（药剂学专业论文）三氧化二砷骨髓靶向纳米粒的制备及药物动力学研究.pdf

中文全称三氧化二砷缩略语英文全称a r s e n i ct r i o x i d e英文缩写a s 2 0 3乳酸羟基乙酸共聚物p o l y l a c t i c - c o g l y c o l i ca c i dp l g a三氧化二砷一a r s e n i ct r i o x i d e a s 2 0 3 - p l g a - n p乳酸羟基乙酸共聚物一纳米粒聚乙烯醇白蛋白平均粒径包封率药一时曲线下面积分布半衰期消除半衰期表观分布容积清除率透射电子显微镜氢化物发生一原子荧光法药物靶向指数药物选择性指数p o l y l a c t i c - c o - - g l y c o l i ca c i d n a n o p a r t i c l e sp o l y v i n y la l c o h o lp v ab o v i n es o r u ma l b u m i nb s am e a nd i a m e t e rm de n t r a p m e n tr a t i oe ra r e au n d e rt h ec u r v ea u cd i s t r i b u t i o nh a l f - l i f et i m et 1 2 ae l i m i n a t i o nh a l f - l i f et i m et l 2 1 3a p p a r e n tv o l u m eo fv dd i s t r i b u t i o nc l e a r a n c ec l st r a n s m i s s i o ne l e c t r o nt e mm i c r o s c o p eh y d r i d eg e n e r a t i o na t o m i ch g a f sf l u o r o m e t r ys p e t r o p h o t o m e t r yd r u gt a r g e t i n gi n d e xd t id r u gs e l e c t i v i t yi n d e xd s i黑龙江中医药大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或机构已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。学位论文作者互室茎日期： 磅年歹月日关于论文使用授权的声明本人同意学校有权保留并向国家有关部门送交学位论文的复印件，允许论文被查阅和借阅。同意学校及国家有关机构有权公布论文的全部或部分内容，并采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本论文内容以任何形式公开发表或成果转让时须经导师同意。学位论文作者：曼壁垒日期：) ，萨月e l指导教师签名：趑日期：墙角刁7e l中文摘要 目的 制备三氧化二砷骨髓靶向纳米粒，考察其粒径、包封率及形态；考察其体外释放行为；研究三氧化二砷纳米粒在大鼠体内的药动学情况，计算相关参数；考察三氧化二砷纳米粒在小鼠体内的分布情况，评价靶向性。 方法 采用复乳一溶剂挥发法制备p l g a 载三氧化二砷纳米粒；运用透射电镜观察纳米粒形态，纳米粒度及z e t a 电位分析仪测定纳米粒的粒径及分布；运用动态透析法分离未被包裹的三氧化二砷，氢化物发生一原子荧光法测定砷的含量，计算纳米粒的包封率；采用动态透析法测定三氧化二砷纳米粒的体外释放情况；采用电热板消解法处理给药后大鼠血液样品及小鼠脏器样品，氢化物发生一原子荧光法测定砷的含量；应用3 p 9 7 药动学软件计算给药后大鼠体内药动学参数，以药物靶向指数和药物选择性指数评价给药后小鼠体内分布情况。 结果 复乳一溶剂挥发法制备p l g a 载三氧化二砷纳米粒溶液透明，呈淡蓝色并带有乳光；透射电镜下观察纳米粒为类似球形但不规则，大小比较均匀，大多数集中在1 0 0 r i m 左右；纳米粒度及z e t a 电位分析仪测定结果显示，纳米粒的粒径分布均匀，平均粒径为8 0 n m 左右；原子荧光法测定游离三氧化二砷含量，计算包封率结果表明，三氧化二砷纳米粒的平均包封率可达8 0 以上；三氧化二砷纳米粒的体外释放曲线证明三氧化二砷的p l g a 纳米粒释药缓慢，2 4 h 累积释放量接近4 0 ，4 8 h 累积释放量仅达4 5 左右，无明显的突释现象；大鼠体内药动学参数显示，三氧化二砷生理盐水溶液与三氧化二砷p l g a 纳米粒溶液的体内代谢存在较大差异，三氧化二砷p l g a 纳米粒溶液体内代谢较慢；小鼠体内分布结果显示，三氧化二砷p l g a 纳米粒可提高三氧化二砷的骨髓分布。 结论 应用复乳一溶剂挥发法成功的制备三氧化二砷p l g a 纳米粒，方法简单可行；纳米粒粒径小而均匀，形态较好，包封率较高；三氧化二砷p l g a 纳米粒释药缓慢，无突释效应；三氧化二砷p l g a 纳米粒可明显增长大鼠的消除半衰期；三氧化二砷p l g a 纳米粒可提高小鼠的骨髓分布，并减少肝脏的分布。 