血型血清学.doc

WHO/GPA/CNP/93.2B Distr.:Limited Orig.:English安全 Safe血液 Blood和 and血液制品Products第三册 血型血清学Module 3 Blood Group Serology 世 界 卫 生 组 织 全球艾滋病项目 日内瓦 目录1. 本册简介 1.1 远程教育项目 1.2 学习须知 1.3 第3册血型血清学 1.4 学习目标 1.5 学习计划2. 血液成分与功能 2.1 全血 2.2 红细胞 2.3 血红蛋白 2.4 白细胞 2.5 血小板 2.6 血液凝固 2.7 输血的原因3. 血型免疫学基础 3.1 抗原 3.2 抗体 3.3 抗体免疫应答 3.4 红细胞抗 原 抗 体 反 应 3.5 补体4. ABO 血型系统 4.1 ABO血型 4.2 ABO血型的遗传基础 4.3 ABO血型鉴定 4.4 A和B红细胞抗原的发育 4.5 A抗原的亚型 4.6 抗AB和抗A 4.7 分泌状态 4.8 IgM与IgG（天然产生的与免疫的）抗A、抗B5. Rh血型系统 5.1 Rh血型系统 5.2 Rh系统的遗传基础 5.3 Rh血型鉴定的重要性 5.4 Rh Du抗原6. 配血试验和发血 6.1 配合性试验 6.2 血液的申请 6.3 患者用血选择 6.4 不规则抗体的筛选 6.5 配血（配合）试验 6.6 配血标签6.7 血型及保证系统6.8 紧急情况下的选血与发血 6.9 从血库发血或血浆 6.10 当血或血浆发给患者时 6.11 输血反应 6.12 记录档案 6.13 医院备血管理7. 血型鉴定和配血试验技术 7.1 介绍 7.2 健康和安全 7.3 器材 7.4 盐水 7.5 巴斯德吸管 7.6 玻片、试管、微量板 7.7 阅读结果 7.8 反应强度的定义 7.9 血型鉴定试剂 7.10 用于鉴定试验的红细胞 7.11 抗血清和红细胞的保存 7.12 抗血清和红细胞使用前的检测 7.13 ABO、Rh鉴定 7.14 血型鉴定遇到的错误 7.15 测定红细胞免疫抗体的方法 7.16 间接抗球蛋白试验 7.17 直接抗球蛋白试验 7.18 白蛋白加入试验（分层法） 7.19 酶技术 7.20 配血试验8. 实践计划 8.1 进展检查 8.2 制定实践计划 8.3 执行实践计划 练习检查与答案 自我评测答案 词汇表 附录1第一章 本册简介 本章的重点是向你介绍第三册血型血清学。主要内容是血型鉴定和配血试验。学习目标:当您完成本章学习后，您应能： 1.了解本册的目的。2.就学习本册确定一位辅导员。3.联系本书目标评估你目前所掌握的知识技能与经验。4.制定一个切实可行的学习计划。1.1 远程教育项目 第三册：世界卫生组织的艾滋病全球计划中，设立了安全血液和血液制品的远程教育项目。血型血清学是整个远程教育项目的一部分，远程教育是为那些在血站、医院、血库或实验室工作而又较少机会于专业培训的人员而特别设制的。在此系列还包括：n导言分册：安全输血实践指南和原理n第一册：安全献血n第二册：HIV和其他传染性病原的筛检 从导言分册及其他分册中你应该熟悉本远程教育项目的教学方法。如果你还没有阅读过导言分册，你有必要认真去阅读以熟悉教材的内容是怎样设制的。要通过阅读第一节明确教员和辅导员的作用及如何使用本教材，特别是第1.2节（第48页）所描述的以下的几个重点：本册目标章学习目标练习实践应用小结自我评估检查学习效果词汇表附录核查表本册的应用 如果你从事血站、医院的血库或实验室工作，你会发现此书对ABO及Rh血型鉴定及配血试验是很有指导意义的，同时对血液及血浆的挑选和发放也是有帮助的。 如果你是实验室高级技术人员或临床人员，例如医院临床负责人或工作涉及血清学方面的培训及管理人员，此书也是很有帮助的。如您从事培训，本书为你提供最新的资料，能用于你的培训。 第三册中包括了许多新的内容，尽可能认真地阅读每一部分并在有疑问的地方注上记号，然后再重新阅读直到理解为止。如果你仍觉得有困难或难以完成各项计划，可向你的教员、辅导员或资深同事虚心求教，不要害怕提问题，这有助于你的学习及工作。 有些章节你可能会很熟悉，那么就作为复习，仔细地阅读，并回答课后的问题，来检测是否真正掌握，照此做完之后，它能使你知道自己的情况，发现自己不足之处。