种脂肪酶活力测定方法的比较及改进.pdf

P Q GHIJK I M LMNOP B 7 7 7 VT J 5o D OQ a LM g J23 1 k 0 pQ Z pJP B p RB LM H lJP J23LMC Xsg Sl 8 C A fi 8 v 78 h qr B J 8 fi fl L M M D sO 9 c O V T O K h 5 3 F A M M PD d fl h 5 4 W S O CDR 5 fi C D m M M C A 9 h F A M M W 1 u 1 Q 1 B x C 5 8 4x 4x ym br 7 P 2 3 1 W h 5 j 2 1 xfi fi S EF O 3 M 9 0 W PD d fi IqJ v M M N m w NF T 23P vw 9 0 J 9 NF w P m XL P Q XF J W P Ffi PD d Jr W Q Ffi u PD d Jr W F v 9 c O V T O K M 9 0 W J D F P D F P H O h 3 7 E J A T A 7J 3 7 E M M M 8 W M 9 0 W Q Wfl w br 3 M W 3 4x W 3 j 2 q J v s 3 7 E x 9 J 7 M M J 8 3 E R O O t M M w NF T 23P vw 9 0 J 9 NF w P m XL 6 A A XF W 6F 7 9 0 W AF Jr W A j F J39 W FE3 3 e q M M D sO 9 c O V T O K S F S M p 5 E E I J U 9 3g 5 C D m 7m d M M A F F C M 4 W Q F d M 4 W Fd 3 v JF7 8 3 7 3 7 7 F F C br 3 W 2 3 4x T r 5 y Bj 2 W v W t 23 x u 4 8 T A Fd v W J 7F7 W M 9 0 W J B M W M 9 0 W PD hC D U C D n T 8 3 7 3 7 7 j 2 2 3 4x W M 9 0 W J B y w 3j 2 M W M 9 0 W PD h C D U C D n 2 T t 23 M M w NF T 23P vw 9 0 SJ 9 NF w P m XL 6 A A XF W 6F S 7 9 0 W AF h J 2 jr W Aj F J39 W FE3 3 FG J C D gF M Z nC D 2 H L h1B E 5DV Q 6 Z 0 8 5 3 B 8 B ES 0 M 0 D B 0 0 2 8 S 8 O O0 b 0 O 8 8 1 8 5 A 8 3 5 D H 6 Z 5 3 B 8 B ES 0 M 0 D B 0 0 2 8 S 8 O O 2 5 B B 1 5 0 BA 8 3 5 D M M M M S j 2 F v S j 2T 3 5 F G uG 8 J 8 F T p Z S t a G r PD Q 39 I D fi J v S Zu4 Ja E 78 v tIq Z 1P B 0 0 2 8 S 8 OD 8 A D M M M M W 0 5 A B 0 1 5 5 7 2 5 M A 6 8 A 5 7 8 3 1 A 8 3 5 D A 8 2 j bS fi 7 8 q J O 7 h 4 8 J J F 34 JD 89 J S J 2j fi FK K J 8 Jv K L 7G23 H KL8 bcLM JPS 7HI d 5 T I G J N J O U 0 7 7 8 J d 5 0 D9 A B 1 5 S A 8 5 7W 3 1 8 1 A 0 8 5 8 3 5 D 7 5 1Y B 