用固相萃取和微柱高效液相色谱法快速测定枸杞样品中的类胡萝卜素.pdf

用固相萃取和微柱高效液相色谱法 快速测定枸杞样品中的类胡萝卜素 周林宗 尹海川 林 强 胡秋芬 杨光宇 楚雄师范学院成人教育学院 云南 楚雄B 昆明理工大学国土资源工程学院 云南 昆明B 云南大学化学系 云南 昆明B 摘 要 研究了固相萃取富集和预分离 微柱高效液相色谱快速测定枸杞样品中类胡萝卜素的方法 枸杞样品中的类胡萝卜素用D 2 0 A 2 eK 固相萃取小柱预分离 然后以D 2 0 V 0 0 2 UEb j 77 7 微柱为固定相 甲醇 四氢呋喃 0 公 司 高 效 液 相 色 谱 仪 包 括 B 分离系统 四元泵及自动进样器 B二极 管矩阵检测器 E 9 3 3 1 1 9 7 色谱管理软件 水为石英亚沸蒸馏水并用E 9 3 3 9 d 超纯 水仪处理 电阻 E2 H 7 甲醇和四氢呋均为 I Q K级 X 9 G 0公司生产 玉米黄素 玉米黄素 单肉豆蔻酸脂 胡萝卜素 玉米黄素单棕榈酸 脂 隐黄素棕榈酸脂 堇菜黄素双棕榈酸脂 玉 米黄呋喃素双棕榈酸脂 花药黄素双棕榈酸脂 玉 米黄素双棕榈酸脂标准 分别购于X 3 e 2公司和 9 J 7 2公司 含量 c B D色谱条件 色谱柱 D 2 0 V 0 0 2 UEb 液相色谱微柱 j 77 7 D 2 0 A 2 eK 固 相萃取小柱 H H 7 J 7 流动相为 甲醇 四氢呋喃 0 A 收稿日期 作者简介 周林宗 B 男 云南省楚雄市人 从事有机分析研究工作 图 标样和枸杞样品色谱图 2枸杞 T标样 X 9 J U G H G 0 T 2 1 N L 2 4 3 2 F 2 7 A 3 2 玉米黄素 玉米黄素单肉豆蔻酸脂 P胡 萝卜素 玉米黄素单棕榈酸脂 P隐黄素棕榈 酸脂 B 堇菜黄素双棕榈酸脂 玉米黄呋喃素棕榈 酸脂 花药黄素双棕榈酸脂 玉米黄素双黄素双 棕榈酸脂 D 结果与讨论 D B分离条件的选择 类胡萝卜素的分离需用溶剂强度较强的流动 相 非水流动相为最常用的体系 我们试验了甲 醇 乙睛 丙酮 四氢呋喃和二氯甲烷为流动相分 离枸杞中类胡萝卜素 结果表明 效果以甲醇和四 氢呋喃混合最好 当甲醇与四氢呋喃的比例为 时枸杞中的类胡萝卜素可达到完 全分离且分析时间相对较短 因此该试验选用甲 醇 四氢呋喃 为流动相分离枸杞 中的类胡萝卜素 0 真空提取装 置 该装置每次可同时处理 个样 小柱活化和 样品富集的流速均控制在 7 3 7 9 10 J 0 9 Y 2 9 3 2 9 4 4 9 12 1 NN 0 7 9 1 2 9 A 0 H 9 组分加入量 J 测出量 J 回收率c b Fc 1 玉米黄素 玉米黄素单肉豆蔻酸脂 玉米黄素单棕榈酸脂 B B 胡萝卜素 隐黄素棕榈酸脂 B B 堇菜黄素双棕榈酸脂 B 玉米黄呋喃素双棕榈酸脂 花药黄素双棕榈酸脂 玉米黄素双棕榈酸脂 D L样品分析结果 用方法实际测定了几中枸杞样品中类胡萝卜 素含量 枸杞样品按 样品处理方法处理 在选 定色谱条件下进样 3分析 结果见表 表 样品类胡萝卜素分析结果 J J U 2 T U G 2 1 2 3 9 H 2 3 0 3 1 组 分样 品 宁夏枸杞 宁夏枸杞 宁夏枸杞 宁夏枸杞 玉米黄素 B 玉米黄素单肉豆蔻酸脂 玉米黄素单棕榈酸脂 胡萝卜素 B B B 隐黄素棕榈酸脂 B 堇菜黄素双棕榈酸脂 玉米黄呋喃素双棕榈酸脂 B 花药黄素双棕榈酸脂 B 玉米黄素双棕榈酸脂 0 V 0 0 2 UE b j 77 7 微柱上 用甲醇 四氢呋喃 为流动相 可在 7 9 