培养基的配方.doc

营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤） 100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至76，过滤分装121，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH76），加热使其溶解待冷至45-50，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。用途：1 一般棉拭子均接种此培养基。2尿液，脓液3分离细菌标本用。基础培养基 （肉膏汤BB）成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克氯化钠 5克 水 1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至76，过滤分瓶，121高压灭菌，20分钟备用。用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。2 作普通琼脂斜面。血液培养基（大管肉汤培养基）成份：1 新鲜牛肉浸液 1000毫升2 PABA（对氨基苯甲酸相当于10mg/毫升） 1g% 1毫升3 MgSO4 相当于0493/100毫升 493% 1毫升4 枸椽酸钠 03g制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。用途：作血，骨髓培养用。肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂）成份： 蛋白胨 10克 乳糖 10克氯化钠 5克 琼脂 25（22）克水 1000毫升 2%伊红溶液20毫升05%美兰溶液 20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH74过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，05%美兰溶液20毫升，（115高压20分钟），冷却至50左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖）用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。1罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾 24克 硫酸镁 024克枸椽酸钠 06克 天门冬素 36克纯甘油（丙三醇） 12毫升 水 600毫升马铃薯粉 30克 鸡蛋 1000毫升（约3公斤）2%孔雀绿水溶液 20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿）。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。4 间歇灭菌第一次901小时，第二次80半小时，第三次80半小时（或放85烤箱内连续二次）。质控标准： 1 灭菌试验合格。2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。用途：作结核分枝杆菌培养用。结核半固体培养基成份：磷酸氢二钠 19克 硫酸镁 06克磷酸二氢钾 25克 天门冬素 5克1%孔雀绿 15克 甘油 20毫升吐温80（10%） 5毫升 水 1000毫升枸椽酸钠 25克 动物血清 100毫升琼脂 15克（80小时用甲醇去脂）1%孔雀绿 078毫升 吐温80（10%） 5毫升加动物血清 100毫升制法： 1 除血清外将上述药品均称好，放入煮沸溶解，调PH7。22 分管（每管约10毫升）包扎好，高压，121半小时灭菌。