蒽酮比色法测总糖.doc

实验一 脂肪酸价的测定酸价的测定：滴定法。利用酸碱中和反应，测出脂肪中游离酸的含量。油脂的酸价以中和1克脂肪中游离酸所消耗的氢氧化钾的毫克数表示。三、材料、试剂与仪器材料：油脂。仪器：碘量瓶250mL、量筒、移液管、容量瓶（ 100、1000mL）、滴瓶、烧瓶、碱式滴定管、锥形瓶（250mL）、试剂瓶、称量瓶、天平试剂：1、0.001mol/L Na2S2O3：2、氯仿（三氯甲烷）-冰乙酸混合液：取氯仿40mL加冰乙酸60mL，混匀；3、饱和碘化钾溶液：4、0.5%淀粉指示剂：5、0.001mol/L氢氧化钾（或氢氧化钠）标准溶液；6、中性乙醚95%乙醇（2:1）混合溶剂：7、1%酚酞乙醇溶液所用试剂为国产分析纯。四、操作步骤（一）过氧化值的测定1、称取混合均匀的油样2.00g（精确到0.01g）置于干燥的碘量瓶底部，加入20mL氯仿-冰乙酸混合液，轻轻摇动充分混合；2、加入2mL饱和碘化钾溶液，加塞后摇匀，在暗处放置5min；3、取出碘量瓶，立即加入50mL蒸馏水，充分混合后，立即用0.001mol/L Na2S2O3标准溶液滴定至水层呈浅黄色时，加入1mL淀粉指示剂，继续滴定至蓝色消失为止，记下体积V1，并计算POV。4、同时做不加油样的空白试验，记下体积V2。（二）酸价的测定1、称取均匀的油样1.00g（精确到0.01g），注入锥形瓶；2加入中性乙醚-乙醇溶液20mL，小心旋转摇动，使油样完全溶解；3加23滴酚酞指示剂，用0.001mol/L碱液滴定至出现微红色并在30s内不消失，记下消耗碱液的毫升数（V），并计算酸价。 五、结果计算（一）过氧化值（POV）的计算用过氧化物氧的毫克当量数表示时，可按下式计算 POV（mmol过氧化物/kg 油) = (V1V2)C1000/W式中：V1油样用去的Na2S2O3溶液体积（mL） V2空白试验用去的Na2S2O3溶液体积（mL） CNa2S2O3溶液的摩尔浓度（mol/L） W油样重（g）（二）酸价的计算以酸价（AV）表示 按下列公式计算 AV（mg KOH /g 油）=V C56.1 /W式中 ： V滴定时消耗的氢氧化钾溶液体积（mL） C氢氧化钾溶液的摩尔浓度（mol/L） 56.1氢氧化钾的毫摩尔质量 W油样重（g）六、注意事项1、测定POV：（1）加入碘化钾后，静置时间长短以及加水量多少，对测定结果均有影响。（2）过氧化值过低时，可改用0.005 mol/L Na2S2O3标准溶液进行滴定。2、测定酸价：（1）测定蓖麻油时，只用中性乙醇而不用混合溶剂。（2）测定深色油的酸价，可减少试样用量，或适当增加混合溶剂的用量，以百里酚酞或麝香草酚酞作指示剂，以使测定终点的变色明显。（3）滴定过程中如出现混浊或分层，表明由碱液带进水过多，乙醇量不足以使乙醚与碱溶液互溶。一旦出现此现象，可补加95%的乙醇，促使均一相体系的形成。实验二 总糖的测定蒽酮比色法一、目的：1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。二、原理：糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收，在150 g/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 g左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1)葡萄糖标准液：l00 g/ml(2)浓硫酸(3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用。3.材料：甜糜秸秆四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1234567葡萄糖标准液（ml） 00.10.20.30.40.60.8蒸馏水（ml）10.90.80.70.60.40.2葡萄糖含量（g）0102030406080在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（g）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。2.植物样品中可溶性糖的提取：将样品剪碎至2 mm以下，105 C烘干至恒重，精确称取15 g，置于50 ml三角瓶中，加沸水25 m1，加盖，超声提取10 min，冷却后过滤（抽滤），残渣用沸蒸馏水反复洗涤并过滤（抽滤），滤液收集在50 m1容量瓶中，定容至刻度，得提取液。3.稀释：吸取提取液2 m1，置于另一50 m1容量瓶中，以蒸馏水稀释定容，摇匀。4.测定吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A620平均值在标准曲线上查出葡萄糖的含量（g）。五、结果处理 C V总 D样品含糖量（%）= 100 W V测 106其中：C在标准曲线上查出的糖含量（g），V总提取液总体积（ml），V测测定时取用体积（ml），D稀释倍数，W样品重量（g），106样品重量单位由g换算成g的倍数六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外