1.2 学习须知 你可能已经看完导言分册或其他分册，在这期间请与你的教员保持联系以便有机会讨论在阅读中碰到的问题，如果有困难的话，及时与教员联系。 当你根据本书开展工作时，可以确定一个辅导员，比较理想的是你的主管，你们可以定期的碰头，在学习中，给予一定的指导与支持，特别是你在做工作计划时，另外，你也可挑选一位在血液学方面有经验的人来辅导你。练习1 在学习过程中，找一位辅导员，最好是你的质监员或资深技术人员，当遇到问题时可以向他请教，找位能帮助你指导计划完成本书学习的人，这是非常重要的。 确定了指导你的人之后，要请他了解你的学习计划及他在此期间该扮演何种角色，起到何种作用，以便使你顺利地完成本书的学习，请你的辅导员熟悉本书的内容，最好能定期讨论一下学习进程。 如寻找辅导员有困难的话，告诉教员，他将帮你找到合适的人选。 尽管辅导员可能是对你帮助最大的，但有时也不妨与搞同一专业的人士讨论一下。1.3 第3册血型血清学 输血通常作为救命，但有时它会引起不同程度的疾病和死亡。遗憾的是某些由实验室误操作而引起的。在血型鉴定或配血试验过程中出现的错误往往是由于对结果的错误判读或缺乏相应知识而导致的。另外，还可能由于血液或血浆的选择或发放的差错而引起。 因而本册首先是要巩固你在血型血清学方面的知识和技能，从而确保输血的正确性与安全性。 第1章：介绍第3册的大致内容，帮助你对以后的学习做准备。第2章：对全血的成分及其功能作用的概述并了解它们的重要性。第3章：血型免疫学基础主要是关于抗原、抗体、抗体免疫应答和抗原抗体反应。第4章：ABO血型系统在输血中的重要性及血型的基因与遗传。并介绍了A、B红细胞抗原的发育、A亚型抗原及高效价的抗体。 第5章：介绍Rh血型系统在输血中的重要性。阐述Rh系统的遗传学和正确进行Rh D 鉴定和Du抗原检测的重要性。 第6章：在常规与急诊时的配血试验及发血。输血反应的分析，记录保存全血及血浆 的贮存管理。 第7章：血型鉴定及配血试验的技术要点。技术指导，见附表1。 第8章：改进实施计划是本书的最后一部分。在你复习了前面所学的内容之后，以此 为基础，在实验中对照实践。第3册的实践目录在第79页。1.4 学习目标： 当你学完本书之后，以下六个方面是要求掌握的。做自测题，完成练习，制定实践应用计划，应达到下述目标：第二章：掌握血液中主要成分的功能及其在输血中的意义。第三章：红细胞的抗原抗体反应及其影响因素。第四章：掌握ABO血型系统的正反定型，对献血者和患者鉴定。第五章：掌握Rh血型系统。正确输注Rh D（）、（）血，何时需作Du型的检测。第六章：正确掌握交叉配血试验的要领及在常规和急诊时配血、发血的恰当步骤和记录。第七章：掌握血型鉴定、配血试验的原理。同时做到鉴定及交叉配血试验的安全性与准确性。练习2 在你开始第二章的学习时，正确评价关于本册的学习目的。你所掌握的知识、技能和经验最后明确要通过本册的学习所要掌握的内容。仔细地阅读每一条学习目的。1. 高水准的专业素质，技能及经验。2. 较好的专业素质、技能及经验。3. 一般的专业素质、技能及经验。4. 缺乏相应的专业素质、技能及经验。学习目的等级（14）内容第二章掌握血液中主要成分的功能及其在输血中的意义。第三章掌握ABO的抗原抗体反应及其影响因素。第四章掌握ABO血型系统的正反定型，对献血者和患者鉴定。第五章掌握Rh血型系统,正确输注Rh(+)或(-)血液何时需要Du型的检测。第六章 掌握配血试验重要性并建立和维持在常规和急 诊情况下安全申请、选择和发血的恰当步骤和 记录 第七章掌握血型鉴定和配血试验的原理，并进行安全和准确的操作。 本章的目的在以上的表格中已重复，记下你的等级数并在内容栏内填出还需掌握的内容，并在你还不懂的地方写上记号。 你现在要明确的是需要改正的地方乃必须留意地方。当你要学完本册的时候，可以回到前面的学习目标，它是为了帮助你评估你的进展看看是否已掌握。重要的是读完这本书之后，在工作中是否会从中得益。如果你想进一步提高业务水平，就你感兴趣的问题，请教你的辅导员。1.5 学习计划 因为你已学完导言分册或其他分册，你应该可以对学完本册需要多少时间做个估计，有些练习是比较花费时间的，但你还是要设法在日常的工作中抽出时间来完成它。