3 待冷后无菌法加无菌血清（绵羊血或兔血）每管约1毫升备用。4 去除琼脂方法：取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封，放37温浴80小时，每天摇动一次，冷却后到时取出用滤纸过滤，待琼脂自然冷却后备用。质控标准：1无菌实验合格。2琼脂硬度合适而清亮。3接种标准结核杆菌用，强度合适即可用。用途：培养结核杆菌用。亚碲酸钾血琼脂平板成份：琼脂基础 100毫升 10%葡萄糖 2毫升1%亚碲酸钾 45毫升 绵羊血 10毫升制法：1将琼脂基础溶解好，加入羊血。2马上加热使成咖啡色后，稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸45毫升混合后倒入无菌平板，2凝固后存冰箱备用。质控标准：接种白喉杆菌生长良好，其它革兰氏阴性菌均抑制生长。用途：供培养及鉴别白喉杆菌用。米培养基成份：白米 20克 水 1000毫升琼脂 20克 吐温80 10毫升制法：1将20克米加水200毫升煮沸45分钟，煮时将容器盖好。2用纱布过滤，只要米汤，不要饭，加水至1000毫升。3加琼脂20克，吐温-80 10毫升煮溶，分装中型管（每管约3毫升），包扎好，高压，121半小时，消毒备用。质控标准：1灭菌。2要求清亮。3接种白色念珠菌17-24小时生长良好，并产生厚膜孢子。用途：培养白色念珠菌用。蛋白胨水培养基成份：蛋白胨 1克 氯化钠 05克水加至 100毫升 PH调至 78制法：把以上各物称好溶于水，调节PH76分装消毒备用。质控标准：1 放置37无菌生长。2 接种大肠杆菌24小时生长良好。3 可作中国兰平板基础液。可作靛基质基础液（作此试验需要色氨酸蛋白胨）。血培养基成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克氯化钠 5克 葡萄糖 3克枸椽酸钠 3克 MgSO4。7H2O 20毫升05%PABA 10毫升 酵母浸液 10毫升 02克（2%过滤）*酚红04% 6毫升 水 1000毫升琼脂 05克*：作大BB，小BB时，不要加酚红和琼脂。制法：1。除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH742。调好PH后再加酚红。3。硫酸镁、PABA另外无菌再加入（亚细，小BB）沙氏培养基成份：蛋白胨 1克 水 100毫升琼脂 15克（琼脂粉1克%） 葡萄糖或麦芽糖 4克3制法：1将上述物质称好，放入水中煮沸溶解（不必调PH即有5左右）分中号试管（约4毫升）包扎，高压11520分钟。2 趁热斜好，凝固备用。质控标准：1无菌试验合格。2接种霉菌比在其它培养基上生长良好，其它菌生长不好。用途：作分离培养霉菌用。注意：1 接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含125%氯霉素沙氏斜面培养基上。2 也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。肉渣培养基成份： 牛肉渣 牛肉浸液（牛肉膏）制法：将做牛肉浸液的牛肉渣，装入试管，高约3毫米，加入牛肉浸液或牛肉膏汤（PH76）约5毫升，比肉渣高一倍，液面上加入已溶解的凡士林，高约05厘米（不加也可），121高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用 。用途：用于厌氧菌培养。注意：如无肉渣也可用牛、羊血等代替，将血块先放入水内煮沸，取出成小块，血块在加热后摇匀成碎颗粒状。相关疾病： 霍乱 痢疾 肺炎 脑膜炎单糖发酵管培养基（半固体）成份： PH76-78蛋白胨水 1000毫升（03克/100毫升）12%酚红液 04毫升琼脂 04 - 05克10%糖或醇 10毫升制备：把蛋白胨水，琼脂加热溶解，然后加12%酚红液04毫升，10%糖10毫升，混匀，分装试管，每管约2-3毫升，经115高压灭菌20分钟后，分置于试管架上，贴上各类糖或醇类标签备用。