常用溶液的配置.docx

试剂配制（1）液体LB培养基（-）1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌，4保存。（2）氨苄青霉素溶液（100mg/ml）10ml氨苄青霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌，-20分装保存。（3）卡那霉素溶液（100mg/ml）10ml卡那霉素1g去离子水溶解并定容至10ml过滤除菌，-20分装保存。（4）固体LB培养基（-）1000ml蛋白胨10g酵母提取物5g氯化钠10g琼脂糖粉15g去离子水溶解并定容至1000ml高压灭菌后铺平板（6cm培养皿），冷却后4保存。（5）含抗生素 LB 固体培养基1000ml固体LB培养基溶液1000ml高压灭菌, 当培养基降温至50左右，加入终浓度为 100g/ml的氨苄青霉素或 100g/ml 卡那霉素，并铺平板（6cm培养皿），冷却后， 4保存。（6）0.1M CaCl2溶液制备感受态1000ml氯化钙11.099g去离子水溶解，定容至1000ml高压灭菌后4保存。（7）0.1M MgCl2溶液-制备感受态1000ml氯化镁9.521g去离子水溶解，定容至1000ml高压灭菌后4保存。（8）0.1M CaCl2-15%甘油溶液-制备感受态1000ml氯化钙9.521g50%甘油300ml去离子水溶解，定容至1000ml高压灭菌后4保存。（9）50甘油溶液100ml甘油50ml去离子水50ml（10）0.5M EDTA溶液(PH=8.0)500mlEDTA93.05g去离子水溶解，NaOH调PH至8.0，定容至500ml。（11）10%SDS溶液100mlSDS 10g去离子水溶解，定容至100ml。（12）5M乙酸钾溶液100ml5M乙酸钾49.07g去离子水溶解，定容至100ml，室温保存。（13）1MTris-HCl溶液（pH=8.0）100mlTris碱12.1g去离子水溶解，定容至100ml，浓盐酸调pH值至8.0，室温保存。（14）50TAE溶液100mlTris碱242g冰乙酸51.7ml0.5M EDTA100ml加去离子水溶解定容至100ml，室温保存。（15）1% 琼脂糖凝胶溶液500ml琼脂糖粉5g1TAE500ml微波炉中高火加热3-5min，存放于50电热鼓风干燥箱。（16）碱裂解液I（P1 液）200ml葡萄糖1.8g1MTris-HCl（pH=8.0）5ml0.5M EDTA（pH=8.0）4ml加去离子水至200ml高压灭菌后4保存。（17）碱裂解液 II（P2 液）200ml 10M NaOH4ml10%SDS20ml高压灭菌后4保存。（18）碱裂解液 III（P3 液）200ml5M 乙酸钾120ml冰乙酸23ml加去离子水至200ml高压灭菌后4保存。（19）溴化乙锭（EB）溶液（10mg/ml）10ml EB100mg去离子水溶解，定容至10ml，避光室温保存。（20）1PBS溶液1000mlNaCl8gKCl0.2gNa2HPO41.44gKH2PO40.24g去离子水溶解，10M NaOH调PH=7.4，定容至1000ml，灭菌后室温保存。（21）细胞培养基500ml高糖DMEM培养基450mlFBS50ml青霉素/链霉素5ml，4保存。（22）2SDS蛋白裂解液10ml1MTris-HCl（pH=6.8）1ml甘油2ml10SDS4ml加去离子水至10ml，室温保存。（23）2SDS上样缓冲液10ml1MTris-HCl（pH=6.8）1ml甘油2ml10SDS4ml1溴酚蓝2ml-巯基乙醇0.15ml加去离子水至10ml，分装后室温保存。（24）1.5MTris-HCl溶液（PH=8.8）100mlTris碱18.2g加入10M HCl 7ml调整PH到8.8，加去离子水定容到100ml，室温储存。（25）1.0MTris-HCl溶液（PH=6.8）100mlTris碱12.1g加入10MHCl 12ml调整PH到6.8，加去离子水定容到100ml，室温储存。（26）10%APS溶液10mlAPS1g去离子水10ml，4保存。（27）10SDS溶液100mlSDS10g加去离子水定容至100ml，室温保存（28）30%丙烯酰胺溶液100ml丙烯酰胺29gN,N-亚甲基双丙烯酰胺1g加去离子水定容至100ml，4避光保存（29）10电泳缓冲液1000mlTris碱30g甘氨酸108gSDS10g加入10M HCl 9ml调整PH值到8.3，加去离子水定容到1000ml，室温保存。（30）10转膜液1000ml甘氨酸144gTris碱30g加入HCl调整PH值到8.3，加去离子水定容到1000ml，室温保存。（31）1转膜液1000ml10转膜液100ml甲醇200ml去离子水700ml，室温保存。（32）10TBS溶液1000mlTris碱25.6gNaCl87.5g加入HCl调整PH到7.4，加去离子水定容到1000ml，室温保存。（33）0.1%TBST溶液1000ml1TBS1000mlTween-201ml，室温保存。（34）5%脱脂奶粉40ml伊利高蛋白脱脂高钙奶粉2g加0.1%TBST溶液定容至40ml，4保存。（35）0.1M PMSF溶液1mlPMSF17.42mg异丙醇1ml，-20保存。（36）stripping buffer500ml氯化钠15g乙酸17.5ml加去离子水至500ml，室温保存。（37）1PDL溶液20mlPDL原液1ml无菌去离子水19ml，4保存。（38）G418溶液100mg/mlG4181g加无菌去离子水至10ml0.22m一次性滤器过滤后分装，-20保存。（39）0.2%PBST溶液免疫荧光用250mlTriton X-100500l1PBS250ml，室温保存（40）封闭液PBSB免疫荧光用10mlBSA300mg山羊血清500l0.2%PBST10ml，4保存。（41）100DAPI溶液200g/mlDAPI1mg加去离子水定容至5ml，分装成0.1ml，-20避光保存。（42）1DAPI溶液2g/ml100DAPI溶液0.1ml去离子水10ml，4避光保存。（43）4多聚甲醛1mg多聚甲醛4g1PBS90ml60搅拌溶解6小时，调pH值于7.4，定容到100ml，4保存。（44）10% NP-40溶液100mlNP-4010ml加去离子水至100ml，4保存。（45）RIPA裂解液10ml10% NP-401ml甘油1ml0.5M EDTA (PH=8.0)20l加1PBS溶液定容到20ml，4保存。（46）PBS lysis buffer-GST pull down溶液50ml1PBS49.5mlTriton X-1000.5ml（47）GST pull down buffer50ml1M Tris-Cl（PH =8.0）1ml5M NaCl2ml0.5M EDTA1ml甘油5ml10%NP-402.5ml加去离子水定容至50ml。（48）考马斯亮蓝溶液1000