练习3 对本册的其余部分游览一遍，以对全册的内容有个了解，并对其中的实验部分也做到心中有数。试着估计一下完成每个部分所需的时间，包括完成自测题和练习。你还要安排时间与你的辅导员和教员见面,同时还有实验的准备。随后就按照本书的进程，请你的主管安排学习时间。 在第6页填写学习计划，根据你现有的基础、技术、经验估计完成每一部分需要的时间，制定出一个大致的时间表，当你与你的教员和辅导员碰面时，将这份学习计划交给他。总结：1. 本册主要讲述血型鉴定、配血试验及正确发血。2. 当你学习本书时，找一位辅导员指导你的学习。3. 在学习之前，对自己现有的知识、技术、经验要有充分的了解。4. 一份切合实际的学习计划可以帮助你完成本书的学习。进展检查： 在开始第二章的学习前花几分钟回顾一下你是否如第一章要求的已掌握了以下要求的几点:1.熟悉本书的目的。2.找到了指导你学习的辅导员。3.充分估计自己相关的技术水平与经验。4.制定一份合理的学习计划。 如果你觉得以上的要求都做到了，那么就开始第二章，如果你还需要了解更多的东西，可以找你的辅导员把未搞清的问题弄明白。学 习 计 划章节等级（14）计划完成时期会面日期与教员与辅导员第2章血液成分和功能第3章血型免疫学基础第4章ABO血型系统第5章Rh血型系统第6章配血与发血第7章血型鉴定和配血技术第8章实践计划备注 林 苑、朱自严2第2章 血液成分与功能 本章目的是帮助你熟悉全血的各组成部分及它们的功能。学习目标：1. 血液的主要成份。2. 熟悉这些成份的功能及在输血中所起的作用。2.1 全血 血液是一种复合的液体，这种复合液体含有不同的血细胞悬浮于一种黄色的被称为血浆1血浆：血液中的液体部分，携带细胞和其它物质，如蛋白、凝血因子和其它化学物质。的液体中。血细胞由红细胞2红细胞：血细胞中数量最多的一种细胞，含有红色的血红蛋白，主要负责运输氧至机体组织。、白细胞3白细胞：一组有核细胞，涉及抵御感染和产生抗体。和血小板 4血小板：在血液凝固机制中起主要作用的血细胞。组合而成。血浆含有各种蛋白、化学物质、凝血（凝固 5凝固：当血液采集于一个干燥的容器或血液到达开放的创面时，所发生的血液凝块。）因子及众多的新陈代谢物质。 血液是运送各成份至各器官的媒介。2.2 红细胞 在显微镜下，红细胞呈扁盘状，直径7.2微米，每立方毫米血中大约含500万个红细胞（51012/L）。它们在骨髓中生成。成熟的红细胞进入血液其寿命大约为120天，随后被网状内皮系统6网状内皮系统：由网状内皮细胞产生的吞噬细胞或巨噬细胞，它们主要存在于骨髓、肝脏、脾及淋巴组织中。降解清除。这些细胞是高度专一，并分布在全身各组织主要是骨髓、肝、脾及淋巴组织。 红细胞内含有一种物质称血红蛋白7血红蛋白：存在于红细胞内由铁（血红素）和多肽链（珠蛋白）构成呈红色的液体。，其主要功能是为全身各组织携带氧。2.3 血红蛋白 血红蛋白是由含铁血红素，连接球蛋白多肽链构成的一种大分子化合物。血红蛋白在红细胞内呈红色的液体，它有可逆性结合氧及二氧化碳的能力，它的主要功能就是为全身各组织携带氧以提供机体足够的能量与热量。血红蛋白在肺里摄取氧，再通过心脏泵的作用输送至各组织，经过组织的利用，其携带的氧被二氧化碳替换下来，通过红细胞和一小部分血浆再被带回肺部释放出去。在此置换新的氧，并开始另一个循环。 我们用g/L来计量血红蛋白在体内的水平，男性体内血红蛋白平均含量要略高于女性，男性平均在135到170 g/L，女性为120-160g/L(编者注：我国标准为，男120 g/L；女110 g/L)。图1 红细胞的俯视图、侧视图 测量血红蛋白有不同的方法，最好的方法是用比色法或光度法，还有一种较简便粗略的方法：用已知密度的硫酸铜溶液比较比重大小也可测定血红蛋白含量，输血实际工作中这项技术被广泛应用。因为，它适用于电力不足或无电的地方。 在许多国家的血站，血红蛋白的最低标准：男性13.5g/dl，女性12.5g/dl。这一标准是由血液与硫酸铜比较比重所得出的。男性和血液滴出比重为1.055的硫酸铜溶液中，女性的硫酸铜液比重1.053（编者注：我国标准，男1.052；女1.050）。附表1详细介绍了整个硫酸铜溶液的制备过程。在第一册附表5中，则介绍了如何用硫酸铜法来测定血红蛋白量。练习4 在你的单位里，可接受的献血者最低血红蛋白含量是多少并介绍一下你们所用测定血红蛋白的方法。