0 2 8 S 8 O 9 JE M H 7 0 6 I JG 0 H V Y 9 F 3 M H 6 M 5 0 1 6 o E 考察了橄榄油对固态发酵产脂肪酶的影 响 发现橄榄油不仅是菌体生长所必需的一种碳源而且是水解脂肪酶和合成脂肪酶分泌的双重诱导物 合成脂肪酶是结合在细胞膜上的 采用水解活力和合成活力 两种纯化标准 经过硫酸铵沉淀 辛基疏水层析 苯基疏水层析以及凝胶过滤层析 得到了合成脂肪酶同工酶 和 分子量分别是58KDa和63KDa 脂肪酶 和 水 解pNPP的最适pH和温度分别是pH8 0 40 和9 0 45 脂肪酶 和 催化短链酯合成的转化率基本都可以达到90 2 学位论文 任晓伟 环境因子和营养水平对半滑舌鳎消化酶活性的影响 2008 在影响鱼类生长的因子中 非生物环境因子和营养因子是比较重要的两个方面 水体环境因子主要包括水温 盐度 溶氧 pH等等 而在营养因子对鱼类 生长的影响中 日粮水平的影响是一个重要的研究内容 鱼类在不同摄食条件下的生理特征及功能调节的研究是鱼类生理学理论研究的基本内容之一 不同摄 食水平与生长的关系 直接决定经济种类的人工养殖中的不同的投喂策略 而研究鱼类饥饿或限食条件下鱼类的一系列生理生态反应过程与特点 则有利于揭 示鱼类适应饥饿或营养不足胁迫的生理生态对策 对于指导渔业资源管理及水产养殖实践具有重要的现实意义 半滑舌鳎 Cynoglossus semilaevis 为近海常见的暖温性大型底层鱼类 其鱼肉质细腻 味道鲜美 是一种经济价值很高且极具养殖推广前景的名贵海水 鱼类 随着半滑舌鳎大规模人工繁殖技术的突破 其商品鱼养成已逐渐成为产业化的主题 目前 对半滑舌鳎的研究多集中于对其繁殖生物学及早期发育等方 面 关于环境因子和营养水平对其生理生态学影响的研究还少见报道 本研究在测定了不同pH和温度测定条件对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响的基础上 通过设置不同的养殖环境条件和日粮水平 进一步研究了温度 盐度 和温度日粮水平以及饥饿胁迫程度对半滑舌鳎幼鱼不同部位消化酶活性的影响 并对其主要消化酶的同工酶谱组成进行了初步分析 本研究不仅有助于阐明环 境因子和营养水平对鱼类生长影响的生理生态学机制 还可以为半滑舌鳎的人工养殖技术的提高和配合饲料的研制提供实践指导和理论依据 主要研究结论如 下 1 不同pH值和温度测定条件对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响本实验测定了不同温度和pH对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性影响 结果显示温度和pH对半滑舌鳎 幼鱼消化酶活性影响显著 P 0 05 在一定的温度范围内 半滑舌鳎消化酶的比活力均随温度的升高而增加 超过最适温度后酶比活力均逐渐降低 不同部位 不同消化酶的最适温度有所差异 肝脏和肠道蛋白酶最适温度均为40 肠道淀粉酶最适温度为45 肝脏淀粉酶最适温度为40 肝脏和前肠 后肠脂肪酶 的最适温度均为40 中肠则为45 半滑舌鳎鱼体的蛋白酶 淀粉酶 脂肪酶的最适pH在肠道分别为7 5 7 5 7 0 在肝脏分别为7 0 6 5 7 0 在适宜 的pH和温度范围内 肝脏和肠道不同部位的三种消化酶活性有所差异 其中 蛋白酶比活力以肝脏和后肠最高 显著高于前肠和中肠 P0 05 说明肝脏是碳水化合物最重要的消 化器官 脂肪酶比活力也以肝脏内最高 其次分别为前肠 后肠和中肠 各部位脂肪酶比活力差异显著 P 0 05 2 温度和盐度对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响本文比较研究了在不同温度和盐度的养殖环境下 半滑舌鳎肝脏和肠道内不同部位蛋白酶 淀粉酶和脂肪 