尖顶羊肚菌人工栽培.pdf

食用菌学报2010 17 1 32 35 收稿日期 2010 02 09 原稿 2010 03 10 修改稿 基金项目 国家 十一五 科技支撑计划项目 编号 2008BADA1B03 的部分研究内容 作者简介 赵丹丹 1979 女 2006 年毕业于云南大学生物科学院 硕士 助理研究员 主要从事真菌资源利用及 育种研究 本文通讯作者 E mail tiangt yahoo com cn 文章编号 1005 9873 2010 01 0032 04 尖顶羊肚菌人工栽培 赵丹丹1 李凌飞2 赵永昌3 钱金良1 田果廷3 1云南省农业科学院农业经济与信息研究所 云南昆明 650205 2云南农业大学食品科学技术学院 云南昆明 650201 3云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 云南昆明 650223 摘 要 采用 3 种母种培养基和 5 种原种培养基对分离到的一株尖顶羊肚菌 Morchella conica 进行人工栽 培 并探讨了温度 光照和覆土对羊肚菌菌丝生长和出菇的影响 结果表明 母种培养基 M1 与原种培养基 Y1 最有利于菌丝生长和菌核形成 Y1 培养基有利于羊肚菌子实体的形成 且在菌丝满袋后不覆土 强光刺激 48 h 室温 13 23 处理下实现出菇 关键词 羊肚菌 培养基 人工栽培 羊肚菌 Morchella 是一种著名食 药 用真 菌 其子实体富含蛋白质 多糖 核酸 多种微量 元素以及维生素 有增强免疫功能 抗疲劳 抗衰 老 抗肿瘤 抗诱变 降血脂等多种功效 深受人 们喜爱且在国际市场十分走俏 1 4 然而由于羊 肚菌的生长对气候 土壤等环境条件的要求 其 分布范围相对狭窄 自然产量低 远不能满足人 们的需要 多年来 羊肚菌的人工驯化栽培一直 是菌物界的研究热点之一 虽然国内外均有成功 栽培羊肚菌的报道 但迄今为止尚未见商品化栽 培的羊肚菌应市 5 且国内羊肚菌栽培存在大田 栽培出菇不稳定和室内栽培不出菇的尴尬状 况 6 我国西南地区是羊肚菌资源分布最广泛 和种类最丰富的地区之一 7 笔者分离了采自该 地区的一株尖顶羊肚菌 并进行培养条件和栽培 技术研究 以期为羊肚菌的人工栽培和开发利用 提供参考 1 材料与方法 1 1 供试菌株 羊肚菌子实体样品采自云南省玉龙纳西族 自 治 县 鲁 甸 乡 对 其 进 行 IT S Internal Transcribed Spacers 序列比对 结合形态解剖 学分 类 鉴 定 为 尖 顶 羊 肚 菌 Morchella conica 8 9 1 2 培养基 1 2 1 孢子分离培养基 F1 L 杨树枝 杨树根浸出液 200 mL 滇 杨 Pop ulus yunnanensis 枝条 70 g 滇杨根 30 g 水 500 mL 煮沸 5 min 冷却过滤 葡萄糖 10 g 蔗糖 5 g 麦芽糖 1 g 牛肉膏 1 g 酵母膏 1 g KH2PO40 1 g NH4 3PO40 5 g MgSO4 0 05 g 烟酸 2 g 琼脂 20 g 1 2 2 母种培养基 M1 L 麦粒 200 g 按郁建强等的方法处 理 10 葡萄糖 10 g 维生素 B1 0 1 g 琼脂15 g M2 L 马铃薯 200 g 葡萄糖 20 g 琼脂 20 g M3 L 葡萄糖10 g 蔗糖 5 g 麦芽糖 1 g 牛 肉膏 4 g 酵母膏 4 g KH2PO41 g NH4 3PO4 0 5 g MgSO40 5 g 维生素 B1 0 1 g 烟酸2 g 琼脂 15 g 1 2 3 原种培养基 Y1 麦粒 100 按魏银 初等的方 法处 理 11 含水量 55 Y2 棉子壳 70 杨树木屑 25 麦麸 4 Ca OH 21 含水量 60 Y3 杨树木屑 70 棉子壳 25 麦麸 4 Ca OH 21 含水量 60 Y4 草 糠 70 棉 子 壳 25 麦 麸 4 第 1 期赵丹丹 等 尖顶羊肚菌人工栽培 Ca OH 21 含水量 60 Y5 棉子壳 95 麦麸 4 Ca OH 21 含 水量 60 1 3 孢子收集及悬液制备 选取 8 至 9 成熟生长健壮的羊肚菌子实体 按照赵琪等的方法收集孢子 12 参照陈士瑜的方 法制备 100 300 个 mL 的孢子悬浮液 13 1 4 孢子分离及菌丝培养 取 0 1 mL 孢子悬浮液均匀涂布于直径为 9 cm的 F1 平板上 25 培养 5 d 计算萌发率 分 别挑取 5个单菌落尖端的菌丝至新的 F1 平板上 培养 按照沈萍等的方法制作水封片 14 显微镜 下观察羊肚菌菌丝形态特征 在菌丝生长最旺盛 的平板上挑取尖端菌丝体移接到 F1 斜面 于 25 培养获得羊肚菌试管种 1 5 母种培养 将羊肚菌试管种转接于 F1 平板中 25 培 养 4 d 制成平板菌种 取直径为 3 mm 的菌块分 别接到直径为 9 cm 的 M1 M2 和 M3 平板中央 25 培养 每隔 12 h 观察 1 次 观测菌丝生长速 度 长势 菌核形成时间及大小 13 每处理 5 个 重复 1 6 原种培养和出菇 在 M1 制成的平板母种上取直径为 3 mm 的 菌块 分别接种在 Y1 Y2 Y3 Y4 Y5 原种培养 料内 采用 33 cm 15 cm 0 005 cm 的聚丙烯 折角 袋 装料 每 袋 装 料量 折 合 干 重 350 g 0 14 MPa蒸汽灭菌 150 min 每袋接种 4 个菌 块 室温 16 23 培养 菌袋定期划线观测菌 丝长速 长势 颜色 自溶情况 气生菌丝状况 菌 丝满袋和菌核形成时间和菌核大小 数量 15 腐殖 土 在 0 10 MPa 下 灭 菌 10 min 和 30 min 冷却后分别覆盖于已长满菌丝的菌袋表 面 5 cm 厚 以不覆土的菌袋为对照 分别设 5 16 16 5 每 24 h 交替处理以及室温 13 23 4 个温度处理 3 个光照处理 A 强 光 约 10 000 lux 刺激 48 h 后返回自然光 约 500 2 000 lux B 自然光培养 C 弱光 约 200 lux 培养 观察菌核颜色从白色或浅黄色逐 渐转为褐色为止 无菌核产生的菌袋也同时结束 观察 2 结果与分析 2 1 分离培养基对孢子萌发的影响 羊肚菌孢子在培养的第 3 天萌发 萌发率 为 100 2 2 母种培养基对菌丝生长的影响 羊肚菌菌丝在 3 种母种培养基上都能生长 