1 9 9 6 6 8 3 4 6 0 3 4 6 7 2 7 S t a l c u p A M K y u n g H G a h m J Mi c r o c o l S e p 1 9 9 6 8 2 1 4 5 1 5 0 2 8 Wa n g J i a n I s i a h M Wa r n e r J C h r o m a t o g r 1 9 9 5 7 1 1 2 9 7 3 0 4 2 9 T e r a b e S S h i b i t a M Mi y a s h i t a Y J C h r o m a t o g r 1 9 8 9 4 8 0 4 0 3 4 1 1 3 0 I s h i h a m a Y T e r a b e S J L i q C h r o m a t o g r 1 9 9 3 1 6 4 9 3 3 9 4 4 3 1 J a m e s G C l o t h i e r J r S t e r l i n g A T o me l l i n i J C h r o m a t o g r 1 9 9 6 7 2 3 1 7 9 1 8 7 3 2 O t s u k a K K a w a h a r a J T a t e k a w a K e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 9 1 5 5 9 2 0 9 2 1 4 3 3 A i k e n J H Hu i e C W C h r o m a t o g r a p h i a 1 9 9 3 3 5 7 8 4 4 8 4 5 0 3 4 C u t t ma n A P a u l u s A C o h e n A S e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 8 8 4 4 8 4 1 5 3 3 5 B i r n b a u m S Ni l s s o n S An a l C h e m 1 9 9 2 6 4 2 8 7 2 2 8 7 4 3 6 S u n P B a r k e r G E H a rt w i c k R A e t a l J C h r o ma t o g r 1 9 9 3 6 5 2 2 4 7 2 5 2 3 7 L i n J M N a k a g a m a T U c h i y a m a K e t a l C h r o m a t o g r a p h i a 1 9 9 6 4 3 1 1 1 2 5 8 5 5 9 1 3 8 L i S L l o y D K A n a l C h e m 1 9 9 3 6 5 3 6 8 4 3 6 9 0 3 9 L i S L l o y d D K J C h r o ma t o g r 1 9 9 4 6 6 6 3 2 1 3 3 5 4 0 Ma y e r S S c h u r i n g V J HR C 1 9 9 2 1 5 1 2 9 1 3 1 4 1 A m s t r o n g D W T a n g Y Wa r d T e t a l A n a l C h e m 1 9 9 3 6 5 1 1 1 4 1 1 1 7 4 2 K o n i s h M O k u n o K H a s h i mo t o H C h r o m a t o g r a p h i a 19 9 4 3 8 3 8 1 3 8 5 4 3 S h a r r o n G P e n n E d m u n d T B e r g s t r o m D a v i d M G o o d a l l A n a l C h e m 1 9 9 4 6 6 2 8 6 6 2 8 7 3 4 4 B e z h a n C h a n k v e t a d z e Ga b r i e l e E n d r e s z D i e t e r B e r g e n t h a l e t a l J C h r o m a t o g r 1 9 9 5 7 1 7 2 4 5 2 5 3 4 5 A n t i g o n e B o t s i B r u n o P e r l y E u g e n e H a d j o u d i s J C h e m S o c P e r k i n T r a n s 1 9 9 7 2 8 9 9 4 4 6 P i e r o S a l v a d o r i G l o r i a U c c e l l o B a r r e t t a F e d e r i c a B a l z a n o e t a l C h i r a l i t y 1 9 9 7 8 4 2 3 4 2 9 4 7 I a n J C o l q u h o u n B r i a n J G o o d f e l l o w J C h e m P e r k i n T a n s 1 9 9 4 2 1 8 0 3 1 8 0 7 4 8 K e n n y B L i p k o w i t z C h a r l e s M S t o e h r C h i r a li t y 1 9 9 6 8 3 4 1 3 5