2.4 白细胞 白细胞是一组有核的细胞。包括粒细胞粒细胞：在胞浆中含有嗜中性、嗜碱性或嗜酸性颗粒的一组白细胞。、淋巴细胞淋巴细胞：在淋巴结中形成的一种白细胞。有两类淋巴细胞：B淋巴细胞产生循环抗体，而T淋巴细胞负责细胞免疫应答。、单核细胞单核细胞：一种大的白细胞，可吞噬细菌及其它外来物质。粒细胞可分为中性粒细胞中性粒细胞：白细胞家族中的一员，抵御感染的一组细胞。、嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞：白细胞家族中的一员，抵御感染的一组细胞。、嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞：白细胞家族中的一员，抵御感染的一组细胞。 在通常情况下，粒细胞是由骨髓产生，一小部分的淋巴细胞也是由骨髓产生的，大部分淋巴细胞是由淋巴组织和胸腺产生的，至于单核细胞由哪部分产生目前尚未确定，可能是由网状内皮组织，特别是脾产生的。 正常的循环血液中白细胞的数量远远低于红细胞,正常成人为4000-11000/mmPage: 153。主要的组成是：n 中性粒细胞：1500-7500/ mmPage: 153n 嗜酸粒细胞：0-400/ mmPage: 153n 嗜碱性粒细胞：0-200/ mmPage: 153n 淋巴细胞：1000-4500/ mmPage: 153n 单核细胞：0-800/ mmPage: 153 与红细胞不同，白细胞是有核细胞且平均寿命很短。粒细胞在平均在三至五天，淋巴细胞的寿命还不确定有几天甚至几年，而单核细胞在离开循环系统后寿命只有几天。 白细胞的主要功能是抵御炎症感染；淋巴细胞则在针对外源性抗原及病毒性感染中扮演重要角色；单核细胞的作用主要是清除外源性的物质，如细菌。这一消化清除过程我们称为吞噬吞噬作用：某些白细胞能咽下细菌和其它外来物体的过程。2.5 血小板 血小板要比红细胞、白细胞小很多，正常成人体内含量15万50万/ mmPage: 153。（150500109/L）它对人体凝血机制起着重要作用。它们在人体受伤处释放一种物质结合凝血因子而生成纤维蛋白纤维蛋白：在凝固过程中血栓激活的可溶性纤维蛋白所原的一种纤细的线状蛋白。，纤维蛋白可网住红细胞而产生凝块并防止进一步的出血。如保存适当，血小板可在输血前保存五天。2.6血液凝固血清和血浆 通常当我们将血液放于试管中，血液凝固成半固体的物质，而在半固体周围析出的液体称为血清血清：红细胞凝结后的周围液体。而当血液保存于含有抗凝物质的试管中，细胞不会凝结，并沉于试管底部，此时在不凝结细胞周围的液体称为血浆。 血清是凝固红细胞的上清液。血浆则是抗凝血的上清液。凝血机制 血液的凝血过程是一个相当复杂的过程，内源性凝血途径与外源性凝血途径已经超出了本书解释的范围。简单的说，机体损伤会激发凝血途径，从而经可溶性的纤维蛋白质原纤维蛋白原：血凝过程中的一种物质。转变为纤维蛋白，而形成稳定的血凝块，防止进一步出血。2.7 输血的原因输血或和血制品有几个目的，而需要输血的主要原因有以下三个：n纠正贫血（低血红蛋白）n补充在手术或意外中流失的血液。n补充其他血液成分，如凝血因子。练习5 列出你的血库最近发出的20单位血液输血的原因，什么是最常见的输血原因？你能从记录或询问你同事而获得此信息，如果不能获此信息，记下你的血库以后发出的20单位血液的输血原因。总结1. 全血为红细胞、白细胞、血小板悬浮于血浆中的混合物。2. 红细胞中充满血红蛋白。它们的主要作用是的携带氧至机体组织中。3. 白细胞是由一组有核细胞组成的，粒细胞、淋巴细胞、单核细胞。4. 血小板在凝血机制中起着重要的作用。5. 血液凝固后的上清液为血清，抗凝血中的上清液为血浆。6. 两种方式激活凝血途径。内源性（表面接触）、外源性（组织损伤）。自我测评：1. 红细胞在循环中的平均寿命？2. 血红蛋白的作用是什么？3. 淋巴细胞的作用是什么？4. 输血的三个主要原因？进度检查： 在开始第3章的学习之前，花几分钟想一下你是否达到了学习要求：1. 简述血液的主要成分。2. 解释血液成分的功能及在输血中的作用。 如果你觉得你已完全掌握了以上两点，就可以开始第3章的学习了。