2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体(第二课时).ppt

一 动物细胞融合 1 概念 动物细胞融合 cellfusion 也称细胞杂交 是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程 融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞 称为杂交细胞 2 原理 细胞膜的流动性 2 2 2动物细胞融合与单克隆抗体 诱导方法 物理方法 化学法 生物法 灭活的病毒 电激等 聚乙二醇 PEG 3 融合过程 诱导融合的方法 灭活病毒 植物细胞杂交与动物细胞融合的比较 细胞膜的流动性细胞的全能性 细胞膜的流动性 纤维素酶 果胶酶 物理方法 离心 振荡 电激 化学方法 PEG 物理 化学方法灭活的病毒 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 4 意义 突破了有性杂交方法的局限 使远缘杂交 种间 属间 科间 动植物之间 成为可能 5 应用 最重要的用途是制备单克隆抗体 1 抗体由何种细胞产生 如何产生 2 抗体的化学本质是什么 与抗原作用的特点 主要分布在哪里 3 用传统的方法如何获得抗体 二 单克隆抗体的制备 抗体的传统生产方法 从血清中分离抗体 该法制备抗体的特点 产量低 纯度低 且抗体的特异性差 灵敏度低 多种效应B细胞 动物体内 多种抗体 抗原 单克隆抗体的制备 单克隆抗体 单个细胞克隆产生的化学性质单一 特异性强的抗体 利用效应B细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 设计方案 单克隆抗体的制备过程 整个制备过程为何要经过两次筛选 第一次筛选得到杂交瘤细胞 多种 在特定的选择性培养基上 未融合的亲本细胞 浆细胞和骨髓瘤细胞 和融合的具有同种核的细胞 BB融合细胞 瘤瘤融合细胞 都会死亡 只有融合的杂种细胞 杂交瘤细胞 才能生长 第二次需先在多孔培养板上 在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养 然后再筛选出能产生特异性抗体的细胞群 由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的 所以产生的抗体必然是化学性质单一的 特异性强的单克隆抗体 这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义 只不过克隆的不是B淋巴细胞 而是杂交瘤细胞 三 单克隆抗体的应用 1 作为诊断试剂 最广泛应用准确 高效 简易 快速 如同位素标记单克隆抗体 可诊断肿瘤 心血管畸形等 2 运载药物 生物导弹 单克隆抗体 药物 治疗肿瘤 生物导弹 单抗导向 药物为弹头 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法 设计的生产破伤风杆菌单克隆抗体的实验方案 制备单克隆抗体 B细胞 抗体 细胞融合 灭活病毒 双亲细胞 分泌抗体 无限增殖 原代 传代 50 例1 1 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合 得到杂交细胞 经培养可产生大量的单克隆抗体 与骨髓瘤细胞融合的是 A 经过免疫的B淋巴细胞B 没经过免疫的T淋巴细胞C 经过免疫的T淋巴细胞D 没经过免疫的 淋巴细胞 A 巩固练习 2 动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中 正确的是 诱导融合的方法完全相同B 所用的技术手段基本相同C 操作步骤基本相同D 都能形成杂种细胞 D 3 单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是 A 由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B 由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C 由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D 由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成 D 4 只能使动物细胞融合的常用诱导方法是 A PEGB 灭活的病毒C 电刺激D 离心 B 5 单克隆抗体制备过程中 骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后 要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞 在这种培养基上不能存活增殖的细胞是 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞A B C D C 6 生物导弹 是指 A 单克隆抗体B 杂交瘤细胞C 产生特定抗体的B淋巴细胞D 在单克隆抗体上连接抗癌药物 D A B细胞为动物细胞 请据图回答问题 A细胞 B细胞 C细胞 D细胞 1 若A细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞 那么D细胞称为细胞 D细胞具有两个亲本细胞的特征 一方面因具有骨髓瘤细胞的性质 通过方式产生大量细胞 我们称之为过程 另一方面能分泌大量的抗体 我们把该过程分泌的抗体称 杂交瘤 连续分裂 有丝分裂 单克隆 单克隆抗体 练一练 2 D细胞中产生的抗体其化学本质是 合成该物质的场所是 它是由控制合成的 合成过程包括和两个重要步骤 球蛋白 核糖体 基因 转录 翻译 3 D细胞中产生的抗体具有作用 与血清抗体相比其优越之处在于强高 免疫 特异性 灵敏度 4 若A为人细胞 B