1内完全分离枸杞 中的主要类胡萝卜素 和常规色谱柱相比 大大缩 短了分析时间 E R G 2 H G 9 eX F 9 0 9 T 9 9 1 h 2 M 2 1 G 9 1 2 1 N0 3 2 NJ 0 9 H 2 3 9 0 9 1 4 0 9 J 2 T 3 O G 2 2 1 NA 2 2A 0 7 9 傅若农 高效液相色谱进展 二 微柱液相色谱近 年的发展 国外分析仪器技术与 应 用 黄铁华 微柱液相色谱和电化学检测法测定鼠脑微 透析液中神经传递物质 分析 化 学 B B I 1 7 3 A 4 7 7 9 F A 2 0 7 1 H G 0 8 1 9 0 R 1 7 9 1 JB K G 9 1 2 F A 2 0 7 1 7 9 5 1 1 2 18 1 9 0 R 1 7 9 1 JB K G 9 1 2 9 9 0 7 9 H 0 0 4 3 9 Y 9 NH G 0 G N P 0 7 9 1 2 9 1 N U G H 2 0 1 0 M 0 2 H N4 0 0 M 0 2 H 9 0 A 2 eK H 2 0 0 9 N J U G H 2 0 1 0 A 2 0 2 N 0 N 0 A G 2 N H 0 H 0 9 H 2 0 1 c c 2 1 N G 0 3 2 9 2 1 N 2 0 NN 9 2 9 c Bc U G 9 7 G N N 0 7 9 1 2 9 1 3 A 7 9 H 0 0 4 3 9 Y 9 NH G 0 M 0 2 H P 9 1 样品中的阿奇霉素用WatersXterraTM Rp18反相固相萃取小柱预 分离和富集 然后以Waters XterraTMRp18 1 0 50mm 2 5 mm 微柱为固定相 四氢吡咯 醋酸缓冲溶液 pH 11 0 和乙腈 50 50 v v 为流动相分离 用二极管矩阵检测器检测 检测波长为215 nm 样品中的阿奇霉素在5 0min内可达到基线分离 方法标准回收率为90 101 RSD为0 38 2 8 用 该方法测定了注射液和尿样品中的阿奇霉素 结果令人满意 2 期刊论文 吴方评 董学畅 张甜 杨光宇 WU Fang ping DONG Xue chang ZHANG Tiang YANG Guang yu 微柱 高效液相色谱法测定烟草样品中植物色素的研究 云南化工2005 32 1 通过微柱高效液相色谱法测定烟草样品中的植物色素 用90 丙酮震荡浸提烟草样品中的色素 提取液经Waters Sep Park C18 固相萃取小柱预 分离和富集 以Waters Xterra TM RP18 1 0 50 mm 2 5 m 色谱柱为固定相 1 1 甲醇异丙醇溶液 水梯度为流动相 烟叶中的叶绿素 a 叶绿素 b 胡萝卜素 叶黄素 新叶黄素 紫黄质和脱镁叶绿素等色素分别在其最大吸收波长监测下分离提取 色谱峰面积定量 该方法标准回收率 95 105 RSD为1 6 2 5 将其用于烟草中天然色素含量的测定 结果令人满意 3 期刊论文 彭永芳 马银海 郭亚东 杨光宇 尹家元 胡秋芬 PENG Yong fang MA Yin hai GUO Ya dong YANG Guang yu YIN Jia yuan HU Qiu fen 微柱高效液相色谱法测定丹参中的几种有效成分 分析试验室 2005 24 8 研究了用微柱高效液相色谱法测定丹参中的4种有效成分 丹参素 原儿茶酸 原儿茶醛 丹酚酸B 的方法 丹参样品中的几种有效成分用体积分数 40 的甲醇超声振荡提取 然后以Waters XterraTM