比较不同途径给胰岛素对血糖的影响.ppt

比较不同途径给胰岛素对血糖的影响 立项的依据 胰岛素自发现以来一直是治疗糖尿病的主要药物 特别是1965年中国首次人工合成胰岛素成功为胰岛素广泛应用于临床奠定了基础 1 然而直接将胰岛素口服给药 可使其在胃肠道被蛋白酶迅速降解 故临床常采用注射给药 但注射给药给病人带来诸多不便 近年来 非注射给药途径的胰岛素制剂已成为国内外学者的研究热点 2 实验目的 本实验通过对正常家兔及糖尿病家兔不同途径给予胰岛素 比较不同途径给药时胰岛素的降血糖作用 同时学习葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度的方法 实验原理 胰岛素是一种由两条多肽链组成的酸性蛋白质 A链含21个氨基酸残基 B链含30个氨基酸残基 A B两链通过两个二硫键以共价相连 胰岛素通过促进糖原的合成和储存 加速葡萄糖的氧化和酵解 并抑制糖原分解和异生而降低血糖 3 实验对象 器材及药品 实验对象家兔 2 5 3kg 实验器材722型分光光度计 离心机 兔手术台 固定绳 水浴箱 离心管若干 小试管若干 移液管5ml和1ml若干 注射器5ml和2ml及微量注射器若干 100ml锥形瓶 胶布 纱布等 实验药品1 戊巴比妥钠 胰岛素注射剂 胰岛素口腔黏膜喷雾剂 40IU ml 四氧嘧啶 肝素 pH7 4磷酸盐缓冲液 Na2CO3 酒石酸 CuSO4 6H2O 钼酸 钨酸钠 85 浓磷酸 浓硫酸 无水葡萄糖 生理盐水 苯甲酸 实验方法和步骤 1 家兔四氧嘧啶糖尿病模型的建立 4 1 取36只健康成年家兔 雌雄兼备 体重2 5 3kg 2 糖尿病模型的制备方法参考文献 5 取18只成年家兔 雌雄兼备 空腹24h后静脉给予150mg kg 6 四氧嘧啶生理盐水溶液 3d后待空腹血糖浓度达到16 65mmol L以上时 即认为生成糖尿病模型 3 正常家兔与糖尿病家兔分别随机分为3组 雌雄兼备 共6组 实验方法和步骤 具体分组 i 正常组 胰岛素注射给药 ii 四氧嘧啶糖尿病模型组 胰岛素注射给药 iii 正常组 胰岛素滴眼给药 iv 四氧嘧啶糖尿病模型组 胰岛素滴眼给药 v 正常组 胰岛素口腔黏膜喷雾给药 vi 四氧嘧啶糖尿病模型组 胰岛素口腔黏膜喷雾给药 2 实验前家兔禁食18 20h 取六组家兔 分别称重 以3 戊巴比妥钠1ml kg耳缘静脉注射麻醉 麻醉后将家兔仰位固定于兔台 随时补充适量戊巴比妥钠使动物在整个实验中维持浅麻醉状态 3 每只家兔刺破耳缘静脉取血1ml 随后立即补充同体积肝素化的生理盐水 实验方法和步骤 4 i 组 ii 组15min后皮下注射胰岛素0 75ml kg 并记录注射时间 分别取0 15 30 60 120 180 240min全血1ml 7 并补充同体积肝素化的生理盐水 取血方法同步骤3 5 iii 组 iv 组15min后用微量注射器取胰岛素50 l滴入动物左眼 并记录注射时间 分别取0 15 30 60 120 180 240min全血1ml 并补充同体积肝素化的生理盐水 取血方法同步骤3 6 v 组 vi 组15min后取胰岛素口腔黏膜喷雾剂0 25ml kg经适量pH7 4磷酸盐缓冲液稀释后从舌下喷雾给药 并记录给药时间 分别取0 15 30 60 120 180 240min全血1ml 并补充同体积肝素化的生理盐水 取血方法同步骤3 实验方法和步骤 7 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 8 1 血液采集后 取干燥锥形瓶一个 准确加入蒸馏水7 0ml 用移液管吸取全血0 2ml 慢慢将血液滴入水中 并用其水洗涤移液管吸头 使血液全部移入锥形瓶中 混匀 2 加入1 3mol LH3SO40 4ml 10 钨酸钠溶液0 4ml 充分混匀 放置5 10min 3 待溶液由红色变为咖啡色后 离心7min 转速为3000r min 4 测定方法 