显微镜下观察到菌丝直径约 10 m 菌丝横膈和 内含物多 菌丝在初期生长旺盛 后期生长缓 慢 气生菌丝多 随后出现菌核 菌核由小变大 颜色由浅黄色变为褐色 聚集成片 表 1 表明 M1 平板上的菌丝长速 菌核形成时间与 M2 差 异不大 但 M1 上的菌核数量较多 M3 平板上 的菌丝生长较慢 菌核形成较晚且少 3 种平板 上的菌丝都在接种后约 29 d 开始自溶 表 1 不同母种培养基羊肚菌菌丝生长和菌核形成情况 Table 1 Growth rate of M conica and sclerotium formation on different vegetative growth media 母种培养基 Medium 菌丝长速 mm d Mycelial growth rate 菌核形成时间 d Time from inoculation to formation of sclerotia 菌核数量 Number of sclerotia M19 8 0 0711 0 7很多 Very numerous M29 5 0 1011 0 8多 Numerous M38 9 0 1114 0 8少 Few 表中数据为连续观察 30 d 的结果 Readings were taken over a 30 d period and the values shown represent the mean SD 2 3 原种培养基对菌丝生长和温度 覆土 光照 对出菇的影响 5 种原种培养基中菌丝的生长速度差异不 大 接种至满袋时间为 24 d 生长后期气生菌丝 较多 菌丝呈深褐色 但菌核形成时间 数量 大 小有差异 表 2 纯麦粒培养基 Y1 中菌核多 大且形成时间早 但自溶时间也较早 而其它培 养基虽然自溶时间较晚 但菌核形成时间晚 数 量少且小 每种原种培养基菌袋分别做覆土和不覆土 处理 同时进行不同温度和光照处理 结果发现 菌核颜色都从白色或浅黄色逐渐转为褐色 随后 33 食 用 菌 学 报第 17 卷 从菌核上重新生长出白色菌丝 5 种原种培养基 菌袋中菌丝满袋时间都为 24 d 覆土后菌丝长满 土层的时间也都为 5 d 但只发现 Y1 原种菌袋 在不覆土 室温 强光刺激下出现羊肚菌子实体 封三图 1 菌丝满袋至原基形成约 65 d 原基形 成至发育成符合尖顶羊肚菌生物学特性形态结 构的子囊果约需 10 d 且子实体生长较差 子囊 果小 长度 2 1 3 9 cm 肉质薄 鲜重 1 56 2 25 g 子囊果鲜重还不到野生尖顶羊肚菌平均 鲜重的十分之一 色泽一般为浅肉色至浅淡红紫 色 顶部色泽较浅 菌盖呈不规则圆锥形 表层直 肋发达 横脉较不明显 子囊果下部常具有星芒 状附着物 菌柄短 中空 有明显的芒状凸起 此 时子实体尚未完全成熟 2 d 后即开始萎缩 其它 处理均无出菇现象 为证实出菇羊肚菌的真实 性 我们对出菇的羊肚菌子实体进行组织分离 在上述出菇条件下培养 菌丝生长旺盛 且再次 出现结实 但子实体生长依然较差 表 2 不同原种培养基羊肚菌菌丝生长和菌核形成情况 Table 2 Growth rate of M conica and sclerotium formation on different fruiting media 原种培养基 M edium 菌丝长速 mm d Mycelial growth rate 菌核形成时间 d T ime from inoculation to formation of sclerotia 菌核数量和大小 Number and size of sclerotia 开始自溶时间 d Time from inoculation to onset of autolysis Y15 1 0 0714 0 55 L29 Y24 5 0 1317 0 55 M80 Y34 9 0 1117 0 63 S79 Y44 5 0 0719 0 66 S78 Y54 6 0 0918 0 40 S79 很多 较多 少 L 菌核直径 10 mm M 10 mm 菌核直径 3 mm S 菌核直径 3 mm 连续观察 30 d 菌 核数量和大小取第 25 和 30 天测量所得的平均值 V ery numerous numerous few Diameter of sclerotia L 10 mm M 3 10 mm S 3 mm Readings were taken over a 30 d period and the values shown represent the mean SD The number and size of sclerotia quality were recorded between the 25 and 30 d 3 讨论 母种 原种培养基对菌丝的生长速度 菌核 形成时间与数量 大小有影响 M1和 Y1 分别为 最佳母种和原种培养基 说明增加培养基的营养 成分不一定促进菌丝生长 且促进羊肚菌菌丝生 长的营养成分也不一定促进菌核的形成 以往 的研究中尖顶羊肚菌人工栽培时需覆土 子囊果 原基分化时需散射光 光强约 600 1 000 lux 刺 激 光照过强不利于尖顶羊肚 菌子囊果的分 化 5 16 17 而本试验采用的菌种在纯麦粒基质 不 覆土 室温 强光刺激下有出菇现象 这样纯培养 条件下获得的子实体尽管尚未完全分化 但为羊 肚菌的人工栽培提出了新的途径 参考文献 1 李华 包海鹰 李玉 羊肚菌研究进展 J 菌物研 究 2004 2 4 53 60 2 DU NCANCJ PUGHN PASCO DS et al Isolationofagalactomannanthatenhances macrophageactivationfromtheediblefungus Morchella esculenta J J Agric Food Chem 2002 50 20 5683 5685 3 NITHA B MEERA CR JANARDHANAN KK Anti inflammatoryandantitumouractivitiesof cultured mycelium of morel mushroom Morchella esculenta J Curr Sci 2007 92 2 235 239 4 TSAI SY WENG CC HU ANG SJ et al Non