RP18 1 0 50 mm 2 5 m 微柱为固定相 甲醇和体积分数1 的HAc溶液梯度洗脱为流动相分离 在 该色谱条件下 丹参中的4种有效成分在4 0min内可达到基线分离 用紫外二极管矩阵检测器检测 方法标准回收率为97 102 相对标准偏差为 1 6 2 3 用此方法可测定几种丹参样品中的有效成分 4 期刊论文 杨亚玲 胡秋芬 杨国荣 林强 缪明明 杨光宇 YANG Ya ling HU Qiu fen YANG Guo rong LIN Qiang MIAO Ming ming YANG Guang yu 微柱高效液相色谱法测定葛根中的几种黄酮类成分 分析科学学报 2005 21 4 研究了用微柱高效液相色谱法测定葛根中的四种黄酮类成分 样品中的黄酮用甲醇超声振荡提取 然后用Waters XteraTM RP18 50 1 0 mm 3 5 m 微柱吸附 以1 的乙酸溶液和甲醇为流动相梯度洗脱分离 用紫外二极管阵列检测器检测 结果满意 5 学位论文 黄齐林 微柱高效液相色谱法在中草药活性成分分离分析研究中的应用 2006 1967年由Horvathz首次提出微柱高效液相色谱技术 科技工作者在仪器设备尤其是色谱柱的研究方面做了许多工作并取得了显著的成绩 与此 同时 许多分析实例的不断研究和拓展为其理论的研究和发展提供了丰富的实践资料 进入 20世纪末随着分离技术的不断提高 微柱高效液相色 谱也得到了长足发展 微柱高效液相色谱具有分析时间短 最佳流量较低 易与其它仪器在线联用 分析样品少 溶剂少 环境污染小等优点 因 此 引起了国内外众多学者的关注 目前已经有不少微柱高效液相色谱应用方面的研究报道 主要应用于基因工程药物 蛋白质及多肽的研究中 但该技术在天然产物质量监控方面的应用报道还比较少见 本论文归纳总结了中药质量控制的重要性以及微柱高校液相色谱的特点及其研究进展 在此基础上 应用微柱高校液相色谱法在天然产物 中 草药原药材 活性成分分析及质量控方面进行了一些研究 完成了以下工作 1 研究了用安捷仑ZORBAX Stable Bound 4 6 50m 1 8 m 快速分离柱高效液相色谱法测定大黄中大黄素 大黄酸和芦荟大黄素的方法 大黄 素 大黄酸和芦荟大黄素在2 0 min内可达到基线分离 和常规液相色谱分析相比缩短了80 以上的分析时间 用该方法测定了大黄药材 虎杖药 材及其制剂中的大黄葸醌物质 此方法未见文献报道 具有高效 快速 简便和灵敏的特点 用该方法所测的结果与文献报道基本一致 证明该法 有作为大黄 虎杖药材及其制剂质量标准控制的应用价值 2 采用安捷仑ZORBAX SB C 1 8 10mm 1 8 m 快速分离柱为固定相 建立了一个溅定虎杖中白藜芦醇的微柱高效液相色谱法方法 白 藜芦醇与其它成分在1 0min内可达到基线分离 用该方法测定了10批不同来源的虎杖药材和同一虎杖样品的6个不同部位的白藜芦醇含量 结果证 明 和常规液相色谱法相比 该方法简单快速 测定结果准确可靠 有作为快速检测虎杖中白藜芦醇含量的应用前景 3 通过固相萃取对样品进行脱脂处理后 以0 2 磷酸 甲醇 50 50 V V 为流动相 流速为1 5 ml min 安捷仑ZORBAX Stable Bound 4 6 50mm 1 8 m 色谱柱为固定相 建立了一个在2 5分钟内同时分离和测定木芙蓉中懈皮素 山奈酚 芦丁 山奈酚 3 O 芸香糖苷的 微柱高效液相色谱分离分析新方法 并将此方法用于3批不同产地的中药木芙蓉 以及同一个木芙蓉样品中的三个不同用药部位中四种黄酮类物质 的分离分析 