AGP柱的使用说明.doc

CHIRAL-AGP 100.4操作说明安装AGP100.4出货溶剂为15%异丙醇蒸馏水溶液。首先用蒸馏水冲洗，开始流速较低，然后慢慢增加到0.5ml/min，并维持2mins，随后流速增加到0.8-0.9ml/min时保持10min，使用流动相平衡色谱柱，推荐流速为0.8-0.9ml/min。为了保护分析柱不被高亲和力和颗粒杂质污染，推荐使用保护柱，且必须定期更换保护柱，否则将影响分析柱的性能，用于生物分析时尤为重要。保存色谱柱室温保存。使用时，可以在色谱系统中过夜。但是当缓冲盐中没有有机改性剂，或者有机溶液中含有低浓度乙腈时，必须非常小心，因为在这样的流动相中微生物生长迅速。所以流动相必须现场配制。周末或者短期保存，可将色谱柱置于10%异丙醇的蒸馏水中。长时间的保存，请保存在15%的异丙醇蒸馏水中，使用前，请重复操作上面的安装步骤。流动相组成缓冲液使用不同种类的缓冲液能得到最好的分离效果，比如：磷酸钠或磷酸钾缓冲液，乙酸铵或乙酸钠缓冲液，甲酸甲酯或柠檬酸缓冲液。推荐浓度范围0.01-0.1M，正常：10-20mM。pH色谱柱pH范围：4-7，pH值长时间的大于7或者小于4，都可能缩短色谱柱寿命，导致二氧化硅分解。有机改性剂推荐使用下列有机改性剂：1-丙醇，异丙醇，甲醇，乙醇和乙腈，丙醇和异丙醇及乙腈是使用最频繁的有机改性剂。无电荷改进剂的类别和浓度对分离因子的影响很大。如：1-丙醇，异丙醇和乙腈在异构体选择性方面有很大的不同，见方法开发部分。使用阳离子和阴离子改性剂也能调整保留时间和异构体选择性。但是，由于对基体的高亲和力，有些改性剂很难全部洗脱，这样，可能影响色谱柱的性能。我们推荐使用无电荷的、阴离子的、阳离子的改性剂。室温范围20-25，但是色谱柱也能在高于或低于该温度下使用，然而当色谱柱使用温度过高时，对所有硅胶基色谱柱，都将缩短色谱柱寿命。样品当进样针体积为10-20L时，推荐的样品浓度低于0.10mg/ml，如果可能，将样品溶解在流动相中，如果样品在流动相溶解性不好，加一些高浓度的有机溶剂改性剂，但是有机改性剂的浓度太高，小心引起缓冲盐析出沉淀。避免将样品溶在有机溶剂中。不要注射不干净的样品或者样品中包含有未溶解化合物。在生物分析过程中，使用分离技术过滤样品溶液，定期更换保护柱。清洗色谱柱如果色谱柱被疏水性原料污染了，将色谱柱反过来（不接检测器），用25%的异丙醇蒸馏水溶液冲洗一个晚上，流速0.2ml/min。方法开发（UV检测器）样品特征和最初的流动相化合物类型最初流动相疏水性化合物10mM醋酸铵或醋酸钠缓冲液，pH4.5亲水胺，弱酸（苯酚等），非质子类（胺，酯，醇等）5%的异丙醇10mM磷酸钠缓冲液，pH7.0强酸（羧酸）10mM磷酸钠缓冲液，pH7.0如果化合物包含一些官能团，按照质子官能团确定使用下列哪种方法疏水性胺：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性，低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂的优化。逐渐增加pH值，用异丙醇调整保留时间， 检测另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 测试低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。pH降低至4，或增加异丙醇。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇测试不同的无质子改进剂：异丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。 测试低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。亲水性胺，弱酸，非质子化合物：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性，低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。降低异丙醇的浓度。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 胺：检测低浓度质子改进剂：辛酸1-20mM；己酸或庚酸1-20mM；四乙基胺或四丙基胺1-5mM。pH值逐渐减低，增加异丙醇的浓度。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇见疏水性胺的操作流程强酸（如羧酸）：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性，低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。降低pH值，增加缓冲盐浓度到50-75mM（最高浓度100mM） 试试低浓度（1-5mM）质子改进剂DMOA（N，N-二甲基辛胺）添加异丙醇 检测不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇检测不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 试试低浓度（1-5mM）质子改进剂DMOA（N，N-二甲基辛胺）AGP方法开发（MS检测器）样品特征和最初的流动相化合物类型最初流动相疏水性化合物10mM醋酸铵缓冲液，pH4.5亲水胺，弱酸（苯酚等），非质子类（胺，酯，醇等）5%异丙醇的10mM醋酸铵缓冲液，pH7.0强酸（羧酸）10mM醋酸铵缓冲液，pH7.0如果化合物包含一些官能团，按照质子官能团确定使用下列哪种方法疏水性胺：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性异构体选择性低或没有，保留时间低异构体选择性和保留时间都高保留时间高，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂的优化。逐渐增加pH值，用异丙醇调整保留时间，（浓度越低，选择性越高） 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 测试低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mMpH降低至4，或增加异丙醇。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇测试不同的无质子改进剂：异丙醇，乙腈，甲醇，丙醇，乙醇。 测试低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mM亲水性胺，弱酸，非质子化合物：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性，低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。降低异丙醇的浓度。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 胺：检测低浓度挥发性质子改进剂：TEA（三乙基胺）1-20mMpH值逐渐减低，增加异丙醇的浓度。 测试另一中无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇见疏水性胺的操作流程强酸（如羧酸）：根据最初流动相得到的结果，请按下列流程保留时间和异构体选择性没有或低异构体选择性，低保留时间异构体选择性和保留时间都高高保留时间，无异构体选择性pH值或无电荷改进剂或缓冲盐的优化。降低pH值，增加缓冲盐浓度到50-75mM（最高浓度100mM） 测试低浓度挥发性质子改进剂添加异丙醇 测试不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇测试不同的无质子改进剂：乙腈，甲醇，丙醇，乙醇 测试低浓度挥发性质子改进剂保护柱的使用为了保护分析柱不被高亲和力和颗粒杂质污染，推荐使用保护柱，且必须定期更换保护柱，否则将影响分析柱的性能，用于生物分析时尤为重要。CHIRAL-AGP，CHIRAL-CBH，CHIRAL-HSA，均能提供保护柱选择适当的保护柱为了优