酶三种消化酶活性的差异 实验设置了3个盐度水平 22 26和30 和4个温度水平 18 21 24和27 结果表明 盐度和温度对半滑舌鳎消化酶活性影响均显 著 P 0 05 不同温度和盐度组合下 三种消化酶活性变化有所差异 总体比较 以盐度26 温度21和24 组合下比活力较高 在相同温度和盐度下 肝脏和 肠道的不同部位的三种消化酶比活力有所差异 其中 蛋白酶比活力以肝脏和后肠最高 显著高于前肠和中肠 P0 05 脂肪酶比活力也以肝脏内最高 其次分别为前肠 后肠和中肠 各部位脂肪酶比活力差异显著 P 0 05 本研究发现 半滑舌鳎幼鱼体内淀粉酶比活力相对比较高 说明半滑舌鳎幼鱼对淀粉具有较强的消化能力 3 不同温度和日粮水平对半滑舌鳎幼鱼消化酶活性的影响本文研究了不同温度下日粮水平对半滑舌鳎消化酶活性影响 结果显示温度和日粮水平对半滑舌 鳎消化酶活性均有显著影响 P 0 05 不同温度和日粮水平组合下 三种消化酶的活性变化有所差异 总体比较 以温度22 日粮水平为50 水平下的处理 组酶比活力较高 在相同温度和日粮水平下 肠道的不同部位的三种消化酶活性有所差异 其中 蛋白酶和淀粉酶比活力均以后肠最高 显著高于前肠 中肠 P0 05 脂肪酶比活力以前肠最高 其次分别为后肠 中肠 各部位脂肪酶比活力差异显著 P 0 05 4 不同限食水平对半滑舌鳎幼鱼肠道消化酶变动的影响本实验比较研究了在22 度条件下 不同程度的限食水平对半滑舌鳎幼鱼生长过程中肠道不同部位 蛋白酶 淀粉酶 脂肪酶三种消化酶活性变化的影响 实验设置4个处理组 其日粮水平分别为饥饿 25 饱食 50 饱食和75 饱食 以100 饱食作为对照 各处理均每15d取样一次 对其肠道内消化酶活性进行测定 结果表明 不同日粮水平对半滑舌鳎幼鱼生长过程中消化酶活性变化影响显著 P 0 05 不同日 粮水平下 三种消化酶随生长的活性变化情况有所差异 总体比较 在50 饱食和75 饱食水平下 三种消化酶比活力均随生长呈现出上升趋势 其中以蛋白 酶比活力上升幅度最为显著 同种消化酶在肠道不同部位变化情况差异显著 P 0 05 在完全饥饿条件下 半滑舌鳎肠道不同部位蛋白酶比活力差异显著 P 0 05 其中前肠蛋白酶比活力显著下降 中肠和后肠则变化不明显 实验期间 肠道各部位淀粉酶和脂肪酶比活力均随时间的延长而均呈持续显著下降趋 势 P 0 05 5 半滑舌鳎幼鱼消化酶同工酶谱初步研究本文利用聚丙烯酰胺非变性电泳和同工酶活性染色对半滑舌鳎消化酶进行了初步分离 蛋白酶采用明胶原位消化 法 肝脏蛋白酶检测出3条酶带 其中2条强带 1条弱带 后肠蛋白酶出现了2条弱带 并且与肝脏蛋白酶的前2条酶带分别在同一分子量水平上 前肠和中肠蛋 白酶均只出现了1条弱带 且在同一分子量水平上 半滑舌鳎肠道各部分的淀粉酶带都在相似分子量附近出现了一条弱酶带 只有肝脏出现了2条酶带 其中一 条强带 一条弱带 且弱带与肠道各部分淀粉酶带处在同一个分子量水平 肝脏 前肠和后肠脂舫酶均出下了4条酶带 其中 肝脏和前肠均分别有1条强带 1条中强带 2条弱带 后肠脂肪酶则有1条中强带 3条弱带 中肠脂肪酶出现了3条弱带 肝脏和肠道各部分脂肪酶的第一条酶带都在同一分子量水平上 而 且活性相似 3 期刊论文 宋波澜 陈刚 叶富良 林小涛 SONG Bo lan CHEN Gang YE Fu liang LING Xiao tao 军曹鱼幼鱼脂肪酶的活 力与环境因子的关系 暨南大学学报 自然科学与医学版 2007 28 5 对军曹鱼幼鱼体内脂肪酶的分布 活力及pH 水温 盐度等环境因子对军曹鱼幼鱼不同消化器官脂肪酶活力的影响进行了研究 结果表明 幽门盲囊和肝脂 肪酶活力分别在pH 6 2和6 0下最高 胃和肠在pH 4 0和7 0下也保持相当的脂肪酶活力 各器官在适宜的pH范围内其单位脂肪酶活力从高到低依次为 幽门盲囊 60 