小白鼠系列实验.doc

新乡医学院实验课教案首页课程名称：普通生物学 授课教师姓名及职称：高启禹 讲师一、授课题目小白鼠系列实验二、授课对象09级生物技术专业及三全三、实验教学目标与课时分配1.学会实验动物小白鼠的抓取、固定和性别鉴定2.初步掌握小鼠的给药途径和方法3.初步学会小鼠常规的几种采血方法4.熟悉小鼠的组织结构四、授课重点1.小鼠的采血和注射方式2.小鼠的组织结构五、授课难点1腹腔注射2小鼠组织结构六、授课形式实验教学七、授课方法与课前准备讲授+演示预实验八、教材与参考文献1 黄诗笺等主编.动物生物学实验指导，高等教育出版社；2 北京联合大学普通生物学实验讲义。九、思考题1.怎样用简单的方法识别脂肪和胸腺。2.几种采血方法的优缺点。十、教研室主任及课程负责人签字教研室主任（签字 ） 课程负责人（签字） 2010年11月23 日 2010年11月24 日新乡医学院实验课教案课程名称：普通生物学 授课教师姓名及职称：高启禹 讲师基本内容一、实验目的1学习小型哺乳动物的外部测量法、采血方法、鼠类腹腔注射和皮下注射方法，进一步掌握哺乳动物一般解剖方法。2了解小脑对躯体运动的调节机能。3.了解小鼠呼吸系统、消化系统、泄殖系统的组成结构及特点。二、实验内容1、小白鼠的抓取固定、外部测量、性别鉴定、灌胃、注射和采血。 (1)抓取固定: 用右手提起尾部，放在实验台上，在其向前爬行时，用左手抓住两耳及头部皮肤，再置小白鼠于左手心，拉直四肢并用手指夹住肢体固定，右手可进行注射或其他操作。(2)外部测量:采用直尺测小鼠体长及尾长。(3)性别鉴定:成年鼠采用生殖器外部形态判断,幼鼠比较生殖器与肛门间的距离.(4)灌胃: 用左手捉持固定小白鼠，使口部朝上，颈部宜拉直但不宜过紧，以免窒息。右手持灌胃器，先从小白鼠口角插入口腔，再从舌前面紧沿上颚轻轻插入食管内，如灌胃器插入时很通畅且很深，证明它在食管内，此时可将药液注入灌注量：0.0050.025ml/g，最大量不得超过1ml/只。(5)注射:有肌肉注射、皮下注射、尾静脉注射、腹腔注射,主要演示腹腔注射方法。皮下注射:小白鼠的皮下注射用得较多。注射时，用左手拇、食指捉住鼠两耳及头皮，腹部向上，左手无名指及小指夹住鼠尾，右手持连有5号注射针头的注射器，将注射针头刺入腹部两侧皮下。注意勿将药液注入皮内，以免影响药物吸收。针头不宜过粗，否则药液将会自针头入口流出。注射量：0.0050.20 mg/g，最大量：每只不超过0.5 ml。另法是：将小鼠放在鼠笼上，用左手小指和无名指捏住鼠尾，轻轻向后拉，用拇指和食指捏起背部皮肤，再用右手将注射器针头刺入背部皮下。肌肉注射:小鼠和大鼠肌肉较小，肌肉注射不常用，如需肌肉注射，也可注入股部肌肉。注射量每腿一般不超过0.2 ml。尾静脉注射:将小白鼠固定在一铁丝笼或特别的筒内，使尾露在外面。用体积分数为70%的乙醇涂擦尾巴或浸在45热水中，使尾部静脉充血。用连有4号针头的注射器自鼠尾根部1/3处两侧以约角(几乎平行)刺入尾静脉，若针头已插入血管则针芯很易推动，且尾部皮肤不肿胀或不冒水滴，静脉成一条白线。否则说明针并未插入静脉血管(。注射量：(0.010.02) ml/g。