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文档简介

细胞污染的种类可分成细菌 酵母菌和霉菌 无菌操作技术 不当 操作室环境不佳 污染之血清和污染之细胞等是主要的 污染源 严格之无菌操作技术 清洁的环境 与品质良好之细 胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法 1 1 细菌的污染和检测 细菌的污染和检测 肉眼直接观察法 培养检查法 显微镜观察法 PCR检测 细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染 即使在细胞培养液中加入 了抗菌素 也可能因为操作不慎而引起污染 最常见的有革兰氏阳性菌 如枯草杆菌 白色葡萄球菌 以及大肠杆菌 假单胞菌等革兰氏阴性菌 培养细胞受细菌污染后 会出现培养液变混浊 pH改变 污染后细胞 发生病理改变 胞内颗粒增多 增粗 最后变圆脱落死亡 细胞污染后怎么办 真菌 霉菌和酵母菌 一旦发现有它的存在说明细胞已 被污染了 目前没有好的抑制方法 处理 在这种情况下最好赶紧将该瓶细胞扔掉 免得引起培养箱 中的大规摸污染 细菌 细菌污染后 培养基1 2天就会变色 对细胞生长 影响明显 处理 应迅速将污染细胞与其它细胞系隔离 灭菌后丢弃 还要 用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台 支原体 污染后 因它们不会使细胞死亡可以与细胞长期 共存 培养基一般不发生浑浊 细胞无明显变化 外观上 给人以正常感觉 实则细胞已经受到多方面潜在影响 如 引起细胞变形 影响DNA合成 抑制细胞生长等 往往被 大多数实验者忽视 处理 1 加温 根据支原体对热敏感的特点 将受支原体污染的 细胞放在41度作用4 5小时 最长不超过18小时 以杀灭 支原体 但如此高的温度对细胞生长本身也有影响 因而 在实验前先用少量细胞膜所最适合的温度和时间 以尽可 能保证杀灭支原体而细胞本身又不受损伤 2 碰到到这种问题只有仍掉 重新复苏 如果没备份的话 建议使用去除支原体的试剂 如ant mpt 支原体抗生素 加 入培养液冲击处理 非同种细胞 即细胞交叉污染 由于细胞培养操作时各细 胞株所需的器材和溶液没有严格分开 往往会使一种细胞 被另一种细胞污染 处理 丢掉 灭菌技术目前主要有紫外灯照射 湿热 消毒剂擦拭灭菌技术目前主要有紫外灯照射 湿热 消毒剂擦拭 干 干热热等等 紫外灯照射 有效性受很多因素影响 如遮挡 时间 强度 照射距离 湿度等 湿热 通常用于高压蒸汽灭菌中 比较少用在CO2培养箱上 湿热灭菌在常压下又叫煮沸法 煮沸的水温一般至少需为 100 细菌繁殖体煮沸5分钟被杀死 但芽胞常需煮沸2小 时以上才可被杀死 消毒剂擦拭法 主要适合于平整的表面如实验台面 而箱体 内部设计的死角 各种器件因无法擦拭等因素导致灭菌效果 也很有限 而且含氯 碘的消毒剂对于不锈钢有腐蚀作用 不能对不锈钢箱
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