U 肝脏 23 3 U 肠 22 7 U 胃 11 3 U 研究表明饲育水温对脂肪酶有显著的影响 P 0 05 整体上不同消化器官脂肪酶都有随水温升高而升高的趋 势 但20 下幽门盲囊和肝脏存在最大酶活力 盐度对不同器官脂肪酶影响显著 P 0 05 在较低的盐度下 15 25 脂肪酶活力均处于较活跃状态 幽门盲囊 肠 肝脏脂肪酶活力在盐度20 胃在盐度15条件下出现最大值 4 学位论文 滕云 酯合成脂肪酶高产菌的选育及其产酶发酵调控的研究 2008 非水相中脂肪酶催化的酯合成反应已广泛用于各种酯的合成 并且也成为近二十年来脂肪酶催化的研究热点 由于并不是所有的脂肪酶都能催化非水相中 的酯化反应 造成了现有脂肪酶中能有效催化酯合成反应的酶并不多 必须开发新的具有高酯合成活性的脂肪酶 本文以获得高酯活性脂肪酶为目标 首先建立了一种能快速筛选具有酯合成能力脂肪酶的筛选和酶活测定方法 然后以一株根霉RhizopuschinensisY92为 出发菌 采用离子束和亚硝基胍进行诱变 以建立的方法进行初筛 最终筛选得到一株脂肪酶高产菌R chinensisY92 M 并对其培养条件进行了优化 深入研 究了影响具有酯合成活性脂肪酶合成的主要因素 并对该菌所产胞内脂肪酶进行了详细分析 揭示了全细胞脂肪酶水解与合成活力之间的关系 找到了控制酯 合成活性脂肪酶大量合成的手段 针对丝状真菌形态变化对生产的影响 详细研究了摇瓶和发酵罐中形态变化对酶合成的影响 并将全细胞脂肪酶用于酯的合 成和生物柴油的生产 具体内容和结果 1 为了能筛选得到酯合成活性高的脂肪酶生产菌 本文建立了一种非水相中用于具有合成活性脂肪酶筛选和活力测定的新方法 该方法的原理是利用脂肪 酶在正庚烷中催化对硝基苯酚棕榈酸酯 pNPP 和乙醇之间的转酯化反应 然后用NaOH溶液快速萃取生成的对硝基苯酚并在410nm检测吸光度 该法与其它已经报 道的类似方法相比 所需仪器简单 底物廉价 操作简单 因此筛选效率得到了有效提高 2 以R chinensisY92为出发菌 采用两轮离子束注入诱变 并结合亚硝基胍诱变 以所建立的方法作为初筛方法 以气相测定酯合成能力作为复筛方法 筛选得到一株酯合成活性显著提高的菌株R chinensisY92 M 该菌单位菌体的合成活性由200U g 提高到400U g 3 为了进一步提高该菌的产酶能力 对培养条件进行了优化 首先采用田口设计对培养条件进行了初步优化 对四个培养基组成因素 麦芽糖 橄榄油 蛋白胨 和K2HPO4 和四个环境因素 摇床转速 接种量 pH和装液量 进行了考察 结果分析表明环境因素对产酶影响更显著 通过响应面对培养条件进一步优 化得到最优培养条件 接种量4 25 108spores L 橄榄油2 37 w v 装液量21mL 250mL 蛋白胨4 06 w v 麦芽糖0 5 w v K2HPO40 3 w v 摇 床转速200r min pH5 5 预测全细胞脂肪酶的最大酶活产率为14349 2U L 验证性实验在最优条件下 R chinensisY92 M产具有酯合成活性全细胞脂肪酶可达 13875U L 4 通过培养基中添加不同类型 不同量的脂肪酸或脂肪酸酯 考察了发酵过程中全细胞脂肪酶水解活性与合成活性的关系 结果表明 全细胞的水解活性 受各种脂肪酸和脂肪酸酯的诱导作用并不明显 而碳链大于18的脂肪酸或者脂肪酸酯对全细胞合成活性有显著的诱导作用 最高酶活力是未加油脂的培养基条 件的17倍 5 对细胞各部分的蛋白组分的分析结果表明 胞内脂肪酶具有水解活性而不具备合成活性 膜结合蛋白具有很好的酯合成活性 同时也具有水解活性 该 微生物对具有酯合成活性脂肪酶的调节既表现在酶量的调节 也表现在酶活性的调节 酶量的调节体现在具有酯合成活性的脂肪酶为典型的诱导型酶 当诱导 物三甘酯添加量大于20g L时 能维持酶活在650U g 当诱导物量不足时酶活迅速下降 