关键词 p l g a ；三氧化二砷；骨髓靶向；药动学；体内分布2a b s t r a c t【o b j e c t 】a s 2 0 3b o n em a r r o wt a r g e t e dn a n o p a r t i c l e sw e r ep r e p a r e da n dt h ep a r t i c l es i z e ，e n t r a p m e n tr a t ea n dm o r p h o l o g ya r ed e t e r m i n e d a l s ot h e 加v i t r or e l e a s ea n dt h ed i s t r i b u t i o nw e r es t u d i e d ，t oe v a l u a t et h ee f f i c a c yo ft a r g e t i n g 【m e t h o d t h ew o wd o u b l ee m u l s i o n - s o l v e n te v a p o r a t i o nm e t h o dw a se m p l o y e dt op r e p a r ea s 2 0 3 一p l g a - n p , w h i l et h ep l g aw a ss e l e c t e da sc a r r i e rm a t e r i a l t h em o r p h o l o g yo fn a n o p a r t i c l ew a ss c r e e n e db yt e m t h ep a r t i c l es i z ew a sm e a s u r e db yp a r t i c l es i z ea n dz e t ap o t e n t i a la n a l y z e r f r e ea s 2 0 3w a ss e p a r a t e df r o mn a n o p a r t i c l e 、析md y n a m i cd i a l y s i sa n dc h o o s ea t o m i cf l u o r e s c e n c em e t h o dt om e a s u r et h ed r u gc o n t e n ta n d 加v i t r or e l e a s eo fa s 2 0 3 1 1 1 ep l a s m as a m p l e so fr a t sa n dt i s s u es a m p l e so fm i c ew e r ed i s s o c i a t e db yh e a t i n g 1 1 1 ep h a r r n a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sw e r ec a l c u l a t e db y3 p 9 7c o m p u t e rp r o g r a m a n dn a n o p a r t i c l ed i s t r i b u t i o ni nm i c ew a se v a l u a t e db yd t ia n dd s i 【r e s u l t s l t h en a n o p a r t i c l es o l u t i o nl o o k sl i k et r a n s p a r e n ta n dw e a kb l u ei nc o l o r ，、) i r i t hal i t t l eo p a l e s c e n c e t e mg a v et h em o r p h o l o g yo fn a n o p a r t i c l ei ss p h e r i c a la n di r r e g u l a ri nf o r m t h em e a nd i a m e t e ro fn a n o p a r t i c l ei sa b o u t8 0n mo rs o 1 1 1 em e a ne n t r a p m e n tr a t eo fa s 2 0 3 - p l g a - n pc a m et om o r et h a n8 0 i nv i t r or e l e a s et e s ti l l u m i n a t e dt h ed r u gr e l e a s eo fp l g an a n o p a r t i c l ei ss l o w t h ec u m u l a t i v ep e r c e n t a g eo fd r u gi sn e a r l yt o4 0 a f t e rtv a d m i n i s t r a t i o n2 4 ha n dt o4 5 a f t e r4 8 h t h ep h a r m a c o k i n e t i cp a r a m e t e r sa n dd i s t r i b u t i o nr e s u l t so fa s 2 0 3 p l g a n ps u g g e