volatiletastecomponentsofGrif olaf rondosa Morchella esculenta and Termitomyces albuminosus mycelia J FoodSciTechnol 2006 39 1066 1071 5 陈建军 伍晓洪 刘振乾 羊肚菌生态位及其培养技 术研究 J 安徽农业科学 2009 37 2 638 639 6 朱斗锡 羊肚菌人工栽培研究进展 J 中国食用菌 2008 27 4 3 5 7 赵永昌 柴红梅 李树红 云南羊肚菌居群多样性研 究 J 西南农业学报 2008 21 2 444 447 8 沈洪 陈明杰 赵永昌 云南羊肚菌 rDNA 的 ITS 序 列与亲缘关系分析 J 食用菌学报 2007 14 2 15 18 9 兰进 曹文芩 徐锦堂 中国羊肚菌属真菌资源 J 资源科学 1999 21 2 56 61 10 郁建强 殷戎一 食用菌麦粒母种的制作 J 长江 34 第 1 期赵丹丹 等 尖顶羊肚菌人工栽培 蔬菜 1993 6 35 11 魏银初 崔苗青 李九英 制麦粒菌种应把好五关 J 农家参谋 2005 4 19 12 赵琪 徐中志 袁理春 一种羊肚菌孢子快速收集 方法 P 中国专利 101IOO647A 2008 1 9 13 陈士瑜 菇菌生产技术全书 M 北京 中国农业出 版社 1999 14 沈萍 范秀容 李广武 微生物学实验 M 北京 高等教育出版社 1999 15 赵永昌 吴毅歆 严世武 羊肚菌发生区气候土壤 生态环境研究 J 中国食用菌 1997 17 3 24 26 16 李树森 陈文强 邓百万 等 秦巴山区羊肚菌栽培试 验初报 J 食用菌 2008 2 39 40 17 赵琪 徐中志 程远辉 等 尖顶羊肚菌仿生栽培技术 J 西南农业学报 2009 22 6 1690 1693 本文编辑 朱丽娜 第九届全国食用菌学术研讨会 第二轮通知 中国 上海 2010 年 10 月 14 18 日 一 会议地点 本次会议将在上海光大会展中心举行 上海光大会展中心位于上海市徐汇区 周围有便利的交通可至机场 火车 站 市中心和购物中心 二 住宿 大会组委会已统一联系了上海光大和上海华夏宾馆 光大宾馆 420元 间 华夏宾馆 320 元 间 请大家在报 名表中登记注明住宿要求 住宿费自理 温馨提醒 鉴于本次大会在上海世博会期间举行 大会组委会对于 7 月 10 日以后报名或注册的参会人员无法保证 其住宿和价格 届时只能尽最大的努力协助联系住宿 请同行们尽早作出安排 三 会议注册费 在 2010 年 5 月 31 日及以前注册 国内会员代表 RMB 900 元 人 国内非会员代表 RMB 1000 元 人 学 生 RMB 450元 人 在 2010 年 6 月 1 日及以后注册 大会注册费将统一上调至 RMB 1200 元 人 注册费包括 大会会议资料费 会场费 礼品 大会期间的餐费 大会开 闭幕式以及大会组委会安排的活动 包括世 博会参观券一张 大会注册费指定帐户 户 名 上海数农信息科技有限公司 帐 号 033283 00040012178 开户行 农行长宁区北新泾支行 用 途 会议注册费 并标明注册人员姓名 参会人员注册费汇出后 请将会议注册回执通过电子邮件或传真反馈至大会秘书处 五 会议安排 星期日 10月 14日 星期一 10月 15日 星期二 10 月16 日 星期三 10月 17日 星期四 10 月18 日 12 00 22 00 会议注册 上午上午 开幕式 合影 主题报告 会场 1 生理与栽培 会场 2 遗传与育种 会场 3 营养和功能 下午下午 会场1 资源与利用 会场 2 遗传与育种 会场 3 营养和功能 会场 1 生理与栽培 会场 2 安全生产与标准 保鲜与加工 会场 3 营养和功能 晚上晚上 墙报墙报 考察参观离会 35 ACTA EDULIS FUNGI2010 17 1 36 39 Received Feb 9 2010 Accepted March 10 2010 Supported by the Key Project in the National Science 2College of Food Science and Technology Yunnan Agriculture University Kunming Yunnan 650201 China 3Institute of Biotechnology culture medium artificial cultivation The genus Morchella includes species of well known edible and medical f ungi which produce fruit bodies that are rich in protein polysaccharides nucleic acids micronutrients and vitamins andwhichexhibitimmuno enhancing fatigueprevention anti ageing anti tumor genoprotectiveandanti hyper lipidemicfunctions AlthoughMorchella speciesarepopularworldwidewith consumers 1 4 these mushrooms are restricted in distribution and are produced in only low yieldinthewildduetothespecial environmental conditions e g climate soil composition required f or growth In recent years artificial cultivation of Morchella species has been a priority research topic in mycology However although successful cultivation of Morchella has been reported no commercially cultivated Morchella fruit bodies have appeared