质控标准：细菌发酵糖类或醇而产生酸，能使培养基PH改变，指示剂由红变黄色，如因发酵产生气体则半固体内产生气泡，如有动力则半固体由清亮变混浊。明胶培养基成份：肉浸液 1000毫升（牛肉浸膏5克）明胶 12克制法：100毫升肉浸液中，加入明胶12克，隔水加热煮化，校正PH72，分装小号试管，用阿诺氏间歇灭菌8030分钟，连续3日，或者108高压20分钟，冷却，贮存备用。碱性蛋白胨水成份：蛋白胨 20克 氯化钠 5克硝酸钾 01克 结晶碳酸钠（NaclCO312H2O） 02克水 1000毫升4制法：将蛋白胨，Nacl，硝酸钾，结晶碳酸钠称好，溶于1000DW中，校正PH84分装试管，121高压灭菌15分钟后备用 。用途：用于霍乱弧菌培养。葡萄糖蛋白胨水（M。V用）成份：蛋白胨 5克 葡萄糖 5克K2HPO4 5克 水 1000毫升制法：将上述称好溶解分装试管，调PH74高压灭菌115 灭菌20分钟 ，或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管标准：灭菌试验合格。接种大肠杆菌VP阴性，M阳性；接种产气杆菌VP阳性，M阴性。用途：作鉴别肠道杆菌用。枸椽酸盐培养基成份：磷酸二氢铵 01克 硫酸镁 002克磷酸氢二钾 01克 枸椽酸钠 023-05克（036）氯化钠 05克 琼脂 15克05%溴麝香草酚兰2毫升 （调PH68再加）制法：将上述称好，放入水中煮沸溶解，调PH68，然后分装中号试管，高压灭菌，趁热倒呈斜面，凝固后备用。标准：1灭菌试验合格，培养基呈果绿色适宜。2接种大肠杆菌，培养基上不生长，也不变色。3接种产气杆菌，培养基呈深兰色。用途：作鉴别大肠杆菌用。双糖铁培养基成份：下层：蛋白胨 1克 氯化钠 05克葡萄糖 02克 琼脂 03-05克水 100毫升将上述物质混匀调PH76后加12%酚红04毫升上层：蛋白胨 1克 氯化钠 05克乳糖 1克 硫代硫酸钠 003克硫酸亚铁 002克 琼脂 1克水 100毫升制法： 1将下层配好，分装中号试管（1毫升），塞好包扎，15磅高压灭菌半小时，使凝固后备用。2制上层时，先将蛋白胨水制好，加入硫酸亚铁，硫代硫酸钠，加热溶解PH81，再加入酚红分瓶，（每瓶300毫升，称取琼脂包扎灭菌，趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112消毒15分钟）。3取已制的下层管，每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升，边斜放置使成斜面，凝固后备用。标准：无菌试验合格，接种大肠杆菌下层产酸产气，上层产酸。尿素培养基成份：蛋白胨 01克 氯化钠 05克磷酸二氢钾 02克 尿素 02克（或10%2毫升）葡萄糖 001克（或10%葡萄糖01毫升）H2O 100毫升 酚红（02%） 04毫升制法：1除葡萄糖，尿素外把其它药品称好放入水中煮沸，使溶解，调PH72过滤，15磅高压灭菌15分钟2配制尿素（灭菌）液：每100毫升基液内加2毫升3配制10%葡萄糖（灭菌）每100毫升加01毫升4分装小试管待用标准：1灭菌试验合格2接种变形杆菌24小时呈红色用途：鉴定变形杆菌用胆盐中性红琼脂成份：蛋白胨琼脂PH72-74 5000毫升胆 盐 25克乳糖 50克对氨基苯甲酸 25毫克1%中性红溶液 25毫升制法：将胆盐，对氨基苯甲酸，乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中，待冷至50-60时，加入1%中性红液25毫升，混合后即倾注平皿，凝固待用*：1%中性红：1克中性红加酒精60毫升，加水40毫升丙二酸盐培养基（缩苹果酸钠）成份：丙二酸钠 