s t e dt h a tt h em e t a b o l i s ms p e e do fa s 2 0 3 - p l g a - n pi ss l o w e rt h a na s 2 0 3n o r m a ls o l u t i o na n da s 2 0 3 - p l g a - n pc a l lr e a l l yp r o m o t et h ed r u gc o n t e n ti nb o n em a r r o w 【c o n c l u s i o n 】w o wd o u b l ee m u l s i o ne v a p o r a t i o ni sas i m p l ea n df e a s i b l em e t h o d a s 2 0 3 - p l g a - n pi si ns m a l la n dh o m o g e n e o u ss i z e ，g o o dm o r p h o l o g ya n dh i 曲e n t r a p m e n tr a t e d r u gr e l e a s e ds l o w l ya n dn ob u r s tr e l e a s e a s 2 0 3 - p l g a n pc o u l dp r o l o n gt h ee l i m i n a t i o nh a l f - l i f et i m ei nr a t sm a r k e d l y ，a l s oi tc a ni n c r e a s et h ed r u gd i s t r i b u t i o ni nb o n em a r r o wo fm i c ea n dr e d u c et h ed r u gd i s t r i b u t i o ni nl i v e r 【k e yw o r d s 】p l g a , a r s e n i ct r i o x i d e , b o n em a r r o wt a r g e t i n g ，p h a r m a c o k i n e t i c s ，t i s s u ed i s t r i b u t i o n3- 屿! 皇，莉吾近年来，随着对中药应用的重视和新用途的开发，越来越多的中药被制成适宜的剂型应用于临床。而纳米技术( n a n o t e c h n o l o g y ) 作为“2 1 世纪的决定性技术 已不仅仅广泛应用于材料学、电子学、生物学、显微学等领域，在药物新剂型的开发中也逐渐被应用，并获得了突破性进展。纳米技术在药学领域中的应用，已展现出巨大潜力。国内外众多研究表明，以纳米技术制备的聚合物纳米给药系统，可以降低药物的毒副作用、延缓体内释放、实现靶向分布等，因此成为解决抗恶性肿瘤类药物体内消除半衰期短，对其它组织、器官毒副作用严重的一个极为有效的方法。三氧化二砷做为目前治疗急性早幼粒细胞白血病( a p l ) 的首选药物，由于其较同类治疗药物疗效显著，在临床中治疗a p l 中被人们寄予很高的希望，但是由于三氧化二砷目前的应用品种对其它组织器官有一定的毒副作用，又使其应用受到限制。因此，开发降低三氧化二砷毒副作用、提高靶器官分布的新剂型是目前亟需解决的问题。为了解决上述问题，本课题选择p l g a 做为三氧化二砷的载体材料，通过对其处方工艺、体外释放、药物动力学和体内分布的研究，制备了三氧化二砷骨髓靶向纳米粒，为其它毒性中药的新制剂研究及靶向制剂的开发提供理论基础。4文献综述一、急性早幼粒细胞白血病( a p l ) 的发病机制及治疗手段a p l 是一种特殊类型急性髓系白血病，是由于比造血干细胞稍分化的只有短时间内的自我复制的骨髓系前体细胞水平的基因异常所引发 1 ，最基本的病理改变是骨髓内异常早幼粒细胞的恶性增生和浸润。临床表现为爆发性起病、病程进展迅猛、贫血、发热、感染及出血。其中出血最常见，而且严重，范围广泛，主要表现为淤点、小瘀斑和融合成片的大瘀斑、血尿、龈血、静脉和骨髓穿刺部位的出血 2 ，3 j ，皮肤、粘膜及各器官均可发生出血，特别易发生播散性血管内凝血( d i c ) ，导致严重的颅内出血，死亡率很高，而且a p l 并发d i c 几率很高，约8 0 a p l 在发病早期就存在凝血功能异常【4 。目前常用的治疗a p l 手段主要包括：造血干细胞移植、单克隆抗体、化学疗法( 联合化疗) 。由于造血干细胞移植及单克隆抗体治疗a p l 较难实现，因此化学疗法 5 1 0 是目前临床中常用的治疗方法。在2 0 世纪8 0 年代及9 0 年代初，全反式维甲酸治疗a p l 最为常见。由我国血液科学家首创的( a t r a ) 诱导分化治疗a p l ，完全缓解率可达8 0 9 0 ，出血、感染合并症明显减少。但有不良反应：除皮肤、粘膜干燥、食欲不振、肝功受损、三酰甘油升高及颅内压增高外，还会出现较严重的维甲酸综合症( r a s ) ，表现为高热、体重增加、肺浸润、胸水，严重者可发生急性呼吸窘迫综合征。而且经a t r a 治疗复发的a p l ，采用a t r a 再诱导的缓解率较低。