PT APTT TT.ppt

PT APTT TT 血浆凝血酶原时间测定 ProthrombinTime PT 原理 在受检血浆中加入足量的凝血活酶和钙离子 测定血浆凝固所需的时间 即为血浆凝血酶原时间 PT 本试验是外源性凝血系统常用的筛检试验 材料 1 凝血仪 水浴箱 灭菌注射器 硅化试管或塑料试管 离心机 秒表 2 25mmol L氯化钙凝血活酶试剂 3 正常人冻干混合血浆 4 109mmol L枸橼酸钠溶液 操作 试管法1 硅化试管或塑料管中加入109mmol L枸橼酸钠溶液0 2ml 静脉采血1 8ml加入上管中 充分混匀 3000rpm离心10min 分离血浆 2 将氯化钙凝血活酶溶液 健康人混合冻干血浆和待测血浆 置37 水浴中预温5min 3 取试管1支 加入健康人混合冻干血浆0 1ml 37 水浴预温30s 再加入预温的25mmol L氯化钙凝血活酶溶液0 2ml 混匀 开动秒表计时 4 不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时 终止计时 记录所需时间 重复测定2 3次 取其平均值 5 同样方法测定待测血浆的凝血酶原时间 重复测定2 3次 取平均值 注意事项 1 所用试管必须洁净 干燥 无划痕 2 应使用对凝血因子无激活作用的塑料制品或硅化的玻璃器皿采血 3 采血要顺利 抗凝要充分 采血后应仔细检查标本有无溶血 黄疽和凝血块 任何微小的凝块都会影响测定结果 必须重新采血 4 采血后宜在1h内完成测定 4 冰箱内保存不应超过4h 5 水浴温度要控制在 37 0 0 5 温度过高或过低都可影响测定结果 6 红细胞比容 Hct 小于0 2或大于0 5时 抗凝剂的用量应做适当的调整 抗凝剂 100一Hct X血 m1 X0 00185 m1 7 由于每次使用的氯化钙凝血活酶活性不尽相同 测定的条件也有变动 故每次测定均需有正常对照 氯化钙凝血活酶必须注明国际敏感指数 ISI 参考值 目前PT报告方式有 以直接测定的时间 PT 报告 PT 11 13s 超过正常对照3s有意义 以PT比值 PTR 报告 PTR 待测血浆PT 健康人混合冻干血浆PT PTR 0 85 1 15 以国际标准化比值 INR 报告 INR PTRISI ISI为氯化钙凝血活酶试剂国际敏感指数 INR 0 8 1 5 由于前两者存在的偏差较大 对临床上指导口服抗凝药物治疗用量有一定危险性 以及在国内难以开展室间质量评定 因此 在报告PT PTR时 一定要报告INR 评价 试管法为测定血浆凝血酶原时间的手工方法之一 其准确度比仪器法差 但多次重复测定也可得到较准确的结果 仪器法测定由半自动或全自动血凝仪完成 全自动血凝仪的准确性和精密度高 不同仪器及试剂测定同一血浆 其PT也有一定差异 但INR应一致 活化部分凝血活酶时间测定 APTT 原理 在37 条件下 用白陶土 激活剂 激活 因子 用脑磷脂 部分凝血活酶 代替血小板第3因子 测定乏血小板血浆加入Ca2 离子后凝固所需的时间即为APTT 该试验是内源性凝血系统灵敏和常用的筛检试验 材料 1 血凝仪法 水浴箱 灭菌注射器 硅化玻璃试管或塑料管 离心机 秒表2 109mmol L枸橼酸钠溶液 3 APTT试剂 含白陶土或鞣酸及脑磷脂 4 25mmol L氯化钙溶液 5 健康人混合冻干血浆 操作 试管法1 静脉采血1 8ml 加入含有109mmol L枸橼酸钠溶液0 2ml的试管中 充分混匀 3000r min离心10min 分离血浆 2 试管中加入预温的健康人冻干血浆和APTT试剂各0 1ml 混匀 37 水浴中预温3min并轻轻振摇 3 于上述试管中加入预温的25mmol L氯化钙溶液0 1ml 混匀 并立即计时 置水浴中不断振摇 20s后 不时地缓慢倾斜试管 观察试管内液体的流动状态 当液体停止流动时停止计时 记录时间 4 用同样方法测定待检血浆的APTT值 注意事项 1 采血要顺利 血液抗凝要充分 避免凝块产生 2 采血后应尽快检测 最迟不应超过2h 否则凝固时间有缩短的倾向 3 血液离心速度要达到3000r min 时间为10min 尽可能除去血小板 离心后血浆血小板计数应 20X109 L 4 血浆加APTT试剂后预温时间不应少于3min 5 待检标本检测前应先测定健康人混合血浆 如果其APTT在允许范围内方能测定待检标本 否则 应重新配制APTT试剂 6 活化剂因规格不一 其致活能力不同 因此参考值有差异 如果正常人混合冻干血浆APTT明显延长 则提示APTT试剂质量不佳 参考值 试管法和仪器法的参考值无差别 一般在 37土3 3 s 超过正常对照10s以上有意义 评价 APTT是一个十分灵敏而简便的试验 能检出因子 25 的轻型血友病 可代替普通试管法凝血时间或血浆复钙时间测定 是检测内源性凝血 系统有无异常的最常用的筛检试验 血凝仪测定APTT 其测定速度和结果的准确性 灵敏度均高于试管法 并易于标准化 血浆凝血酶时间 TT 原理 受检血浆中加入 标准化 的凝血酶溶液后 血浆凝固所需要的时间为凝血酶时间 thrombintime TT TT主要用于检测血浆纤维蛋白原的减少或抗凝物质的增多 材料 1 0 13mol L枸橼酸钠溶液2 凝血酶溶液将冻干凝血酶先用蒸馏水适量复溶 再用生理盐水调至使正常血浆在16 18s左右凝固 3 正常对照血浆 4 水浴箱 秒表 康氏管等 操作 1 静脉采血1 8ml 加入含有109mmol L枸橼酸钠溶液0 2ml的试管中 充分混匀 3000r min离心10min 分离血浆 2 取正常对照血浆0 1ml于康氏管中 置37 水浴中 预温5min 再加0 1ml 标准化 凝血酶溶液 同时启动秒表记录血浆凝固时间 3 以同样方式 测定受检血浆凝固时间 连续测定两次或三次取平均值与对照血管比较 注意事项 1 已稀释配制好的凝血酶溶液不能久置室温下 在4 环境中可保存3天 2 血浆在室温下放置不要超过3h 3 不宜用EDTA和肝素抗凝剂 否则影响结果 4 凝血酶通常为悬液 用前一定要充分混匀 5 凝血酶时间的终点判断是以顺利流动的透明混合液到出现流动缓慢趋向浑浊的最初凝固为准 参考值 16 18s 超过对照3s以上为异常 临床意义 1 凝血酶时间延长 以DIC时纤维蛋白原消耗为多见 也有部分属于先天性低 无 纤维蛋白原血症 原发性纤溶及肝脏病变 2 凝血酶时间延长也可见于肝素增多或类肝素抗凝物质增多 3 凝血酶时间缩短极为罕见 主要见于某些异常蛋白血症或巨球蛋白血症时 此外 较多的是技术原因 如标本在4 环境中放置过久 组织液混入血浆等 评价 1 用凝血酶时间检测了解纤维蛋白原含量和凝血作用有时也会出现误差 如低Fg可造成凝血酶时间延长 过高Fg因抑制纤维蛋白单体交联也会造成类似结果 异常纤维蛋白原血症