具有合成活性脂肪酶的高产的条件除必须有油脂添加外 细胞还必须与 油脂充分接触 解除这种接触状态 酶的合成即停止 酶活性的调节则体现在全细胞水解活力的变化上 具有高合成活性的全细胞的水解活性并不高 而实际 上具有合成活性的膜结合脂肪酶水解活力可达56U mg 对不同培养时间的细胞各部分的蛋白组分的分析 推测造成全细胞表观水解活力和合成活力不对应的原 因是膜结合脂肪酶存在变构调节 6 研究了不同三油酸甘油酯添加量对产酶的影响 提出了油脂流加策略 摇瓶中采用油脂流加方式也可以使得酶活力保持在650U g 酶活产率13000U L肌 左右 而油脂总添加量只需15g L 发酵罐中的菌体生长与产酶过程和摇瓶相比存在较大差距 油脂补料发酵并不能达到摇瓶的产酶效果 7 通过对摇瓶过程和发酵罐过程中菌丝微观和宏观形态的观测和分析 发现菌丝微观和宏观形态变化对膜结合脂肪酶的合成影响非常显著 摇瓶过程中 聚集状态 块状 球状 固定化 下的菌丝直径稍宽 菌丝生长单位多 菌丝未出现分化现象 而松散状态下的菌丝直径稍窄 菌丝体到生长后期出现分化现 象 并有膈出现 聚集状态细胞的酶活力是松散状态细胞酶活的3倍 说明菌丝聚集有利于膜结合脂肪酶的合成 通过对发酵罐中菌体形态变化以及发酵液流变 特性的研究 发现小球状菌丝细胞有利于产酶 而松散状菌丝细胞不利于产酶 对发酵液流变特性的测定结果表明 球状菌体下的发酵液流动性要明显好于松 散状菌体 有利于油脂的分散 载体固定化同时满足了菌体形态呈聚集状和细胞必须和油脂充分接触两个酶高产的必要条件 因此固定化细胞经发酵罐培养后 酶活能达到400U g 8 为了验证R chinensisY92 M所产全细胞脂肪酶在非水相中的催化能力 将该酶和两种具有高酯合成活性的商品化脂肪酶Novo435和AmanoPS C的酯合成能 力进行比较 结果显示Y92 M所产全细胞脂肪酶具有很好的酯合成能力 9 考察了该酶在正庚烷体系中催化脂肪酸乙酯的能力 当直链脂肪酸浓度为0 6mol L时 该酶对碳链大于6的脂肪酸有较好的选择性 转化率可达90 以 上 实验结果还表明 该脂肪酶与出发菌所产脂肪酶相比 在无溶剂体系中能有效催化辛酸乙酯和油酸乙酯的合成 还考察了该酶在无溶剂体系中合成生物柴 油的能力 结果表明该全细胞脂肪酶能有效催化地沟油 豆油 麻枫籽油等各种油脂生产生物柴油 转化率均在85 以上 固定化细胞也表现出很好的催化能 力 摇瓶中转化率可达75 填充柱中的转化率可达80 而载体内部的转化率可达到88 若能对填充柱体系进行更为系统的研究 有望实现工业化生产 5 期刊论文 赵博 陶进 马吉胜 廉虹 王岩 常琳 高仁钧 曹淑桂 ZHAO Bo TAO Jin MA Jisheng LIAN Hong WANG Yan CHANG Lin GAO Renjun CAO Shugui 定向进化提高枯草芽孢杆菌脂肪酶的活力 催化学报2009 30 4 通过定向进化的方法 提高了一个新的源于枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis 的脂肪酶 BSL2 的活力 经过两轮易错 PCR 以及高通量筛选 最终获 得了比活力为野生出发酶 4 5 倍的突变体 3 1B2 基因比对结果表明 共有两个氨基酸发生了突变 突变酶的酶学性质研究发现 与野生酶相比 它的热稳定 性及 pH 稳定性略有增加 最适温度和最适 pH 值则无太大的变化 同源模建了 BSL2 与 3 1B2 的结构 并与底物进行了分子对接 结果表明 突变体 3 1B2 的结合能比野生型 BSL2 低 1 29 kcal mol 活性中心 Ser77 残基与底物羰基的距离也由 0 319 nm 减小为 0 278 nm 因而加快了酶反应速度 提高了酶活 力 6 学位论文 王乐乐 华根霉 Rhizopus chinensis 