如你觉得还有必要再花一点时间去复习尚未掌握的内容，翻回去再仔细阅读一遍，在此之后，如有问题还没弄懂，求助于你的辅导员。 林 苑、朱自严3第3章 血型免疫学基础 本章的目的是使你了解抗原抗体，抗原抗体反应及反应影响因素。这些知识在对本册以后部分的学习是很有帮助的。本章无操作要求。学习目标1. 抗原与抗体的定义。2. 解释初次免疫应答后第二次免疫应答和自然存在的抗体。3. 解释抗原抗体反应及其影响因素。4. 描述红细胞致敏技术与凝集技术的原理。3.1 抗原 当一种物质进入体内并被识为外源性，且引起免疫应答时，此物质称抗原抗原：被机体识别为外来物质，并能刺激免疫系统对其产生反应。，这可能导致产生能和此抗原以某种可见方式发生特异性反应的抗体。3.2 抗体 抗体抗体：个体对外源性蛋白刺激所产生的保护性蛋白，它能识别外来红细胞上的抗原，可引起红细胞在体内凝集和随后溶血。是免疫应答的产物，它以某种可见的方式和抗原起反应。抗体是免疫球蛋白免疫球蛋白：在对抗原的应答反应中由特殊的淋巴细胞合成的抗体分子。，是血浆中的g-球蛋白g-球蛋白：包含抗体分子的一组血清蛋白。，可分成五种IgG、IgM、IgA、IgD、IgE，在本册我们主要IgG与IgM。 抗体是由氨基酸分子通过肽链连接而成的蛋白质，被称为氨基酸链。 IgG有4条链。两条短的称轻链，两条长的称重链，与IgM的十条轻链，十条重链相比这是十分小的，图2显示两种抗体分子的不同。图2：IgG、IgM结构示意图。IgG抗体 73的免疫球蛋白是由IgG组成的，分子量150000。它们很容易通过胎盘,从而可导致新生儿溶血病新生儿溶血病：因母亲抗体通过胎盘攻击胎儿红细胞上的相应抗原而导致的疾病。这种情况发生于母体体内抗体通过胎盘而与婴儿体内具有相应抗原的红细胞反应。 IgG抗体与红细胞在盐水中大多数不能发生凝集凝集：人红细胞团集成块。反应，只能致敏致敏细胞：细胞被抗体包被，但不凝集。或包被红细胞。IgG的平均寿命均为60-70天。IgM抗体 免疫球蛋白中8是由IgM组成的。它们要比IgG大很多，分子量为900000，它不能通过胎盘，因此不会发生新生儿溶血病。它能与红细胞在盐水介质中容易发生凝集反应。平均寿命为10天， IgM抗体在抗原抗体反应中经常激活补体25补体：正常人血清中所存在的一种蛋白，常参与血型反应和涉及免疫失调。，从而更易引起溶血26溶血：红细胞膜的损伤（溶解），并释放出血红蛋白。造成溶血是在补体存在时，溶血性抗体与其相应特异性红细胞抗原之间反应的结果。反应。表1：IgG和IgM抗体的不同之处IgGIgM约占免疫球蛋白总量738分子量150000900000与红细胞在盐水中的凝集否是通过胎盘是否补体活性是是最适反应温度374抗体类型免疫自然形成3.3 抗体免疫应答 当抗体第一次接触外来抗原,称为初次免疫应答27初次抗体应答：机体对外来抗原首次所作出的反应。,进程缓慢,往往需几个月才会出现抗体。 但当第二次接受同样的抗原刺激，抗体产生再次免疫应答28再次抗体应答：当（机体）第二次接触抗原时抗体滴度增高。，此时反应剧烈，有大量的抗体在短时间内产生。初次免疫应答主要产生少量的 IgM，再次免疫应答主要产生 IgG。（见图3）天然抗体与免疫性抗体 观察健康成人的血清，我们发现ABO血型抗体。相反，在新生儿体内没有ABO血型抗体，或者量很少。我们进一步检查1220月的婴儿，会发现适量的抗体已产生。这些抗体并不是经A抗原或B抗原免疫而产生的，这种抗体我们称为天然抗体29天然抗体：血液中出现的一种不知道是何种抗原刺激所产生的抗体。，即没有经过任何抗原的刺激而产生的抗体。我们知道抗体是抗原刺激产生的结果，那么天然抗体又是怎么回事呢？原来，我们在细菌、病毒和许多食物中可以发现非常类似于人AB血型的抗原物质，正是这些抗原侵入机体而产生抗体，通常是 IgM，而血型免疫性抗体通常是IgG，则是接触了外源性红细胞而产生的。这些情况发生在输血过程或妇女在怀孕时胎儿红细胞渗入她的循环中。3.4 红细胞抗原抗体反应 通常在血库中用来检测抗原抗体反应的技术主要是凝集技术和偶然用溶血技术。 凝集试验主要是抗体结合相应的红细胞上的抗原，让红细胞之间形成网络，使红细胞聚集在一起，这一过程有两个阶段：第一抗体结合红细胞上的相应抗原，此阶段不发生凝集只包被、致敏红细胞。