除a t r a 外，三尖杉酯碱( h a ) 、阿糖胞苷及葸环类药物( 柔红霉素) 也在a p l 治疗中有一定的应用，但存在严重的骨髓抑制。2 0 0 5 年6月，他米巴罗汀( a m n o l a k e ) 由日本新药株式会社( n i p p o ns h i y a k u ) 开发并上市，主要用于a p l 复发或难治性病例的治疗，临床研究表明，不良反应发生几率较高。自2 0 世纪7 0 年代 1 1 - 1 5 ，哈尔滨医科大学应用a s 2 0 3 为主要成分的癌灵i 号通过大量的临床实践发现该药治疗a p l 的有效性。到现在，大量临床实践证明每日注射a s 2 0 ，治疗a p l 初发完全缓解率可高达7 0 以上，治疗a p l 复发完全缓解率可高达5 0 以上。5 年和1 0 年生存率可高达5 0 和2 5 以上；隔日注射均获缓解，缓解率达1 0 0 ，治疗中未出现明显的毒副作用。a s 2 0 3 治疗复发性a p l 过程中呈现较轻微的毒5性反应，对症处理后可消失，不引起骨髓抑制，d i c 和高纤溶状态也能很快得以纠正。1 9 9 9 年我国s d a 批准由哈尔滨伊达药业有限公司生产的亚砷酸氯化钠注射液( 伊泰达，国药准字h 1 9 9 9 0 1 9 1 ) 已经在国内上市；c e l lt h e r a p e u t i c s 公司生产的t r i s e n o x也于2 0 0 0 年由美国f d a 批准上市，2 0 0 2 年在欧洲上市。二、三氧化二砷的抗肿瘤作用及其机制的研究进展三氧化二砷( a s 2 0 3 ) ，即砒霜，是我国的传统中药，从古代就开始用于“疗诸疟，风痰在胸膈，可作吐药。”但“不可久服，伤人。本草纲目记载：“除朐喘积痢，烂肉，蚀瘀腐瘰疠。又“蚀痈疽败肉，枯痔杀虫。 近代以来，研究人员继续开发它的其它药用价值，哈尔滨医科大学在研究中发现该药物在治疗急性早幼粒性白血病( a c u t ep r o m y e l o c y t i cl e u k e m i a , a p e ) 方面疗效突出。随后，广大学者对a s 2 0 3 的抗肿瘤的药用作用做了广泛而深入的研究，发现该药物不止对a p l 有很好的疗效，同时，对于其它的恶性肿瘤及白血病，如：胆管癌细胞、卵巢癌细胞等也疗效非凡。a s 2 0 ，在治疗a p l 方面疗效显著，研究最为深入，应用也最为广泛，目前国内已有注射液产品上市并广泛应用于临床。在治疗a p l 的研究中，有学者认为其作用机制主要是：1 与含巯基酶结合，抑制酶活性，干扰其生理功能，从而直接影响细胞代谢、氧化、核分裂；2 诱导酪氨酸激酶活性变化，调控细胞信号传导；3 促进细胞线粒体a t p 消耗；4 激活细胞诱导表达f a s 抗原、引起细胞凋亡；5 下调凋亡抑制基因b c l 一2的表达，诱导肿瘤细胞凋亡；6 降低血管内皮生长因子( v e g f ) 基因蛋白表达，抗肿瘤血管的形成 1 6 j 。其中已经有人证明了下调b c l 一2 基因的表达，并b e l 一2 基因反义寡核苷酸能提高k 5 6 2 白血病细胞对砷剂的药物敏感性，反义寡核苷酸与a s 2 0 3 的联合应用明显加强a s 2 0 3 诱导k 5 6 2 细胞的凋亡率 1 7 。而且有实验结果显示，a s 2 0 3 引起n b 4( 急性早幼粒性白血病细胞株) 细胞凋亡的浓度明显低于引起k 5 6 2 ( 慢性髓系白血病急变细胞株) 细胞凋亡的浓度( 4 5 倍) ，证明a s 2 0 3 对a p l 作用显著 1 8 。最初研究a s 2 0 ，的抗恶性肿瘤作用时主要用于治疗早幼粒细胞白血病，几乎不用于其他白血病亚型，但是近几年来陆续有报道a s 2 0 3 对顽固或难治性骨髓瘤有一定疗效 1 9 ，如难治或复发性骨髓瘤 2 0 j 、急性髓系白血病( a m l ) 2 1 等。a s 2 0 ，除了对不同类型造血系统病变有良好的疗效，在其他恶性肿瘤的治疗中也体现出其卓越效果。体外实验证实，a s 2 0 3 对宫颈癌、肝癌、胃癌、食管癌、结肠癌、卵巢癌、乳腺癌细胞等均有明显的生长抑制及诱导凋亡作用 2 2 _ 2 8 ，如对肝癌的治疗中 2 9 ，6a s 2 0 ，对作为肝癌细胞周期的调控因子的p 2 7 k i p l 、s k p 2 作用显著，在参与肿瘤的发生发展过程中，a s 2 0 3 降低s k p 2 的表达，引起p 2 7 k i p l 表达增加，从而影响肿瘤细胞的生长；a s 2 0 3 还可有效抑制人膀胱e j 细胞株生长增殖 1 6 ；a s 2 0 3 还可以使人胃癌b g c 一8 2 3 细胞生长显著受到抑制，诱导细胞发生凋亡，抑制作用随a s 2 0 3 浓度的升高及作用时间的延长而增强，细胞的端粒酶活性明显下降，细胞h t e r t 基因的转录表达显著抑制，b g c 一8 2 3 细胞端粒酶活性的下调与a s 2 0 3 作用时间和浓度有关，呈现明显的时间一剂量效应关系 3 0 j 。a s 2 0 3 作为一种细胞毒性药物，能抑制细胞d n a 的合成，干扰细胞代谢，致染色体畸变或损害细胞基因。这种作用一方面发挥了其抗恶性肿瘤的作用，一方面也给机体造成较大的损害。