03克 酵母浸膏 01克Nacl 02克 硫酸铵 02克K2HPO4 006克 KH2PO4 004克水 100毫升PH68，高压灭菌备用02%溴麝香酚兰乙醇 125毫升制法：与枸椽酸盐利用试验相类似，是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源无机铵盐为氨源而生长，生长者使培养基变成碱呈兰色鉴定： 克氏杆菌 （+） 赫夫尼亚 （+）沙门氏菌 （） 痢疾杆菌 （）苯丙氨酸培养基成份：酵母浸液 15克 DL-苯丙氨酸 1克磷酸氢二钠（无水）05克（或L-苯丙氨酸 05克）氯化钠 25克 琼脂 6克水 500毫升 PH74制法：1 将上述成份加热溶解，分装于12*125mm口径的试管中，每管约4毫升2 高压灭菌15磅10分钟，趁热使试管斜置凝固后备用3 接种时划斜面用途：鉴定沙门氏菌用苯丙氨酸脱氨酶试验沙门氏菌阴性双抗培养基成份：蛋白胨 10克 牛肉膏 5克氯化钠 5克 无水亚硫酸钠 3克柠檬酸钠 10克 蔗糖 10克琼脂粉 20克 水 1000毫升制法：1将上物称好，加热溶于水中2调PH82843 分装高压灭菌后备用倾注平板前先加热溶解琼脂等冷至50左右，按无菌操作加入多、庆抗菌素充分摇匀， 倾注平板，凝固后备用（庆大霉素：150u/毫升，多粘菌素：1500u/毫升, 2毫升加至1000毫升培养基内，此相当于庆大霉素0.3u/毫升, 多粘菌素3u/毫升）O2培养基保存液：（文腊氏液）A液：硼酸 12405克 KCL 14912克水 1000毫升取A液250毫升 08%NAOH 1335毫升NACL 20克 水 1000毫升分装高压灭菌硝酸盐胨水成份：蛋白胨 1克硝酸钾（无NO2） 01克H2O 100毫升PH74，高压灭菌分装备用（如无硝酸钾也可用硝酸钠002克，NACL005克，H2O100毫升）用途：硝酸盐还原试验用原理：测定细菌能否还原硝酸盐为亚硝酸盐，后者在酸性条件下与a萘胺和对氨基苯磺酸发生重氮反应，生成红色的1-萘-4偶氮苯对磺酸制法：试剂甲液A对氨基苯磺酸08克溶于5N的醋酸100毫升B：乙液a-萘酚05克溶于5N的醋酸100毫升中将细菌接种于硝酸盐水中37培养24-96小时，加入甲液01毫升，再加入乙液数滴，立即呈现红或紫色为阳性king氏培养基（能促进绿脓菌绿色素产生）成分：蛋白胨 2克 K2SO4 1克甘油 1克 MGCL2 0.14克琼脂 1.5克 H2O 100毫升KING氏培养基（能促进绿脓菌荧光色产生）成分：蛋白胨 2克 甘油 1克K2SO4 0.15克 MGSO4 4.7克 H2O 0.15克琼脂 1.5克 H2O 100毫升调PH7.2 15磅20分钟消毒后使成斜面备用七叶苷水解试验原理：粪链球菌能分解七叶苷（Escalin）其代谢产物与铁离子结合产生黑色沉淀，使培养基变黑方法：将菌种接种在七叶苷或琼脂上3718小时，观察结果，培养基变黑色，其他链球菌能生长但不变黑色，肺炎链球菌不长成分：七叶苷 0.1克 胰胨 1.5克枸橼酸铁 0.2克 琼脂 2.0克（0.5克/50毫升）胆汁 2.5毫升 H2O 100毫升PH7.0分装小试管内高压灭菌后备用（10磅20分钟）七叶苷又名桑树皮甙，七叶灵，Aesclin Escnlim Bicolorin等为白色针状结晶水溶液兰色荧光）葡萄糖氧化发酵培养基（O/F）成份：蛋白胨 27克 氯化钠 50克02%溴麝香酚兰 003克 琼脂 3克KH2PO4 03克 葡萄糖 100克水 1000毫升制法：以上成份除糖外，溶解调PH70，10磅高压灭菌20分钟后备用方法：挑取少量培养物接种两管，其中一管接种后加液体石腊不少于1厘米厚，两管同时35，培养过夜，观察颜色的变化，若无颜色变化，需继续观察七天，每日观察刺层型别用途：适用于微球菌科和非发酵菌的鉴定麦康凯培养基成份：蛋白胨 20克 