第二形成网络发生凝集，继续第一阶段，条件适合时抗体作用发生凝集现象。 IgM抗体分子量大，有十个抗原结合点，它可直接致敏和凝集红细胞。图4显示IgM抗体凝集红细胞。 IgG分子量小，不能直接凝集红细胞，但可包被、致敏。 下面的间接技术可以证实红细胞上有抗体包被或致敏。进而发生抗原抗体反应。1. 应用白蛋白（或其它带电荷的多聚物）。2. 应用抗球蛋白试剂。3. 应用蛋白分解酶。 溶血反应是由一些IgM抗体引起和少量IgG抗体引起由于抗原抗体结合，而激活补体系统从而引起溶血。 溶血反应的发生表明有抗原抗体反应发生和凝集一样，必须记录下来。影响红细胞抗原抗体反应的因素红细胞离子电荷 无论是在体内30体内：发生于身体内部的反应，如自身免疫性溶血性贫血。或体外体外：发生在身体外部的反应，如试管内反应试验。，在正常生理状态下红细胞之间不会相互接触。这是因为红细胞表面都带有负电荷，由于同性相斥，异性相吸，因此红细胞之间不会结合在一起，红细胞之间所保持的间距是很短的。但这已是够防止小分子的IgG连接相邻的红细胞而引起凝集（如图5）。IgM抗体足够大，从而能连接相邻的细胞发生凝集反应。IgG抗体只能致敏或包被抗体。红细胞表面的阴离子是由存在于红细胞膜的神经氨酸生成的，我们把保持其相对距离的斥力称为Zeta电位。温度 不同的抗体有不同的最适反应温度，例如：ABO血型抗体最适反应温度4,Rh抗体最适温度37。pH 大多数抗体的最适pH6.57.5。反应在偏酸偏碱时被抑制。血清和红细胞的新鲜度 要反应结果良好，我们要用新鲜的血清和红细胞。因此，建议使用新鲜配制的红细胞，而不用的血清应保存在-20以下。抗体与抗原比例 抗体与抗原的比例很重要。在相同数量的抗原红细胞时，抗体越多反应越强。因此配红细悬液的浓度很重要，太浓的悬液可能会漏检弱抗体，用于凝集反应最适的细胞浓度2-4。离子强度 配置红细胞悬液的介质离子强度越低，抗原抗体反应越充分，用低离子强度盐水32低离子强度盐水（LISS）：大多数血型抗体的效价在盐水离子强度从正常降至0.2%盐水的葡萄糖溶液时会增高，目前，许多低离子强度盐水溶液已投放市场。，抗球蛋白试验的孵育时间可以减少到15分钟。抗体包被红细胞的凝集 前面15-16页我们介绍过，有三种方法检测抗原抗体反应。用白蛋白 高电荷分子如白蛋白，可以使相邻红细胞更接近，从而使IgG抗体能连接相邻细胞形成凝集，白蛋白不会引起未包被细胞凝集。 有时白蛋白加在试剂中以增强凝集，或用来做白蛋白两步分层试验。在试验中，细胞与血清一起孵育，让抗体包被细胞，加入白蛋白，这些包被细胞发生凝集。（见第7章和附件1）应用抗球蛋白试剂 抗球蛋白试验33抗球蛋白试验：利用抗球蛋白试剂检测致敏于红细胞上的人球蛋白的试验。是用抗球蛋白试剂来检测红细胞上致敏的人球蛋白，分三个阶段：第一阶段：致敏与包被孵育细胞和血清，使血清中的抗体结合到红细胞上。第二阶段：洗涤细胞用大量盐水洗涤数次， 去除未包被的蛋白及免疫球蛋白。第三阶：加入抗球蛋白试剂34抗球蛋白试剂（AHG）：能与人球蛋白起特异性反应的一种血型试剂。如果细胞上包被有IgG抗体或C3，加入抗球蛋白试剂会发生凝集，如果没有抗体包被，则不会发生凝集。 图6显示抗球蛋白血清凝集IgG包被的红细胞，实心抗体为血型抗体分子，而空心抗为抗球蛋白抗体。 抗球蛋白试验在第7章及附录1有更详细地叙述。应用蛋白水解酶： 红细胞上的负电荷使红细胞保持相对距离。这是由细胞表面的神经氨酸产生的，酶35酶：该物质能去除红细胞上某些蛋白或/和化学物质，从而降低红细胞表面的zeta电位而促进细胞凝集，并能使IgG抗体在盐水介质中凝集红细胞。例如木瓜酶和菠萝酶具有去除神经氨酸的作用，从而减少负电荷，它可以使细胞之间更接近，使 IgG抗体能够凝集细胞。 IgM抗体同样可以凝集酶处理细胞，并可增强反应。 提醒：酶处理后可能同时去掉细胞上的某些抗原。因此酶法不能用来检测所有抗体。因此，只能将此视为一个额外技术，不能代替常规方法（盐水、白蛋白和抗球蛋白）。3.5 补体 以前提过,一些抗体可致细胞溶血,这是由于抗原抗体反应激活了复杂的补体系统，而致溶血反应，或被C3致敏。补体是正常人血清中的一种蛋白，这常涉及血型反应和免疫异常。 一些表面包被C3的细胞通过肝脏时会被清除，但另外一些仍留在循环系统中，同样也可用抗球蛋白试验测出。 