抗体保存知多少.doc

抗体保存知多少通常情况下，抗体经恰当保存和处理，大多数应能保持活性数月乃至数年。当然，不同类型抗体，其保存的方法也可能不一样，以下就抗体的保存，提供一些参考! 一、保存温度和条件 对于很多抗体而言，保存在-20是完全足够了，没有任何证据显示保存在-80会有更多的好处!分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤，以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次，如有剩余，可将剩余物保存于 4oC. 在收到抗体时，在 10,000 g 下离心 20 秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液，并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10 l; 等份越小，储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。 在大多数情况下，收到抗体时在 4oC 下保存一至两周，然后再冷冻进行长期保存是可接受的，但也许腹水液是例外，它可能包含蛋白酶，因而应该尽快冻存。同样，遵照说明书上的建议是重要的。 大部分抗体的运输条件：一般的运输过程需要1-2周的时间，所以是在4的条件下来完成的。 对于特殊的抗体，如酶、荧光素等偶联抗体、IgG3同型抗体等抗体的保存有其注意事项： 1、偶联抗体 酶偶联抗体不应冻存，而应保存于 4oC. 冻融不仅影响抗体结合能力，还会降低酶活性。无论偶联至荧光染料、酶还是生物素，偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹. 暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响，在实验的所有阶段都应避光。 2、IgG3的同型对照 保存在4，避免冻起来。因为如果出现冻融过程，该抗体非常容易形成多聚体 二、用叠氮化钠防止污染 为了防止微生物污染，可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02% (w/v). 的终浓度。但是有时不能使用叠氮化钠，有以下两中情形： (1)、如果用抗体染色或处理活细胞，或如果用抗体进行体内研究，一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性：它阻断细胞色素电子传递系统。 (2)、叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联，应在偶联进行前除去。偶联后， 抗体可保存于叠氮化钠中，除此以外，0.01% 硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺，也是可接受的替代物。 叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG 的分子量为 150,000 道尔顿(IgM 为约 600,000);叠氮化钠的分子量为 65 道尔顿。截留分子量为 14,000 道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于 4oC 的磁性搅拌器上的烧杯中，每毫升抗体使用至少一升冷 PBS 并搅拌透析装置 6 小时。更换 PBS 两次，每次更换搅拌至少 6 小时。如有可能，所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。 三、冷冻/融化损伤 重复冷冻/融化循环可使抗体变性，导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。保存于 -20oC 对于大多数抗体是适当的;保存于 -80oC 无明显优势。冰箱不能为无霜型。 这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。出于相同原因，抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域，例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。 有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到 50% 的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于 -20oC。虽然这对于很多抗体是可接受的，但还是不能确保在该保存条件下的稳定性，通常我们参考具体产品说明书提供的保存方法。在这里，我们也一般不建议将包含甘油的溶液保存于 -80oC，因为该温度低于甘油的凝固点。还要注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂，则应当小心操作，以得到无菌制备物。 应避免抗体在稀释至工作浓度后在 4 下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解，理想的浓度为 1 mg/ml 或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如 BSA 作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体