培 养 基 配 制.doc

培 养 基 配 制1) 血平板：5%脱纤维绵羊血琼脂平板。英国Oxoid公司哥伦比亚琼脂（或TSA琼脂或脑心浸液琼脂）加热溶化后，高温高压灭菌，用时冷却至500C左右，加入无菌5-10%脱纤维绵羊血，充分轻摇混匀后，倾制平板，血平板厚4mm。2) 巧克力平板：应用马血或兔血制备，市售哥伦比亚琼脂热溶化后，高温高压灭菌，约在800C左右加入无菌血液配成5-10%，摇匀后置800C左右水浴中维持15分钟，使之成为巧克力色，絮状，取出冷却至500C左右倾制平板。因其中含有X和V因子，嗜血杆菌、奈瑟氏菌等生长良好。若用绵羊血制备，则要加入X、V因子添加剂（按产品操作说明）。3) 庆大霉素血平板：（分离肺炎链球菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL绵羊血12.5mL庆大霉素0.5mL附：庆大霉素配法：4万单位+16mL水=2.5mg/mL1万单位（u）=10mg 4万单位=40mg4) 杆菌肽巧克力平板：（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂250mL兔血（马血）12.5mL杆菌肽lmL附：杆菌肽配制：1.含760mg杆菌肽加10mL灭菌水。2. 250mL兔血巧克力加入1mL(76mg/mL)杆菌肽。杆菌肽最终浓度：0.3mg/mL(300mg/L)5) 万古霉素巧克力平板（分离流感嗜血杆菌培养基）哥伦比亚琼脂 250mL兔血（马血） 12.5mL万古霉素 1.0mL (5mg/250mL)附：万古霉素配制法：（去甲万古霉素400mg/瓶，相当500mg/瓶万古霉素，分装80支） 一瓶400mg去甲万古霉素加0.85NaCl 10mL=50mg/mL 1mL万古霉素（50mg/mL）加0.85NaCl 9mL=5mg/mL6) 高盐甘露醇琼脂：（分离金黄色葡萄球菌培养基）蛋白胨10g 牛肉浸膏1g氯化钠7g 琼脂15g水 1000mL 甘露醇10g0.2%酚红25mL 煮溶后调pH7.4，冷却用大试管倾倒斜面保存。7) 吕氏血清培养基：（分离白喉棒状杆菌用）1. 1%葡萄糖肉汤（pH 7.6）100mL2. 无菌动物血清（牛、羊、猪）300mL肉汤与动物血清混合，分装于无菌试管，每管5mL，在血清凝固器或流动蒸汽灭菌器内灭菌制成斜面。灭菌方法：第一天：800C1小时第二天：850C1小时，于370C过夜第三天：900C1小时，于370C过夜8) 亚碲酸钾琼脂：（分离白喉棒状杆菌用）1 pH7.6肉汤琼脂100mL2 10%葡萄糖肉液2mL3 1%亚碲酸钾溶液 4.5mL4 0.5%胱氨酸水溶液1mL5 脱纤维绵羊血 510mL先将肉浸汤琼脂溶化后，待冷至500C左右，无菌加入已灭菌的葡萄糖，亚碲酸钾和胱氨酸溶液、血液混匀后倾注平板。9) 气管分泌物标本运送培养基（Transportation medium）TSB大豆培养基 3g 葡萄糖 0.5g 脱脂奶粉 2g 甘油 10mL 蒸馏水 100mL 先将1、2项加入温水中煮溶后，再加脱脂奶粉，摇匀，再煮沸，最后滴加甘油，每管1.0-1.5mL分装进塑料小管。10) 大便转送培养基甘油盐水保存液：无水磷酸氢二钾 3.1g 无水磷酸二氢钾 1g 氯化钠 4.2g 甘油 300mL 0.1%酚红溶液 10mL 蒸馏水 700mL先将盐类溶于蒸馏水中，加入甘油，充分混匀。调pH7.2，再加入酚红。每管4mL分装于大试管中， 1210C15分钟灭菌后备用。磷酸盐缓冲盐水（PBS）（小肠结炎耶尔森氏菌标本冷增菌）Na2HPO4 8.23g Na2HPO4H2O 20g氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL将上述成分溶于蒸馏水中，调pH7.6，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。