on the market 5 due to unstable or absence of fruiting when outdoororindoorcultivation practices respectively have been adopted 6 In this study we have isolated and cultivated a strain ofMorchella conicafromsouthwest China an area rich in Morchella resources 7 1 Materials and Methods 1 1 Strain A fruit body of Morchella was collected from Ludian Village Yulong Naxi Autono mous District Yunnan Province and identified as Morchella conicabased on morphological characteristics and ITS Internal Transcribed Spacer sequence analysis 8 9 1 2 Media 1 2 1 Spore isolation media F1 L Leachate of branches and roots of Populus yunnanensis prepared by boiling a suspension of 70 g branches and 30 g roots in 500mLwaterf or5min coolingand filtering 10 g glucose 5 g sucrose 1 g maltose 1 g beef extract 1 g yeast extract 0 1 g KH2PO4 0 5 g NH4 3PO4 0 05 g MgSO4 2 g nicotinic acid and 20 g agar 1 2 2 Vegetative growth media M1 L 200 g wheat grain prepared by the method of YU et al 10 10 g glucose 0 1 g vitamin B1 15 g agar No 1Z HAO Dandan LI Lingfei ZHAO Yongchang et al M2 L 200 g potato 20 g glucose 20 g agar M3 L 10 g glucose 5 g sucrose 1 g maltose 4 g beef extract 4 g yeast extract 1 g KH2PO4 0 5 g NH4 3PO4 0 5 g MgSO4 0 1 g vitamin B1 2 g nicotinic acid 15 g agar 1 2 3 Cultivation media Y1 100 wheat grain prepared by the method of WEI et al 11 water content was adjusted to 55 Y2 70 cottonseedhull 25 P yunnanensissawdust 4 wheatbran 1 Ca OH 2 water content adjusted to 60 Y3 70 P yunnanensissawdust 25 cottonseedhulls 4 wheatbran 1 Ca OH 2 water content adjusted to 60 Y4 70 grass bran 25 cottonseed hulls 4 wheat bran 1 Ca OH 2 water content adjusted to 60 Y5 95 cotton seed hulls 4 wheat bran 1 Ca OH 2 water content adjusted to 60 1 3 Sporecollectionandpreparationof liquid suspension Spores were collected from a healthy M conica fruit body according to the method of ZHAO et al 12 and a spore suspension 100 300 spores mL was prepared as described by CHEN 13 1 4 Spore isolation and mycelium culture Aliquots 0 1 mL of spore suspension were spread over the surface of F1 plates and incubated at 25 for5 d Five colonies derived fromgerminated single spores were purified by subculture on to the same medium and one of these was selected for f urther study on the basis of mycelial growth vigor Hyphal characteristics ofthestrainwereobserved microscopically according to the method of SHEN et al 14 The selected strain of M conica was maintained on F1 slants at 25 with periodic transfer 1 5 Culture on vegetative growth media Discs of M conica mycelium 3 mm dia froma4 day oldF1plateculturewere transferredtoPetridishes 9mmdia containing either M1 M2 or M3 medium f ive replicates of each and incubated at 