结果表明 此方法简单 快速 重现 4 在优化的色谱条件下 即采用安捷仑的ZORBAX Stable Bound 4 6 50mm 1 8 m 色谱柱为固定相 以乙腈 1 NaHPO 内含 0 1 SDS 39 61为流动相 流速为2 0mL min 建立了一个在1 5min内同时分离和测定巴马汀 小檗碱和药根碱的分离分析方法 并将此方法用于 7批不同来源的中药大黄藤中三种生物碱的测定 样品的加标回收率符合要求 说明该法可以用于中药大黄藤的质量控制 5 研究了用固湘障取预分离 高效液相色谱法测定满山红中槲皮素和杜鹃素 满山红中的槲皮素和杜鹃素用90 甲醇加热回流提取 提取液 用Waters Sep Pak C18固相萃取小柱预分离 以安捷仑ZORBAX Stable Bound 4 6 50mm 1 8 m 色谱柱为固定相 0 2 的磷酸和甲醇 52 48 为 流动相 在该色谱条件下 槲皮素和杜鹃素在1 0min内可达到基线分离 方法标准回收率为98 102 相对标准偏差为1 6 1 8 可用于快 速测定满山红样品中的槲皮素和杜鹃素含量 结果满意 6 期刊论文 胡秋芬 杨光宇 黄章杰 李海涛 尹家元 微柱高效液相色谱法测定金银花中的多酚类物质 分析化 学2005 33 1 研究了用微柱高效液相色谱法测定金银花中的几种多酚类物质 氯原酸 木犀草黄素 木犀草黄素 7 葡萄糖甙 木犀草黄素 7 半乳糖甙 槲 皮素及槲皮素 3 葡萄糖甙 的方法 金银花样品中的多酚类物质用甲醇加热回流提取 然后以Waters XterraTM RP18 1 0 mm 50 mm 2 5 mm 微 柱为固定相 1 的醋酸和甲醇梯度洗脱为流动相分离 在该色谱条件下 金银花中6种多酚类成分在4 min内可达到基线分离 用紫外二极管矩阵检测器 检测 方法标准回收率为97 104 相对标准偏差为1 6 2 3 测定了几种金银花样品中的多酚类物质 结果满意 7 期刊论文 张甜 董学畅 吴方评 张莉 杨光宇 微柱高效液相色谱法测定葛根中的葛根素 云南化工 2004 31 4 研究了用微柱高效液相色谱法测定葛根中的葛根素的方法 葛根样品中的葛根素用甲醇超声振荡提取 然后以Waters XterraTMRP18 1 0 50 mm 2 5 m 微柱为固定相 35 的甲醇 内含1 的醋酸 为流动相分离 在该色谱条件下 葛根素在2 0min内可达到基线分离 用紫外二极管矩阵检测器 检测 方法标准回收率为97 103 相对标准偏差为1 6 2 1 方法测定了几种葛根样品中的葛根素 结果满意 8 期刊论文 胡秋芬 李德良 李海涛 杨光宇 尹家元 微柱高效液相色谱法测定茶多酚的研究 食品科学 2004 25 6 研究了用固相萃取预分离 微柱高效液相色谱法测定茶叶中多酚的方法 茶叶中的多酚用80 乙醇超声震荡萃取 提取液用C18固相萃取小柱预分 离 以Waters XterraTM RP18 1 0 50mm 2 5 m 色谱为固定相 1 的醋酸和甲醇梯度洗脱为流动相 在该条件下茶叶中主要的多酚在3 0min内可达 到基线分离 用紫外二极管矩阵检测器检测 方法标准回收率为95 103 相对标准偏差为1 2 1 6 用该方法测定了几种茶叶样品中的多酚 结果 令人满意 9 期刊论文 张甜 郝南明 董学畅 张云霁 ZHANG Tian HAO Nan ming DONG Xue chang ZHANG Yun ji 微柱高 效液相色谱法测定岩白菜素含量研究 云南民族大学学报 自然科学版 2005 14 2 研究了用微柱高效液相色谱法测定岩陀及复方岩白