垂吊矮牵牛的组织培养陆.doc

陆燕：垂吊矮牵牛的组织培养垂吊矮牵牛的组织培养陆燕（甘肃农业大学生命科学技术学院生物制品专业，甘肃 兰州，730070）摘要：研究了不同浓度配比的NAA,6-BA对垂吊矮牵牛组织培养过程中愈伤组织增殖,芽分化和生根的影响。结果表明: MS+NAA0.2mg/L+6-BA1.0mg/L培养基对愈伤组织增殖效果最好;最佳的分化培养基MS+6-BA1.0+NAA0.5;而生根的培养基可选1/ 2MS+NAA1.0关键词:垂吊矮牵牛;植物组织培养;NAA;6-BATissue Culture of Petunia hybridaLU Yan(Major in biology in the College of of Gansu Agricultural University,Gansu Lanzhou,730070)Abstract: The effects of different concentration NAA and 6-BA on callus proliferation ,bud initiation and striking root of Petunia in tissue culture are analyzed in this paper. The result showed that:MS medium suppaimented with 0.2mg/L NAA and 3.0mg/L 6-BA had the best effect on callus growth ;the preferable media is MS medium supplemented with 1. 01.5mg/L 6-BA and 0.30.5mg/L NAA and the preferable medium of rooting is 1/2MS medium supplemented with 0.51.0mg/L NAAKey words: Petunia hybrida;plant tissue culture;NAA;6-BA前言矮牵牛(Petunia hybrida)又名碧冬茄,为茄科一、二年生草本花卉;早春及初夏开花不断,花团锦簇,颜色丰富多彩,是常用的花坛布置或盆栽室内装饰布置、立体装饰花卉。随着城市绿化中使用花卉的比重越来越大,因矮牵牛具有良好的装饰效果及栽培管理较为粗放等特点,使其备受人们的青睐,市场需求量持续上升。矮牵牛的常规繁殖采用种子繁殖或扦插。但用种子繁殖,其后代性状易分离退化;使用扦插法繁殖系数低、出苗不整齐。而组织培养以其繁殖系数大、繁殖周期短、成本较低、可周年进行生产等优点,弥补了常规繁殖的不足,能在较短的时间内生产量多、质优的苗木,满足市场的需要。因此,选择适宜的培养条件进行矮牵牛的组织培养研究,对推动其组培的产业化,达到苗木生产的快速、经济的目的具有非常重要的意义。一、材料与方法（一）材料垂吊矮牵牛植株从花卉市场购买，试验时尽量选用生长健壮、干净无病虫害的幼嫩叶片作为试验材料。 （二）方法1、外植体制备 取生长健壮、洁净且无病虫害的厚实肥壮的垂吊矮牵牛幼叶, 用自来水冲洗6小时, 然后转移到超净净工作台，用75%的酒精浸泡15s，用无菌水冲洗3次。再用0.1%升汞液处理5min，并用无菌水冲洗3次，无菌吸水纸吸干，然后切割成8mm8mm 的叶块。2、培养基配置2.1 愈伤组织培养基的配置培养基编号6-BA浓度NAA浓度11.0mg/L0.2mg/L22.0mg/L0.2mg/L33.0mg/L0.2mg/L41.0mg/L0.3mg/L52.0mg/L0.3mg/L63.0mg/L0.3mg/l上述培养基均以MS为基本培养基, 培养基中蔗糖含量为3%, 琼脂含量为0.8%, pH值为5.8-5.9。通过利用6-BA和NAA两种激素的浓度不同来配置垂吊矮牵牛愈伤组织的诱导培养基。2.2 芽增殖培养基的配置利用不同激素种类对芽进行增殖，将诱导阶段中得到的芽体转接到分化增殖培养基中,在不同的培养基中重复两次，观察其生长。