25 Mycelialgrowthrates thetimefrom inoculation to sclerotium formation and the number of sclerotia formed were evaluated at 12 h intervals 13 1 6 Cultivation and fruiting Polypropylene bags containing 350 g dry wt ofdifferentcultivationmedium see Section 1 2 3 were sterilized at 0 14 Mpa for 150 min and cooled prior to inoculation with four discs of M conica mycelium 3 mm dia from a 7 day old M1 plate culture Bags were incubated at 16 23 and the f ollowing parameters were determined mycelial growth rate and vigor the color of the mycelium the presence of aerial hyphae and hyphal autolysis thetimeelapsingbetweeninoculationto complete colonizationofthesubstrate and sclerotium f ormation and the number and size of the sclerotia formed 15 Humus was sterilized at 121 f or 10 and 30 min respectively and a 5 cm thick casing layer placed on the surface of full colonized bags Bags without casing served as controls Four differenttemperature regimes 5 16 16 and 5 foralternate 24 h intervals andambienttemperature 13 23 andthree differentlightregimes strong light 10 000 lux for 48 h followed by 500 2 000 lux natural light natural light 200 lux weak light were applied The color of the mycelium mycelial growth in the casing soil and fruit body development were recorded in each case 2 Results and Analysis 2 1 Spore germination rate The spore germination rate on F1 medium reached 100 after 3 d incubation at 25 2 2 Effectofvegetative growthmedium on mycelial growth and sclerotium formation 37 ACTA EDULIS FUNGIVol 17 M conica grew well on all three vegetative growth media Mycelial growth was initially vigorous but less so later and numerous aerial hyphae were evident Hyphae were of uniform thickness 10 mdia hadnumerous transverse septa and were rich incellular inclusions Sclerotia were of variable size light yellowtobrownincolor andclustered Mycelial growth rates and the period between inoculationandsclerotiumformationwere similar in the case of M1 and M2 although sclerotia were more numerous on the former Slower mycelial growth rates were recorded on M3 theperiodbetweeninoculationand sclerotium formation was longer and fewer sclerotia were f ormed see Table 1 in the Chinese version Fungal mycelium on all three media began to autolyse after 29 d incubation 2 3 Effect of temperature casing and illumi nation on mycelial growth and fruiting on five different cultivation media Mycelial growth rates on the five different cultivationmediawerenotsignificantly dif ferent and the bags were fully colonized within 24 d Aerial hyphae were numerous and the fungal mycelium turned brown in the later stages of growth However sclerotium formationoccurredearlier andindividual sclerotia were larger and more numerous