目前常用的品种是亚砷酸注射液，静脉给药后由于血浆砷浓度很快升高并迅速弥散至周围组织，可使病人出现消化道症状、末梢神经炎、皮肤干燥、色素沉着，甚至出现肾功能损害或胸腹水等毒副作用 3 1 ，3 2 ，轻度症状可以对症治疗并不需要停药，症状严重应停药，停药后一段时间内可以恢复。三、骨髓靶向纳米粒制剂的研究进展靶向给药系统( t a r g e t - o r i e n t e dd r u gs y s t e m ，t o d d s ) ，亦称靶向制剂，是指借助载体、配体或抗体将药物通过局部给药或全身血液循环而选择性地浓集于靶组织、靶器官、靶细胞或细胞内结构的制剂，从粒径上属于胶体给药系统。骨髓是人体最大的造血器官，也是人体重要的免疫器官，因存在骨髓一血屏障( m a r r o w - b l o o db a r r i e r , m b b ) ，药物通常难以进入骨髓。因此当骨髓发生病变时，由于它的免疫作用，而使传统的普通制剂很难进入，而且当前大量的抗肿瘤药，抗病毒药都存在着对其他组织器官的严重的不良反应，因此，骨髓靶向制剂的研究显得尤为重要。纳米粒( n a n o p a r t i c l e s , n p ) 是一类由高分子物质组成的固态胶体颗粒，粒径在1 0 一1 0 0 0 n m ，可以分散在水中形成近似胶体的溶液。表面疏水性纳米粒通过静脉给药，可以被网状内皮系统的吞噬细胞所吞噬，因此表现出明显的肝、脾、骨髓等器官与组织的分布靶向性即天然靶向性( 被动靶行性) 3 3 ，3 4 j 。纳米粒由于其具有天然的靶向性、稳定的物理化学性质、较高的物理强度和易于表面修饰等优点，而在新型载药系统中应用越来越广泛 35 | 。这就提示我们可以利用纳米粒来实现骨髓靶向。1 治疗范围、骨髓的特点及作用机制骨髓靶向制剂是针对细菌和病原体导致的骨髓感染性疾病及骨髓自身肿瘤，如白7血病、多发性骨髓瘤、骨髓转移瘤等疾病，因此其药物大多为抗肿瘤药物。骨髓的内皮是骨髓造血组织和血循环之间的真实屏障 3 6 ，但是这并不意味着任何粒子都不能透过这道屏障。某些骨髓内皮细胞可向四周延伸变薄变细，在特定区域形成孔径大约1 0 0 n m 的孔道，因此小于1 0 0 n m 的粒子通过这道屏障的几率就大大提高 3 7 。事实上并不是只有1 0 0 n m 以下的粒子才可以进入骨髓，大粒度的微粒也有少量富集于骨髓，这是因为进入血液循环的微粒被机体识别为异物，骨髓通过吞噬作用而使微粒进入骨髓。骨髓靶向纳米粒的作用原理可能是骨髓有特异的转运方式，也可能是内皮细胞表面有特异受体，目前尚不清楚，因此还需要在生理学、免疫学等学科做深入的研究。2 载体材料目前常用的载体材料有天然高分子材料，如白蛋白 3 8 j 、磷脂、淀粉、壳聚糖 3 9 等。人工合成高分子材料如：p l a 、p l g a 、聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸等。在r a i n w eh m等的研究中，以聚氰基丙烯酸烷酯类、聚甲基丙烯酸甲酯和聚乳酸等人工合成高分子材料作为载体，长期应用由于它们在体内降解速度缓慢而导致蓄积中毒 删。但有报道以聚烷基氰基丙烯酸酯作为纳米粒的载体，注射后可以明显提高骨髓分布 4 1 4 2 。g r i s l a i n 等也证实了聚合物制备的纳米粒放射标记注射后，可以显著提高骨髓的分布 4 3 。近期还有研究显示聚氰基丙烯酸异己酯( p m c a ) 纳米粒大量聚集在骨髓的巨噬细胞和粒细胞中 4 4 。白蛋白及磷脂因其有很好的生理相容性，化学性质稳定，易于降解，而且不容易蓄积而被广泛应用 4 别。除了以上应用成熟的载体材料外，也有一些载体不断地被应用于纳米粒的制备，如聚丙烯酸树脂类( e u d r a g i t 系列：e 1 0 0 ，l 1 0 0 ，l 1 0 0 5 5 ，s 1 0 0 ) 。3 制备方法：由于新型载体材料的不断出现，以及现代化机械的广泛应用，纳米粒的制备方法也越来越多，本综述只就常用的高效方法进行介绍 4 s - 5 5 。3 1 聚合法3 1 1 乳化增溶聚合法是利用聚合物的单体可以在引发剂的作用下聚合而使药物被包裹在聚合物内部的方法。如聚氰基丙烯酸烷酯纳米粒的制备：首先在搅拌条件下将聚氰基丙烯酸烷酯单体滴入水相( 含药物和稳定剂的酸性水溶液) ，经过搅拌乳化成乳状液，调节p h 值使之8交联，继续搅拌而得到纳米粒。此方法制备纳米粒可以通过控制引发剂的量来控制聚合反应的速度和程度，因而达到控制粒径的目的。但此方法制得的纳米粒很软而且易于粘连，因此需要使用稳定剂来保证它的稳定性。3 1 2 乳化加热固化法此法适用于耐热的水溶性药物纳米粒的制备。将药物和蛋白质分散在水相中，与一定量的油乳化形成初乳，利用蛋白质加热可以固化的性质，将初乳加入到1 0 0 - 1 8 0的油中，固化分离得到纳米粒。3 1 3 交联聚合法( 天然高分子聚合法)此法适用于热敏性的药物以及载体材料为亲水性的蛋白质类大分子，如明胶、白蛋白等。这类载体材料可以在交联剂甲醛、戊二醛等的作用下，使蛋白质单体与醛类交联剂发生氨醛缩合反应而成。这种方法得到的是1 - 5 i ，t m 微球，可以通过加入溶剂化剂使其再分散达到纳米级别，但此时包封率会有较大影响。现已有人成功制备了白蛋白纳米粒，且其粒径及分布基本上不受白蛋白浓度、乳化时间、超声波的强度、水油两相体积比的影响，由于对仪器设备要求不高、影响因素较少，所以是一种常用的制备方法。