（1）、1/2MS（3）、1/2MS+6-BA1mg/L（2）、1/2MS+kt1mg/L2.3 生根培养基的配置(1)1/2MS+NAA0.05mg/L(2)1/2MS+IBA0.05mg/L(3)1/2MS+C3、培养条件 培养在251的恒温光照培养箱里。二、 结果与分析（一）不同浓度的NAA、6-BA对矮牵牛愈伤组织增殖的影响接种后，第七天的时候进行观察时发现，培养在1、2号培养基上的外植体没有明显的变化，大小还是接种时的大小，而且部分黄化。培养在3、4、5、6号培养基上的外植体出现膨大,切口周围出现浅绿色的愈伤组织，且叶片整体变厚呈拱形弯曲。经过进一步观察发现3、4号培养基中的愈伤组织块弯曲程度较5、6号中的大。15天左右后，1、2号培养基上的外植体仍没有生长，在3、4号培养基中的愈伤组织块其体积继续增大，颜色呈深绿色，且叶片较紧实，出现少量的芽点。5、6号培养基中的愈伤组织块体积增大颜色呈深绿色，但叶片较松软，没有芽点出现。具体见表一。表一 不同浓度的NAA、6-BA对矮牵牛愈伤组织增殖的影响培养基序号叶片总数愈伤组织数7天后生长表现16天后生长表现1块长成愈伤组织没有明显生长且大部分黄化2块长成愈伤组织没有明显生长且部分黄化3块长成愈伤组织愈伤组织增大，深绿色，结构紧实，有少量绿色芽点4块长成愈伤组织愈伤组织增大，深绿色，结构较紧，有出现芽点的趋势5块长成愈伤组织愈伤组织增大，深绿色，结构松软，没有芽点6块长成愈伤组织愈伤组织增大，颜色较浅，结构松软，没有芽点由表一可知，在不同激素浓度以及配比不同的条件下，愈伤组织的生长以及芽点的长势都各不相同。在外植体接种16天后，外植体在1和2号培养基上均逐渐黄化，切片边缘基本未出现愈伤组织；在3和4号培养基上，外植体周围形成大量的愈伤组织，且在3号培养基上最先出现淡绿色芽点，如图1；在5、6号培养基上，外植体周围形成大量愈伤组织，但愈伤组织结构不紧实且未出现淡绿色的芽点。上述结果表明，当6-BA浓度为2.0mg/L时，NAA浓度为0.3mg/L时，即垂吊矮牵牛在3号培养基中诱导愈伤组织时效果最好，且利于丛生芽的形成，从而可大大缩短组织培养的时间。图1 叶片16天后在3号培养基上的生长状况图2 叶片25天后在3号培养基上的生长状况图3 叶片16天后在6号培养基上的生长状况图4 叶片25天后在6号培养基上的生长状况三、结论经过试验发现，垂吊矮牵牛是比较容易进行愈伤组织诱导丛生芽分化和生根的一类植物。在愈伤组织诱导增殖时要考虑不能使用过高的6-BA,否则会造成愈伤组织生长过于旺盛,使其质地疏松。有研究指出,只有致密型结构的愈伤组织才能诱导器官的发生。因此在愈伤组织增殖中,6-BA的浓度最好不能高于2mg/l,使增殖产生的愈伤组织能以致密型结构为主;而在丛生芽诱导分化阶段时,应该注意6-BA过高后造成的苗生长矮小、粗大,变异多的现象,同样也要注意到NAA添加过多后,造成的苗生长细长、弱小,最终给组培苗的良好生长带来不利的影响;在苗生根阶段,三种培养基效果都还可以,但应适当提高NAA的浓度,采用NAA0.51.0mg/l,使长出的根粗壮。（1） 在试验范围内，垂吊矮牵牛叶片诱导愈伤组织的最佳培养基是3号培养基，即MS+NAA0.2mg/L+6-BA3mg/L的培养基。四、参考文献l吴林森.探讨不同浓度的外源激素对矮牵牛组织培养的影响J.山东林业科技,2005(1):9-l0.2崔广荣,梁继田,崔海.重瓣矮牵牛叶片的组织培养J.特产研究,2004(3):20-23.3任旭琴.矮牵牛组织快繁试验研究J.淮阴工学院学报,2004(5):84-85.4陶妹英,贾彩红,徐碧玉.直接诱导不定芽的矮牵牛再生体系的建立J.中国农学通报,2006(6):62-65.5崔广荣,叶选怡,刘跃成,等.激素种类及其浓度对矮牵牛试管苗增殖及生根率的影响J.武汉植物学研究,2005,23(4):389-392.6张颖,罗凤霞,曾会明,等.3个香型矮牵牛品种的组织培养再生体系J.沈阳农业大学学报,2005,36(4):424-427.附录