on Y1 medium Sclerotia were white orlight yellow to brown in color and the source of renewed white hyphal growth Autolysis of the mycelium occurred much earlier on Y1 medium compared to the other formulations see Table 2 in the Chinese version Sclerotiaappearedonall five fruiting media24dafterinoculationand when applied casing material was fully colonized by fungal mycelium within 5 d However fruiting occurred only in bags containing Y1 medium and without casing which had been incubated at room temperature and exposed to strong illumination for 48 h see Fig 1 in the inner back cover Primordia were f ormed 65 d after the substrate had been fully colonized and a further10dwererequiredforascocarp formation Thelatterexhibitedbiological characteristics typical of Morchella fruit bodies but did not fully differentiate and began to wither two days after formation Ascocarps were small 2 1 3 9 cm in length thin and fleshy and weighed between 1 56 2 25 g fresh weight less than one tenth of fruit bodies collectedfromthewild Ascocarpsalso exhibitedthef ollowingfeatures light yellowish pink to light reddish purple in color relatively light colored surf ace irregular round pileus strong vertical surface ridges indistinct transverse veins granular affiliations on the edge stem short hollow granular surface A second generation of ascocarps was grown using tissue isolated from the first generation but the fruit bodies were againfrail and not fully dif ferentiated 3 Discussion Of various media tested M1 and Y1 were the most suitable for vegetative growth and fruiting of M conica respectively and our data indicated that sclerotium formation was notstimulatedbysupplementationwith additional nutritients Previous studies have suggested that casing and scattered light 600 1 000lux werenecessaryforprimordia development and that too strong illumination adverselyaffectedascocarpdifferentia tion 5 16 17 Inthepresentstudy fruiting occurred only on wheat grain media without casing and when the cultures were incubated at ambient temperature and exposed to strong light for 48 h However f ruit bodies grew only weakly and did not fully differentiate References 1 LI H BAO HY LI Y Advances of researches on the Morchella J Journal of Fungal Research 2004 2 4 53 60 in Chinese with English abstract 38 No 1Z HAO Dandan LI Lingfei ZHAO Yongchang et al 2 DUNCANCJ PUGH N PASCODS et al Isolationofagalactomannanthatenhances macrophageactivationfromtheediblefungus Morchella esculenta J J Agric Food Chem 2002 50 20 5683 5685 3 NITHA B MEERA CR JANARDHANAN KK Anti inflammatoryandantitumouractivitiesof cultured mycelium of morel mushroom Morchella esculenta J Curr Sci 2007 92 2 235 239 4 TSAI SY WENG CC HUANG SJ et al