腹腔注射：抓鼠法与灌胃法同，将腹部朝上，右手持注射器在下腹左或右侧(避开膀胱)朝头方向将针头刺入皮下，前进少许再以450角通过腹肌刺入腹腔注射药液。为避免针头刺入内脏，应将鼠头放低使内脏移向横膈膜，同时针头不宜刺入太深、太上，避免刺破肝脏。注射量：0.010.025 ml/g。注药时先将注射器回抽，观察有无回血，以防刺入血管或内脏器官内。(6)采血尾静脉取血:用于小量取血，将鼠身固定或麻醉，鼠尾浸泡在45左右的温水中几分钟，或用二甲苯、乙醇棉球涂擦，扩张尾部血管，擦干后，剪去尾尖0.30.5cm，让血滴入盛器内或用血红蛋白吸管吸取，必要时，可从尾根向尾尖挤压取血。取血结束时，以干棉球压迫止血。此法小鼠每次可取血0.1ml。眶后静脉丛取血:准备好长约10cm的玻璃管，一端烧制成直径11.5mm，长约1cm的毛细管，另一端渐大成喇叭形，事先充入1%肝素溶液浸润内壁并烤干备用。取血时，左手拇指和食指抓住两耳之间的头部皮肤，使头部固定，轻轻压迫动物的颈部两侧，阻断头部静脉血液回流，使眼球充分外突，眶后静脉丛充血，右手持毛细管与鼠面成45o角，刺入下眼睑与眼球之间，轻轻向眼底方向移动，并向下捻动，大鼠刺入45mm，小鼠23mm可达眶后静脉丛，稍加吸引，血流入毛细管，达到所需血量时，拔出玻管松开左手，自可止血。也可用带有7号针头的1ml注射器代替玻管取血。这种方法小鼠一次可采血0.10.3ml，大鼠可采血0.51ml。断头取血:需血量大，而且不需动物存活时可用此方法。用剪刀剪去鼠头，鼠颈向下，把血流入备有抗凝剂的容器中。注意防止动物毛等杂物流入容器引起溶血。此法小鼠可采血0.81.2ml，大鼠5.010.0ml。2、损毁小白鼠小脑效应(1)吸入法:常用乙醚吸入法。该法优点是麻醉深度易掌握，较安全、麻醉后恢复迅速，适用于实验操作时间短，又需要在清醒条件下观察动物整体变化过程的实验。缺点是乙醚局部刺激作用大，它刺激上呼吸道使粘液分泌增加，而且麻醉出现时间快，需密切观察，防止窒息或麻醉过深而死亡。学生实验常用大、小鼠。使用时置动物于玻璃钟罩或烧杯中，将浸有乙醚的棉球或纱布放入容器内，动物麻醉后取出做实验。若在实验操作过程 动物开始苏醒，可用乙醚棉球置于鼻旁以维持麻醉状态。如果效果不好，可再将动物置于容器，按前法继续吸入乙醚。麻醉过程中必须随时观察动物变化，防止麻醉过深而死。(对上呼吸道粘膜有较强的刺激作用，使分泌物增加，易发生呼吸道阻塞。因此，使用中应注意和观察动物呼吸道是否通畅)。动物麻醉效果的判断:动物达到麻醉的基本状态是：肢体肌肉松驰，呼吸节律呈现深而慢的改变，角膜反射存在、较为迟钝，躯体呈现自然倒下，此时为最佳麻醉效果。(2)自头顶部至耳后沿正中线剪开皮肤，将颈肌向下剥离。透过透明的颅骨即可看清小脑的位置，用大头针刺穿颅骨，直达小脑(2-3 mm)，搅毁该侧小脑(注意不可深刺，以免损伤脑干)。(3)待小白鼠清醒后，可见其向一侧旋转或翻滚。如损伤较轻，小白鼠向健侧旋转；当损伤重时，则向损伤侧翻滚。(4)将实验用完的小白鼠拉断颈椎处死后观察。3、小白鼠的内部结构呼吸系统:鼻、口腔、气管、肺。消化系统:咽喉、食管、胃、小肠(十二指肠、空肠、回肠) 、大肠(盲肠、结肠、直肠) 、肝脏、胆囊、脾脏、胰脏。泄殖系统:雌性:子宫、卵巢、输卵管、肾脏、膀胱。 雄性:睾丸