脂肪酶的基因克隆 表达 纯化和酶学性质研究 2008 生物催化在工业应用的过程中 一个很大的限制因素就是催化剂脂肪酶 自然条件下 菌株产脂肪酶量较低 利用常规育种方法难以满足工业化生产的需 要 本论文从华根霉 Rhizopuschinensis CCTCCM201021中首次克隆得到其脂肪酶全基因 并实现了华根霉脂肪酶前导肽和成熟肽在巴斯德毕赤酵母 Pichiapastoris 中的高水平分泌表达 初步分离纯化后对比了两重组脂肪酶的酶学性质差异 为华根霉脂肪酶的进一步理论研究及其应用奠定了基础 主要 研究结果包括 1 以实验室保藏菌种华根霉基因组为模板 利用根霉通用引物PCR扩增得到华根霉18SrDNA片段 鉴定其种属 根据Rhizopusstolonifer和 Rhizopusoryzae脂肪酶基因序列比对后设计调取华根霉脂肪酶基因的引物 利用两次PCR程序分别获得华根霉脂肪酶上 下游片段 拼接后得到华根霉脂肪酶全 基因 RCL 该基因的开放阅读框长1170bp 不含内含子 编码一个389个氨基酸残基的蛋白质 包括26个氨基酸的信号肽 94个氨基酸的前导序列和269个氨基 酸的成熟肽 其推断的氨基酸序列与一些已报道的根霉脂肪酶序列同源性为86 2 构建酵母分泌型表达重组质粒pPIC9k proRCL和pPIC9k mRCL 将重组表达质粒线性化后电转化巴斯德毕赤酵母 构建了GS115 pPIC9k proRCL用于分泌 表达前导肽脂肪酶 表型包括His Muts和His Mut 构建了GS115 pPIC9k mRCL用于分泌表达成熟肽脂肪酶 表型包括His mats和His mut SDS PAGE分析表达 的慢生型前肽脂肪酶的分子量为37kD左右 最大分泌表达量为0 85mg mL 占分泌蛋白总量的68 3 pNPP法测得此时的脂肪酶水解活力为121 2U mL 表达的慢 生型成熟肽脂肪酶的分子量为30kD左右 最大分泌表达量为0 16mg mL 占分泌蛋白总量的21 6 pNPP法测得此时的脂肪酶水解活力为4 3U mL 3 将重组巴斯德毕赤酵母GS115 pPIC9k proRCLMuts和GS115 pPIC9k mRCLMuuts发酵上清液经过10KD超滤膜浓缩 SP SepharoseFF强阳离子交换层析和 Phenyl Sepharose6FF疏水色谱柱层析后得到脂肪酶活性组分proRCL和mRCL 纯化后的重组蛋白proRCLN 端氨基酸测序分析表明该重组脂肪酶是加工过的产物 分泌表达的重组脂肪酶只保留了前导序列C 端的27个氨基酸和成熟肽的269个氨基酸 简称pr027RCL 酵母菌GS115 pPIC9k pr027RCL和GS115 pPIC9k mRCL的 表达上清液在用EndoH处理前与处理后其蛋白分子量没有发生变化 表明该酵母表达的重组脂肪酶都未进行N端糖基化修饰 4 通过对重组脂肪酶pr027RCL和mRCL的酶学性质研究 发现pro27RCL和mRCL的最适反应pH和最适反应温度相近 最适pH值分别为8 5和8 0 最适反应温度 分别为40 和35 但底物选择性和动力学常数差异较大 pro27RCL对C6 C8中链脂肪酸酯水解活力较高 而mRCL对pNPC2的水解活力最高 对C2 C6的短链脂肪 酸酯水解活力较高 分类学上更倾向于酯酶 EsteraseE C 3 1 1 2 两脂肪酶对对硝基苯酚棕榈酸酯的Km和Vmax分别为0 304mmol L 0 345mmol L和 3 38 mol min mL 0 074 mol min mL pro27RCL 和mRCL对三油酸甘油酯均没有位置选择性 10mmol L的Ca2 Mg2 对两重组脂肪酶均有较好的激活作用 而Hg2 SDS和PMSF强烈抑制两酶的活力 它们在正己烷 正庚烷和异辛烷 30 v v 中具有较高的活力和良好的稳定性 7 