手工操作法取试管3支 取上清液按下表操作 实验方法和步骤 表 1家兔血糖测定 ml 实验方法和步骤 5 混匀放置3min 将上述各管用蒸馏水3ml稀释 将各管混匀后 用空白管调 0 点 在波长620nm处比色 读取标准管及测定管吸光度 注 本法对葡萄糖有专一性 不受其它糖及还原性物质干扰 其正常值为130 150mg 100ml 血糖含量计算方法 血糖含量 mmol L 测定管吸光度 标准管吸光度 100 180 2 2 0 025 观察指标 比较六组家兔各时间血糖含量 记录数据 计算后填入下表表 2不同途径给胰岛素家兔血糖浓度变化 预期结果及结果分析 预期结果 皮下注射胰岛素1h后血糖下降较前明显 用药后2 4h后达高峰 半衰期为2h 血糖浓度最大可下降50 以上 维持时间为5 7h 相比之下 为3种给药方法中效果最好的一种 用胰岛素经眼给药和皮下注射相比 前0 5h血糖下降程度无显著性差异 0 5h以后 经眼给药降糖幅度显著大于静脉注射 用药2h后血糖下降50 维持时间4 5h 9 并且可使血糖降至正常范围内 胰岛素口腔黏膜喷雾给药效果不如皮下注射 作用强度及达峰浓度均低于后者 但其体内药物保持的有效浓度和作用时间均较持久 口腔黏膜给药0 5h后血糖下降明显 1h后达高峰 药效可维持5 6h 预期结果及结果分析 结果分析 3种给药途径给予胰岛素对正常家兔及四氧嘧啶糖尿病模型家兔血糖降低均有作用 胰岛素作为一种蛋白质 普通制剂易为消化酶所破坏 口服无效 必须经注射给药 皮下注射吸收快 半衰期较长 作用可维持数小时 但起效时间较长 是目前最常用的胰岛素给药方法 但对机体带来了诸多不便 同时较经眼给眼和舌下黏膜给药途径起效慢 胰岛素滴眼剂是一种简便易行的剂型 胰岛素经滴眼给药主要通过眼结膜和鼻泪管黏膜吸收进入体循环而达到降糖效果 但是 经眼给药时药物损失量较大 且作用时间短 生物利用率低 胰岛素经舌下黏膜给药后 由于舌下黏膜有丰富的末梢血管丛 一部分药物能迅速进入体内 但由于黏膜吸收的 饱和关卡效应 和黏膜上皮对药物的吸附作用 加之胰岛素之间有很强的聚合力 10 可能使一部分胰岛素以多分子聚合物形式在口腔内蓄积滞留 因此 效果较皮下注射及滴眼给药略低 研究结论 近年来 糖尿病的发病率持续上升 已成为全世界发病率和死亡率最高的疾病之一 注射恐惧症和每日多次注射的压力导致了研究和开发新的给药途径 当前改进胰岛素治疗的关键 在于找的代替给患者带来痛苦和麻烦的皮下注射胰岛素的方法 本实验通过对家兔进行不同途径给胰岛素 了解其对血糖的影响 从而可以正确高效的使用胰岛素治疗糖尿病 同时有助于促进对胰岛素非注射途径的研究与发展 注意事项 1 如家兔注射胰岛素后发生低血糖休克 可提前采血 2 葡萄糖氧化酶法测血糖浓度应在取血后2h内完成 3 配制溶液时注意严格控制剂量 避免因剂量误差导致实验结果不准确 4 操作完毕应立即比色 久置颗粒变粗影响结果 参考文献 1 张文玉 张路晗胰岛素滴眼液促吸收剂的研究中国药科大学学报1997 275 5 2 孙爽 吕邵娃 王锐 夏畅 李永吉胰岛素非注射给药及与中药联合应用新进展中国实验方剂学杂志2011 266 13 3 HalperinF LopezX ManningR胰岛素抵抗者的葡萄糖刺激胰岛素分泌的增强作用受损中国糖尿病杂志2014 6 1 4 吕敏 王峰 李颖 王幼珍 王京媛 贾广兴胰岛素经眼吸收后对正常和四氧嘧啶致糖尿病模型家兔的降血糖作用中国药学杂志1995 13 1 5 徐叔云 卞如濂 陈修药理实验方法学 第二版 北京人民卫生出版社1991 1274 6 王开富 李鸣真 叶望云 柳重威 龚波四氧嘧啶剂量和家兔性别对制作糖尿病模型的影响同济医科大学学报1994 223 3 7 周密妹 杨虎 郭梅 耿立坚 李性天 吴国民胰岛素口腔黏膜喷雾剂在四氧嘧啶致糖尿病兔体内的药动学研究中国药房杂志2008 752 10 8 张翠香 罗永会 陈贵元胰岛素及肾上腺素对家兔血糖含量影响综合实验的建立和探索临