氯化钠 5克乳糖 10克 琼脂 20克H2O 1000毫升 1%中性红溶液 3-4毫升1%结晶紫 01毫升 PH74除中性红临时用时加入外，其余均高压灭菌备用邻硝基酚半乳糖甙（ONPG）酶试验缓冲液：Na2H2PO4 69克 溶于40DW中，用5NNOH调PH70，再加水到50毫升，冰箱保存用前若有结晶可稍加温，溶解后再用ONPG液：称取ONPG（邻硝基酚-B-D半乳糖苷）80毫克，溶于15毫升D.W中，再加上缓冲液5毫升，放入冰箱中保存此液不稳定，如出现黄色即不能用鉴别：脑膜炎球菌和乳糖球菌及沙门氏菌属与枸橼酸菌属及亚利桑那氏菌属脑膜炎球菌和沙门氏菌属为阳性乳球菌，枸橼酸菌属和亚利桑那菌属为阳性半固体培养基成份：牛肉膏 3克 蛋白胨 10克氯化钠 5克 琼脂 25-4克水 1000毫升校正PH74，15磅高压15分钟倾注平板，厚度约4mm，冷藏备用氨基酸脱羟试验培养基成份：L-氨基酸 05克 蛋白胨 05克牛肉膏 05克 葡萄糖 005克吡多醛 05克 水 100毫升2%溴甲酚紫乙醇液 05毫升 2%甲酚红 025毫升制法：除指示剂及氨基酸外，溶解，PH60，然后加入氨基酸（必要时重新调PH）及指示剂，混匀分装1毫升/管加10毫米厚石蜡油，高压10-15磅10-15分钟灭菌备用注意：1 使用DL型AA时量加倍2 最好同时接种空白管（即不含有AA的同样培养基）作对照3 培养基超过24小时可出现假阳性葡萄糖酸盐培养基成份：蛋白胨 15克 酵母浸液 1克K2HPO4 1克 葡萄糖酸钾 40克DW 1000毫升溶解过滤分装，高压10磅15分钟结果：加班氏试剂，加热观察结果黄-橙色为阳性 无颜色变化为阴性阿拉伯糖（单糖）液体培养基成份：蛋白胨 1克 氯化钠 05克DW 100毫升（调PH76）16%溴甲酚紫乙醇溶液01毫升阿拉伯糖 1克菌种保存培养基成份：琼脂 10克 DW 1000毫升浸10分钟加热溶解后，再加牛肉膏 5克 蛋白胨 10克氯化钠 3克 Na2HPO4.12H2O 2克本培养基出自上海进出口商品检验局之处方，其最大优点为：细菌保存4年后，其形态菌属特点，生化反应，血清学试验等无变化厌氧培养基（GAM肉汤）成份：大豆胨 3克 口胨 10克消化血清粉 135克 酵母浸膏 5克牛肉膏 22克 牛肝膏（粉） 12克葡萄糖 3克 KH2PO4 25克可溶性淀粉 5克 L-半胱氨酸盐 03克硫乙醇酸钠 03克 肉汤（牛心汤） 1000毫升调PH72-74，10磅高压灭菌15分用途：用于厌氧菌培养，是一般培养基的基础，此培养基营养最丰富，用时无需加血，可用于各类厌氧菌增菌用GMA琼脂成份：蛋白胨 10克 大豆胨 3克口胨 10克 消化血清粉 135克酵母浸液 5克 牛肉膏 22克牛肝膏 12克 葡萄糖 3克KH2PO4 25克 氯化钠 3克可溶性淀粉 5克 L-半胱胺酸盐酸盐 03克硫乙醇酸钠 03克 琼脂 15克DW 1000毫升调PH72-74，10分钟高压灭菌注意：1可溶性淀粉加热易成糊状凝块，最好先用水少许将淀粉混匀，再加沸水使成糊状，备用2此培养基营养丰富，无需加促进物质用途：用于分离培养厌氧菌硫乙醇酸盐半固体琼脂成份： L-半胱氨酸 025克 葡萄糖 6克胰蛋白胨 17克 大豆胨 3克硫乙醇酸钠 01克 氯化钠 25克亚硫酸钠 01克 琼脂 07克DW 1000毫升调PH76，11磅高压15分钟附：VKL添加剂：液体培养基01ug/毫升或01单位/毫升固体培养基最终浓度10ug/毫升，冷却后再加VitKL淋球菌培养基：基础琼脂 34克 无菌抗凝羊血 10毫升20%葡萄糖溶液 1毫升 万古霉素 02毫升多粘菌素B 00375毫升 水 90毫升用法：1取基础琼脂浸泡于水中，加热煮沸溶解，121高压灭菌20分钟2加入羊血和葡萄糖，于90水浴中加热，不时摇动使成咖啡色3冷却至60，加入万古霉素和多粘菌素B溶液，摇匀倒入平板，凝固备用醋酸铅试纸培