3 1 4 其他聚合法如辐射聚合法和界面聚合法。分别是利用射线照射或使单体在界面处引发聚合反应而包裹药物形成纳米粒。3 2 液中干燥法3 2 1 溶剂挥发法将载体材料溶解在有机相中，根据药物的极性大小，可以选择采用o w 、w o 的方法，通过搅拌或超声使之形成乳剂，然后将有机相挥发除去即可得到纳米粒。3 2 2 复乳法是目前应用最为广泛的方法，分为o w o 、w o w 两种，其中w o w 最常用。下面简单介绍w o w 法制备纳米粒的过程：药物溶解或分散在水溶液中作为内水相，载体材料溶解在有机相中，搅拌或超声将两相乳化形成初乳，再加入含有乳化剂的外水相进一步乳化形成复乳，蒸发除去有机溶剂得到纳米粒。此法制各纳米粒简单、对设备要求低，而且由于乳化剂的加入可以显著减小粒径、提高稳定性，有机溶剂也可以完全除去，不会造成残留。93 3 机械法3 3 1 胶体磨法是利用胶体磨的剪切力的作用，将不相溶的油水两相混合、乳化而形成纳米粒。这种方法形成的纳米粒一般粒径较大( 1 0 0 0 n m ) ，而且循环体积大( 实验室用最小约5 l ) ，所以并不是应用广泛的方法。3 3 2 高压均质法利用高压均质机制备纳米粒，是目前制备纳米粒的高效方法之一。此法制备的纳米粒粒径小且分布范围窄，市场上也有不同规格的高压均质机可供选择，便于工业化生产。制备时可以直接将水相和有机相加入到高压均质机，设置一定的压力及循环次数，即可形成分布很窄的纳米乳；也可以采用上述的制备方法制备纳米乳，然后经高压均质机细化，使之粒径减小并分布均匀。高压均质法的缺点在于包封率较低，这是因为压力较大、循环时间较长，对纳米粒会造成一定的破坏。4 表面修饰及其他材料粒子经过表面修饰后达到表面亲水，从而可以避免肝，脾巨噬细胞的摄取而达到骨髓靶向的作用。常常采用p e g 、p o l o x a m e r 和p o l o x a m i n e 作为修饰材料 5 5 ，5 6 j 。在用p e g 进行结构修饰时，可以将p e g 与载体材料结合成化学键，然后制备纳米粒，这样p e g 可以有效的结合在纳米粒的表面矧；蒋新宇等以带阴离子的三聚磷酸钠( t p p )作为胶联剂，用带阳离子的壳聚糖作为载体材料，可以形成纳米级的聚电解质复合物 5 8 1 ；i l i u m 制备了p o l o x a m c r 4 0 7 修饰的聚苯乙烯毫微粒( 6 0n n l ) 体内分布结果显示：阻断家兔肝摄取( 由原来的9 0 下降到1 7 ) ，同时骨髓中分布量提高近1 0 倍 5 9 ；此外，还有提高大鼠骨髓分布约3 倍的报道 6 0 i 。对比未经修饰和表面修饰的纳米粒小鼠体内分布，发现2 4 h 内p o l o x a m e r ( 4 0 7 、1 8 4 、3 8 8 ) 、p o l y s o r b a t e ( 6 0 、2 0 ) 修饰的纳米粒骨髓分布较未经修饰的纳米粒显著增加 6 1 | 。经p o l o x a m e r 4 0 7 、9 0 8 修饰的p l g a 纳米粒在兔体内分布结果显示，大腿骨中的分布可提高为未修饰的p l g a 纳米粒的5 倍以上，同时也减少了在肝中的分布 6 2 。5 质量评价5 1 粒径大小及影响其分布的因素纳米粒的粒径大小对其靶向性有着决定性的影响作用。据报道，粒径小于l o o n m的粒子可进入骨髓，而且粒径越小越容易 6 3 6 5 。因此骨髓靶向纳米粒制备的关键是控1 0制粒子的大小和获得较窄且均匀的粒度分布。不同粒径的柔红霉素一聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒经小鼠尾静脉注射给药后，体内分布情况为：小粒径组( 7 0 + 2 4 ) n m 的骨髓分布量是大粒径组( 4 2 5 7 5 ) m n 的1 5 8 倍 6 6 3 ；k a l i nb 等考察了大粒径组胶体( 2 0 0 -1 0 0 0 n m ) 和小粒径组胶体( 8 0 ) 和较高的载药量( 3 0 ) 但是实际却很难达到。在陈建海等的研究中 6 9 ，随着药载比的增加，可以增加纳米粒的载药量，但是包封率却明显下降。5 3 体外释放及突释现象一般用动态的体外释放来描述含药纳米粒在体内的突释现象 7 0 。根据中国药典规定，纳米粒在0 5 h 内的释放不得超过4 0 。5 4 靶向性验证靶向性的重要手段是检测药物的体内分布。进行体内评价常用放射性同位素标记技术 7 1 和含量测定两种方法：放射性同位素标记可采用两种方式，一种方式是在微粒表面进行标记；另一种方式是先标记药物，然后制备微粒。含量测定法是对待检验的组织器官进行处理，在一定测定条件下，与标准溶液进行比较。这两种方法都是根据药物在骨髓的富集情况确定靶向性 7 2 。评价药物的靶向性有两个指标：药物靶向指数( d r u gt a r g e t i n gi n d e xd t i ) 和药物选择性指数( d r u gs e l e c t i v i t yi n d e xd s i ) 7 3 j 。表达式分别为：d t i = 给予含药纳米粒后t 时刻某器官的药物量给予非纳米粒制剂后t 时刻某器官的药物量d s i = t 时刻靶器官中药物量t 时刻非靶器官的药物量其中d t i 用于比较不同给药系统对器官的趋向性，而d s i 是用于比较同一给药系统对不同器官的趋向性的差异。