补体成份不稳定而且易变性，保存中活性下降，56至30分钟可被破坏其活性。 补体激活途径很复杂，但图7显示了其重要的步骤。总结1. 抗原：进入人体后，被识为外源性，并引起免疫反应，并可与抗体形成可见反应。2. 抗体是一种保护性蛋白经外源性的蛋白刺激后产生，可与抗原形成免疫反应。3. 抗体是免疫球蛋白。可分为五种 IgG、IgM、IgA、IgD、IgE。4. 初次接触抗原、抗体产生初次免疫应答，小量的IgM抗体。再次接触同样抗原，主要产生IgG抗体。5. 红细胞凝集第一步，红细胞被抗体包被致敏。第二步发生物理性凝集。6. IgM抗体可致敏和凝集红细胞。7. 红细胞包被的 IgG抗体不会发生凝集，除非应用以下间接技术：nPage: 24白蛋白或其它带电荷多聚体。n抗球蛋白试剂。n蛋白水解酶。8.抗原抗体反应激活补体系统引起溶血反应，或表面包被C3。自我评估：5.初次免疫应答和再次免疫应答有何不同？6.为什么新生儿体内测不出ABO抗体，而在12周之后，未经过任何刺激却可以出现抗体？7.发生凝集的两个步骤？8.简述抗球蛋白试验的各个阶段。进度检查： 在你开始第4章的学习之前，花几分钟时间考虑一下你在第3章的学习中所应掌握的主要内容，主要有：1. 解释抗原和抗体。2. 解释初次免疫反应与再次免疫反应及天然抗体的产生。3. 解释抗原抗体的反应，及影响因素。4. 描述红细胞致敏与凝集反应的技术原理。 如你觉得已掌握了以上4点，就可以开始第4章的学习了，如果你觉得还有疑问，则再花些时间把问题弄清，此外，去请教辅导员或其他资深同事也是很有益处的。 林 苑、朱自严4第4章 ABO血型系统 该章帮助你了解ABO血型系统及它在输血中的重要性。学习目标： 当你完成该章学习后，你应能：1. 解释ABO血型的基础遗传学及运用它判定家系中可能出现的血型。2. 用ABO正、反定型试验结果判定献血者，患者的ABO血型及确定你所在地大概的ABO血型的频率。3. 从细胞和ABO反定型试验结果判定A抗原亚型。4. 解释高效价抗体的重要性。4.1 ABO血型 二十世纪早期，Karl Landsteiner通过一个血样与其他血样的交叉试验有了重大发现。这些血样混合后有些无肉眼可见的反应而另一些反应很强。产生凝集，即红细胞团聚成块（见图8）。 这种凝集被认为是红细胞上的一个抗原与血清中的抗体相互作用的结果。在观察到这种现象后，红细胞上被分为两种抗原一种是A，另一种是B抗原。在ABO血型中，红细胞表面可以同时有这两种抗原，或有一种，或没有。 细胞上只有A抗原的称A型，只有B抗原的称B型，细胞上同时有A和B抗原的称AB型，而缺乏A、B抗原的称O型。 同样，在血清有两种不同的抗体，一种只与带有A抗原细胞反应并使之产生凝集的称抗A。另一种以同样方法只与带有B抗原细胞的被称为抗B。 血清中抗A和抗B的存在与否取决于红细胞上是否有AB抗原（见表2）n 红细胞上有A抗原的A型血清中有抗B。n 红细胞上有B抗原的B型血清中有抗-A。n 红细胞上有A和B抗原的AB型血清中无抗-A和抗-B。n 红细胞上无A和B抗原的O型血清中有抗-A和抗-B。表2细胞上的抗原血清中的抗体A型A抗BB型B抗AAB型A和B没有O型没有抗-AB练习6 完成第一张表中抗A与抗B和A、B、O、AB红细胞的反应，用 + 表示凝集反应，用 - 表示不凝集。 完成第二张表中A、B、AB、O血型的血清与A、B、O细胞的反应。用+表示凝集，用-表示不凝集。答案见P84。4.2 ABO血型的遗传基础 所有的性状与特征都是由活性细胞核中的基因 基因：染色体上所带的遗传基本单位。所控制，这些基因在染色体 染色体：一种螺旋状带有基因的结构，它们存在于体细胞核内。上，每人有23对染色体总46条。我们从双亲的染色体各获得一半的遗传基因。 不象有核体细胞，我们的遗传细胞（精子 精子：男性的生殖细胞。和卵子 卵子：妇女生殖的卵细胞。）只有单条染色体，当受精时，这些结合的一对活性细胞形成胚胎。在我们的遗传特性中有一个决定ABO血型的基因。我们遗传的是二个血型基因，一个是从母亲那儿来的A、B或O基因。同样，另一个基因来自父亲的A、B或O基因。 在血型中二个概念是重要的：一个是：基因型，从双亲染色体上所遗传下来的基因。一个是：表型，所观察到的遗传基因，即血型本身。 