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荧光素标记抗体技术(一)原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧光灯源紫外线或兰紫光激发下产生黄绿色荧光，通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析可对相应抗原进行定性、定位或定量的检测。(二)操作步骤将纯化的IgG抗体对PH99.5碳酸盐缓冲液透析过夜，透析后抗体液移入小烧杯中称取适量IFTC，加入二甲亚砜(DMSO)(FITC1mg/1ml DMSO)使终浓度为1mgFITC1mlDMSOFITCIgG比例:如IgG浓度为1mgml，FITCIgG比例约为50gFITCmgIgG；如IgG为510mgml，则比例为25gFITCml IgG在10ml小烧杯中先放入抗体按上述比例将FITC-DMSO溶液逐滴加入透析后的抗体溶液中将标记物用PBS加至2.5ml，磁力搅拌器室温下避光搅拌2h用PD10柱(Sephadex G25柱)除去游离荧光素，先用25ml PBS淋洗G25柱收集PBS洗脱第一个荧光素结合蛋白峰，测定FP比值。第二个荧光素峰为游离荧光素计算:2.87A495FPA280-0.35A495合适的FP值为24。(三)试剂器材1.纯化的多克隆抗体或单克隆抗体。2.FITC(Fluorescein-5-Lsothiocyanalte)或其它荧光色素。3.PBS、DMSO4.PH99.5碳酸盐缓冲液: Na2CO34.3g，NaHCO3 8.6g加蒸馏水至500ml。5.PD10柱(Sephadex G25柱)6. 磁力搅拌器，紫外分光光度计等(四)注意事项1.FITC保存于4暗处，使用前待试剂瓶升至室温时开盖称
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