5 5 药动学将含药纳米粒经动物口腔或尾静脉给药，分别于不同时间采血，测定血药浓度，求得各个药动学参数：c 一、t m 娃、v d 、c l s 、a u c 、t l 2 a 、t l 部等，以此来评价纳米粒的体内药动学过程。b a z i l ed v 7 3 等研究以白蛋白包衣的p l a 的生物降解，以c 1 4标记，第一天迅速消除( 约给药剂量的3 0 ) ，以后减慢。6 骨髓靶向纳米粒的应用展望目前，靶向纳米粒的研究越来越深入，包裹的药物种类也越来越多。但综合这些药物来看，大多数还是用于治疗肝癌、肺癌等普通纳米粒可以治疗的疾病。因此，对于骨髓疾病的诊断和治疗就特别需要特殊的药物纳米粒一一骨髓靶向纳米粒，这样不仅可以减少药物对其他组织器官的不良反应，同时也可以实现药物高度的对症治疗。四、三氧化二砷骨髓靶向纳米粒的制备尽管a s 2 0 3 在治疗其他恶性肿瘤中有较好疗效，但是它对a p l 的非凡疗效让众多研究者更青睐它在骨髓造血系统病变的应用。而且由于a s 2 0 3 本身是传统毒药，不良反应较多，因此，为了减少或避免对其他正常组织、器官的影响，提高病变部位的药物浓度，制备a s 2 0 3 骨髓靶向纳米粒是非常必要的。参考文献 1 松村到白血病日本医学介绍 j ，2 0 0 6 ，2 7 ( 1 1 ) ：5 0 0 - - 5 0 3 2 温建成，杜欣急性旱幼粒细胞白血病6 4 例血象和骨髓象分析陕两医学杂志 j ，1 9 9 9 ，2 8( 5 ) ：3 0 0 3 0 2 3 l e u k e m i a , 2 0 0 4 ，18 ：3 7 5 - 3 8 4 4 周晋，孟然急性早幼粒细胞白血病发生d i c 的机制及治疗d , j l 急救医学 j ，2 0 0 5 ，1 2 ( 1 ) ：4 6 5 羊裔明急性白血病治疗进展四川肿瘤防治 j ，1 9 9 7 ，1 0 ( 4 ) ：4 6 - 4 9 6 朱其聪，符珍，朱育华急性早幼粒细胞白血病临床治疗分析海南医学 j ，2 0 0 2 ，1 3 ( 2 ) ：1 6 - - 1 7 7 马丽辉，张金梅急性早幼粒细胞细胞性白血病的治疗山西临床医药杂志 j ，2 0 0 0 ，9 ( 1 ) ：1 25 5 5 6 8 王杰松，陈志哲急性早幼粒细胞白血病的治疗现状医学综述 j ，2 0 0 7 ，1 3 ( 1 1 ) ：8 3 8 - - 8 4 0 9 范星火，权守则，牛艳萍等急性早幼粒性白血病不同治疗方法的初步分析山西医学院学报 j ，1 9 9 5 ，2 6 ( 3 ) ：2 3 3 - - 2 3 5 1 0 李欣，宋善俊急性髓细胞性白血病和急性早幼粒细胞性白血病的治疗进展临床内科杂志 j ，2 0 0 4 ，2 1 ( 1 ) ：6 5 6 7 1 1 毕玲玲，马琴，王树庆复方青黛片治疗复发性急性早幼粒细胞白血病3 2 例中华儿科杂志 j ，2 0 0 5 。4 3 ( 9 ) ：7 0 2 7 0 3 1 2 d o u e rd ，e s t e ye ，s a n t i l l a n as , e t a l t r e a t m e n to f n e w l yd i a g n o s e da n dr e l a p s e da c u t ep r o m y e l o c y t i cl e u k e m i aw i t hi n t r a v e n o u sl i p o s o m a la l l - t r a n sr e t i n o i ca c i d j b l o o d ，2 0 0 1 ，9 7 ( 1 ) ：7 3 - 8 0 1 3 郭萌，赵倩，黄莺等三氧化二砷治疗急性早幼粒细胞白血病研究进展中国药物与临床 j ，2 0 0 3 ，3 ( 4 ) ：2 9 1 - - 2 9 5 1 4 周建中，孙华青，邱镜滢三氧化二砷治疗复发和难治性a p l 的研究进展临床血液学杂志 j ，2 0 0 3 ，1 6 ( 1 ) ：4 3 4 5 1 5 孟秋，王京华，凌丽等亚砷酸隔日静注治疗急性早幼粒细胞白血病航空航天医药 j ，2 0 0 4 ，1 5 ( 4 ) ：1 9 5 1 9 8 1 6 屈小骅，盛玉文a s 2 0 3 诱导人膀胱i u 细胞株凋亡作用的体外研究 j 辽宁医学院学报，2 0 0 7 ，2 8 ( 4 ) ：4 4 4 7 1 7 沈伟利，李弘，张洹b c l 一2 反义寡核苷酸增强k 5 6 2 白血病细胞对a s 2 0 3 诱导人膀药物敏感性 j 中国实验血液杂志，2 0 0 1 ，9 ( 2 ) ：1 2 4 - - 1 2 7 1 8 沈伟利，张洹白血病细胞对三氧化二砷的不同敏感性 j 暨南大学学报( 医学版) ，2 0 0 1 ，2 2( 4 ) ：1 5 1 9 黎金庆，武淑兰骨髓瘤细胞系u 2 6 6 和急性髓系性白血病细胞系k g i a 细胞内砷浓度与细胞凋亡的关系 j 广西医科大学学报，2 0 0 7 ，2 4 ( 5 ) ：6 6 7 - 6 6 9 2 0 b a h l i sn j ，m c c a f f e r t yg j ，j o r d a nm ，e ta 