A和B基因对于O基因来说是显性基因，因此表型为A的个体基因型可能是AA或AO 。同样，表型为B的个体基因可能是BB或BO，表3为可能的基因组合与它们的表型。表3基因型血型（表型）AAAAOABBBBOBABABOOO 图9为一ABO 血型家系，你将看到母亲是A型（AO），父亲是B型（BO），其子女的ABO基因型可以是AB（AB型）、AO（A型）、BO（B型）或OO（O型）。练习7 下列给出的是父母可能的基因型，请给出其子女可能的基因型和血型：1. 母亲：O型；父亲：AB型。2. 母亲：BO型；父亲：BO型。3. 母亲：O型；父亲：BO型。答案见P84-85。4.3 ABO血型鉴定 抗A与只与A抗原反应同样，抗B只与B抗原反应，因此，若你用抗B和抗A与红细胞反应便可知红细胞上是否有A和B抗原。用这两种试剂便可决定ABO血型。 单凭测定红细胞你还不能完全确定血型，它只告诉你一半，还需用已知的A和B型细胞对血清进行反定型试验 反定型试验：一种从血清或血浆中检出ABO抗体的试验。 如我们所知，血清中的抗体与细胞上的抗原的存在与否紧密相关：A型人血清中有抗B，B型人血清中有抗A，因此完整的ABO鉴定应该是细胞与血清二组试验，该二组试验再相互复检。例如：若你的试验中红细胞上有A抗原，血清中有抗B抗体，你将完全确信这次鉴定是正确的，而当试验是细胞上有B抗原，血清中有抗B抗体，你必须从正定型和反定型中去查找错在何处。整个试验也必须复做。练习8 下列给出的是正、反定型的结果，请给出他们的血型。答案见P85。细胞正定型血清反定型抗-A 抗-BA细胞 B细胞血型1+ - +2- -+ +3+ +- -4- -+ +5- + -6- -+ +7+ +- -8+ - +9- + -10+ - + 不同人种中每个血型的百分比，表4所示为ABO血型。表4不同人种ABO血型的百分比频率血型白种人黑人东方人A402728B112027O454940AB445练习9 观察一百例血型鉴定的结果并记录A、B、AB、O型血的百分比。你的结果与表4的结果比较。对比你的结果，并请与你的同事讨论，是否这结果符合你本地区的实际。当血清鉴定时用O细胞。 要用O细胞来进行血清反定型是因为有些献血者血清中存在抗A或抗B以外的抗体。这些抗体不是自然所期望存在的，因此称之为“不规则抗体”（编者注：“不规则抗体”-irregular antibodies为老的称呼，现AABB血站标准等多改称为：“意外抗体”-unexpected antibodies）。它们的成因可能是免疫，或妇女的妊娠或通过不当的输血。用O细胞可在你的试验过程中证实是否有不规则抗体的存在。4.4 A和B红细胞抗原的发育 在胚胎早期A和B抗原就开始产生，到出生时它们比成人的要弱，与抗-A和抗-B的反应也比成人弱。 出生时，正常的抗-A和抗-B在新生儿较弱，到三个月时，反应基本上与成人的一样，这也是新生儿血样本只作红细胞正定型的原因。4.5 A抗原的亚型 1911年当发现A型在血清学和遗传学上可分为A1和A2两种亚型时，认识到ABO系统要复杂的多，同样AB型可分为A1B和A2B。 在白人中大约80的A型人为 A1亚型，余下的20是A2。AB型也同样适用以上的百分比率。 从发现 A1和A2后，许多不同的A亚型相继被发现。目前已有12个。他们都有不同的血清学及化学特征。 A2和A2B的人血清中有可能有抗A1, 但通常很弱, 在献血者筛选和输血中意义不大。B抗原的弱形式很少，但中国人中有，图10总结了A抗原的亚型。图10 A抗原亚型的总结A亚型亚型频率通常存在的抗体有时存在的抗体A180抗-B无A220抗-B抗-A1在2血样中A1B80无无A2B20无抗-A1在25血样中4.6 抗AB和抗A抗AB 常用抗AB来确认弱A和B抗原，作为标准鉴定试验的一部分，来防止常规鉴定中的漏检。这种抗-A和抗-B的混合物与弱A和B抗原亲和力强，会发生强反应，尽管与特异性的抗A和抗B此时不发生反应，抗AB在患者的红细胞鉴定中不需要。但建议用于献血者鉴定。抗-A 抗-A有两种抗体混合而成。n 抗A凝集 A1、A2、A1B和A2B细胞。n 抗A1仅仅凝集A1和A1B细胞。 抗与A2细胞混合分离两种抗体，留在吸收血清中的为抗A1。图11显示抗A、抗AB、抗 A1的血清学反应。图11抗A