期刊论文 徐为民 徐幸莲 周光宏 郑安俭 王道营 XU Wei min XU Xing lian ZHOU Guang hong ZHENG An jian WANG Dao ying 南京板鸭生产过程中脂肪酶和磷脂酶的活力变化研究 食品科学2007 28 11 研究了板鸭生产过程中各工艺点样品肌肉中酸性脂肪酶 中性脂肪酶和磷脂酶活力的变化趋势 结果显示 板鸭在腌制过程中 这三种酶呈逐渐上升的趋势 而在排坯和风干过程中 酶活性逐渐丧失 通过相关分析表明 板鸭加工过程中 盐含量及水分含量与这三种酶活性之间具有显著的相关性 8 期刊论文 曹雄文 苏磊 陈麒屾 刘涛 闫云君 杨江科 月桂酸生物印迹对脂肪酶酯化活力的影响 中国生物工程杂志 2008 28 7 生物印迹是改良酶学特性 扩大脂肪酶工业应用领域的新兴技术 结合溶胶 凝胶脂肪酶固定化工艺 以甲基三甲氧基硅烷 MTMS 和四甲氧基硅烷 TMOS 为前 驱体 月桂酸为印迹分子 考察了月桂酸生物印迹对脂肪酶PS酯化活力的影响 脂肪酶酯化活力测定及扫描电镜观察表明生物印迹能显著提高脂肪酶的活性及稳定 性 印迹体系经正交试验优化获得的最优条件为 水和硅烷摩尔比 R 为12 聚乙二醇 PEG 加入量为120ul 月桂酸加入量为0 15mmol 在最优反应条件下 印迹酶相 对于游离酶比活力提高了44 3倍 相对于未印迹固定化酶提高了2 4倍 印迹酶具有较好的热稳定性 在80 下处理0 5h后 残余酶活分别为58 而游离酶未检测到 活性 9 期刊论文 杨立荣 吴坚平 姚善泾 高浓度盐系统中脂肪酶的固定化及其催化活力 有机化学2002 22 3 选择了四十多个可溶性的盐 实现了脂肪酶在高浓度盐系统中的固定化 并以固定化脂肪酶的盐为催化剂 研究了正己烷中脂肪酶催化丁醇和乙酸乙烯酯间的 转酯化制备乙酸丁酯的反应和水溶液中橄榄油的水解反应 考察了高浓度盐系统中脂肪酶的催化活力 10 学位论文 杨健 温度 盐度和密度对军曹鱼幼鱼能量收支 抗氧化酶及消化酶活性的影响 2007 在实验室条件下 首次采用三因素交叉分组的实验方法 研究了温度 26 29 32 盐度 11 19 27 35 和密度 0 3 kg m 0 7 kg m 1 1 kg m 对最大摄食水平下军曹鱼幼鱼能量收支 抗氧化酶和消化酶活性的影响 结果如下 1 除盐度主效应对排泄能比例影响不显著外 其他各主效应及因素间的交互作用对平均日摄食率 平均日排粪率 表观消化率 FAE 特定生 长率 SGR 摄食能及其他能量组分的影响均显著 P 0 05 主效应分析结果表明 平均日摄食率 平均日排粪率 摄食能和排泄能比例均随温度的升高而升高 FAE SGR和生长能比例在29 时最高 而代谢能和排 粪能比例在29 时最低 平均日摄食率 平均日排粪率和摄食能随盐度升高先升高后降低 盐度27时有最大值 FAE SGR和生长能比例均随盐度的升高而升高 代谢能比例在盐度11时有最大值 19时最低 排粪能比例在盐度19时有最大值 排泄能比例则随盐度的升高而降低 平均日摄食率和摄食能随密度的升高呈 倒U形变化 平均日排粪率和排粪能比例随密度的升高而降低 FAE SGR 生长能和代谢能比例均随密度的升高而升高 密度对排泄能比例无显著影响 三因素交互作用分析结果表明 FAE最高的因子组合为29 35 1 1kg m 而SGR和生长能分配比例最高的因子组合均为29 35 0 7kg m 说 明在本实验条件下军曹鱼幼鱼的最适生活环境为29 35 0 7kg m 其能量收支方程为 100 00C 26 35G 56 99R 8 75F 7 91U 2 盐度因子诱导了军曹鱼幼鱼的抗氧化应激反应 随着盐度的降低 抗氧化酶比活力显著升高 除温度和密度交互作用对超氧化物歧化酶 SOD 比活力影 响不显著外 各主效应及因素间的交互作用对SOD和过氧化氢酶 CAT 比活力都有显著影响 P 0