1 f e a s i b i l i t ya n dc o r r e l a t e so fa r s e n i ct r i o x i d ec o m b i n e dw i t ha s c o r b i ca c i d - m e d i a t e dd e p l e t i o no fi n t r a c e l l u l a rg l u t a t h i o n ef o rt h et r e a t m e n to fr e l a p s e d r e f r a c t o r ym u l t i p l em y e l o m a c l i nc a n c e rr e s ，2 0 0 2 8 ( 1 2 ) ：3 6 5 8 - - 3 6 6 8 2 1 许民，乔振华，许莲蓉等f t i 一2 7 7 抑制急性髓系白血病细胞增生及增强三氧化二砷诱导细胞凋亡的作用 j 白血病淋巴瘤，2 0 0 7 ，1 6 ( 1 ) ：1 9 - 2 2 2 2 s o o - j o n gu m ，s o - - y o u n gl e e ，e u n - j o ok i m ，e ta 1 d o w n - - - r e g u l a t i o no fh u m a np a p i l l o m a v i r u se 6 e 7o n c o g e n e b ya r s e n i c t r i o x i d e i nc e r v i c a l c a r c i n o m a c e l l s c a n c e r l e t t e r s 2 0 0 2 ：1 8 1 ( 1 ) ：1 1 2 3 x i ed o n g x u , y i ns u o ，o uy i n x i a n , e ta 1 a r s e n i ct r i o x i d ei n d u c e da p o p t o s i sa n di t sm e c h a n i s m si nah u m a ne s o p h a g e a ls q u a m o u sc a r c i n o m ac e l ll i n e c h i n e s em e d i c a lj o u r n a l2 0 0 2 ；115 ( 2 ) ：2 8 0 2 4 t c z h a n g ，e - h c a o ，j 一e l i ，e t a l i n d u c t i o n o f a p o p t o s i s a n d i n h i b i t i o n o f h u m a n g a s t r i c c a n c e r1 3m g c 8 0 3c e l lg r o w t hb ya r s e n i ct r i o x i d e e u r o p e a nj o u r n a lo f c a n c e r1 9 9 9 ；3 5 ( 8 ) ：1 2 5 8 2 5 k a t yp y s i u , j u d yy w c h a n , k e f u n g e f f e c to fa r s e n i ct r i o x i d e0 1 1h u m a nh e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m ah e p g 2c e l l s ：i n h i b i t i o no f p r o l i f e r a t i o na n di n d u c t i o no f a p o p t o s i s l i f es c i e n c e s2 0 0 2 ：7 1 ( 3 ) ：2 7 5 2 6 曾玉华，唐良苔，阳志宁三氧化二砷对人卵巢癌细胞株s k o v 3 细胞增殖抑制的影响 j 肿瘤防治研究2 0 0 5 ；3 2 ( 5 ) ：2 8 7 2 7 g e r m a n ob a j ，a l b e r t o a m u l f o ，s i l v i ad e a g l i o ，e ta 1 a r s e n i ct r i o x i d ea n db r e a s tc a n c e r ：a n a l y s i sc ft h ea p o p t o t i c ，d i f f e r e n t i a t i v ea n di m m u n o m o d u l a t o r ye l e c t s b r e a s tc a n c e rr e s e a r c ha n dt r e a t m e n t2 0 0 2 ；7 3 ( 1 ) ：6 1 2 8 y o s h i h i t on a k a g a w a ，y u k i h i r oa k a o ，h i r o s h im o r i k a w a , e ta 1 a r s e n i ct r i o x i d e - i n d u c e da p o p t o s i st h r