改良磷酸盐缓冲盐水（SB）在1000mLPBS中加入山梨醇10g，胆盐1.5g，溶解后，每管10mL分装，高压1210C15分钟，置于冰箱备用。霍乱弧菌增菌转送培养基采用杭州天和生物制品有限公司碱性蛋白胨水运送培养基。按产品说明书溶解后，调节pH8.6，分装每支810ML。加入适量甲酚红着色，便于与大便肛管识别。空肠弯肠菌转送培养基采用杭州天和生物制品有限公司Cary-Blair运送培养基（C-B培养基）。按产品说明配制，分装5mL/支，高温高压灭菌后备用。增菌肉汤肛管采用杭州天和生物制品有限公司增菌肉汤，按产品说明书配制分装成3Ml/支，用棉花肛管做塞，高温高压灭菌后备用。11) 庖肉培养基： 牛肉 500g 葡萄糖 2g 蛋白胨 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 2000mL混匀后煮沸30分钟，冷却用18180mm试管分装，加牛肉至6cm，加肉汤至8cm，再加入融化的白凡士林至10cm，12115min灭菌，冷却置冰箱备用。12) 中药微量培养基（金钱草培养基）： 取10%金钱草煮沸1小时后，过滤取滤液配成1%琼脂，用时每2mL加入2滴吐温80。13) 苯丙氨酸脱氨酶试验培养基： DL-苯丙氨酸 0.2g 酵母浸膏 0.3g Na2HPO4 0.1g(或Na2HPO412H2O 0.33g) 氯化钠 0.5g 琼脂 1.2g 蒸馏水 100mL加热融化后，校正PH7.4分装每管1.8-2mL，12115min灭菌，倾成斜面。14) MIU（动力靛基质尿素）试验培养基：胰胨 1g（或蛋白胨2g） 葡萄糖 0.2gKH2PO4 0.2g NaCl 0.5g琼脂 0.4g 蒸馏水 100mL调PH至6.8，12115min灭菌，加入0.2甲酚红0.6mL，再加入20无菌尿素（用滤器除菌）10mL，分装，22.5mL/支。20尿素制备：2g尿素，加入少许蒸馏水溶解，隔水煮沸1015min。15) 葡萄糖酸盐利用试验试剂（班氏试剂） CuSO4.5H2O 2.5g（先用少量蒸馏水溶解）枸橼酸钠 10.6g 无水Na2CO3 6.3g+用少量蒸馏水溶解，再加入，最后定容至250mL。16) 靛基质试验试剂：对二甲氨基苯甲醛 2.5g；戊醇或丁醇 3.75mL。徐徐加入浓盐酸12.5mL。方法：被检菌接种于胰蛋白胨水，35孵育1618小时，滴加试剂于培养物上，红色为阳性，黄色为阴性。17) 葡萄糖酸盐培养基蛋白胨 1.5g 酵母浸膏 1g 磷酸氢二钾 1g 葡萄糖酸钾 40g（或葡萄糖酸钠37.25g） 蒸馏水 1000mL上述成分溶解、过滤，校正pH6.5，分装2.0mL/支，高压灭菌11515min冷却，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。 18) 枸橼酸盐培养基采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装1.8mL/支，高温高压灭菌后倾成斜面，取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。19) KIA培养基：采用英国OXOID公司成品琼脂粉，按说明配制，分装成4.5 mL/支、高温高压灭菌后倾成斜面。取标准菌株作对照，合格后置冰箱备用。20）老玉米吐温-80培养基采用杭州天和生物制品有限公司老玉米粉琼脂培养基，按产品说明书配制分装成5mL/支，高温高压灭菌后备用。用时取一支培养基煮溶后用滴管加入3滴吐温-80混匀，用前以白色念珠菌作对照。配制培养基添加成份1) 嗜血杆菌药敏琼脂（HTM）培养基添加成份：SR0158E,每支用灭菌蒸馏水或生理盐水2mL溶解后，1支可加入500mL琼脂中。（可1mL添加剂/300mL琼脂）。2) 空肠弯曲菌（CCDA）培养基添加成份：SR155E，每支用灭菌蒸馏水2mL溶解后，1支可加入500mL琼脂中。（可1mL添加剂/300mL琼脂）。3) 沙保罗氏（SDA）培养基添加成份：30