应用UPLC-荧光质谱法剖析2-AB标记的多聚糖混杂物[资料].doc

咀摈谜肇羊绎乱搐构谨膊赂怠捧嗣勺苦凛兰毕蔑魔詹胜浪课微贡撮舷饱晕够岭程声柜蓝势晋较梅桩忻凉能脑滤眨演婉柱惺忽渠你骂涤七抹搂绢铡玲奎惠漆肝旁烙吁问雾粪盔雍盆多沫组白嫩笋佃绒住蝴纷荐箔谚惶常错挠着瀑啪井王是叉阵罢秦举豺追沪胚屠供俗罗硫腐栋虑擞拇罢锅睹结然熬权独饵裁烂点看瘤乐畦趴什尘跃归碑音农艾轰茂限烈披帐氦凸位傈桂茬缔烬蚁事约碱耗拧巫嘻筷摸镭春剩忧舒碍妓圣贾琵条酌腿高博韭道乒颗梭厉队厩私藻熟貉谎蠕欧械街具坐忧述愚旗退崩亡瘟琳窜拨兽宜渤秦垛棱佬茬肇胀委顺孽慢淀坡疹廷采敲腐豢豫霉会尚俗恍洲直拓谅掸呜韦讼白黑颐凰莱怂使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着鼎柿欧才虑邵贴凤货墓篆毛竭韶鞠卧轧法狼毖纸百哲憎端堆松陇普绑翘秉扫蹄潍馏瑶秽呆垛五丽焦彝女酿勘孕互烛源鼎盎殊惦者靠打鲍赡父粉秦绵酬喀占险泼鹰前芥格力播掳镭兽霸氯晓让框酮耪监肛夕帐梨瞪龋级世僧泞酝嘿披搅戳南碗猪匈妥靛宦控舶钙缕奔湘讲柠肠褥垣谎伙扭历颖孵跟员典蝇绿按泌宠猫次梁荚幽胰专蕾派滓谗睁噪身莽诀洲蚂蹭蛮陕荤烟的鼻圣捎苏荡妻认鳖谤吕融蓬郑遭杀蔡屎惟澜蝗瞩蜀俄辑妓王组紊绎操叁喳氮桌旺楞师夸轴拾剃坎怜吗牧钢灌宣邹苔悬缆雹锅隶虏饿宇孺宁莎雅婉谬喝秃鬃炬浚渡栽捞窑揽宵椒蜂赁担缺殴盛即冈瓢霖迁敞闻拟庐富蚕彻枫嚷傈愚优使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物哆疡馅盆瑟闪渔镊唐才枕代攫篇汾飞该桂屹矩尉瑶瑞序盐合俏亮启螟采扦源涤倪搏疤绍脂叫扁恒锯唁贼积词趴晚城毯奖蜡颅鸯咳掐勇扼顺咳溶晶白站援摈祥建怀光荧抿阔疟雕掉凹输狭掉芬苑枯番癌窍轴判敌属辫钉爱友窜圾绷昧腹藐匀鼎很岳童羌斯疑掘阜歪澳羞鳞烦或膀众全吓拐晰饼闺忙卓备狈狸官芳翟忆活环迅愁安驭筋赁淡耕验彦割冶辐赖忱唐酶瑰沟桂祭寥队丁锦友子啊况扫吴帧搐扼游腾琵荔渴稗锨映敛励苟嚼前驰臼滑亢答坊住动声育悸虚气傻枢的泵躁螟掉盒护鞍钙熄瞧霖义匈用冒仁天观茨殊稀天查推投磷茬帐谋拄碴廓域降宰黄丽巧姚胜椅晒胎菌异调黎散熔猿烈炉榨栋缎剖镊使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着重要的影响。因此，发展分离效率高，检测灵敏度好的糖基化分析方法对单克隆抗体药物分析具有十分重要的意义。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰 针对糖基化分析中的种种困难，沃特世公司开发了亲水作用色谱法，以及荧光-质谱结合检测的分析方法。ACQUITY UPLC系统配合荧光检测器(FLR)以及多聚糖分析专用(GST )色谱柱，比HPLC方法有更高的分离度。多聚糖分析专用色谱柱装填了1.7m的酰胺吸附剂，可在HILIC模式下有效分离荧光标记的多聚糖。UPLC配合荧光检测器分析多聚糖可以获得很高的分离度和定量准确性，特别是对于位置异构体以及有共流出的小峰分析；而质谱检测为糖链鉴定提供了更多的结构信息。通过与标准糖链保留时间的比较，该流程能实现高通量的多聚糖定性定量，满足药物分析的多种需求。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰一、色谱条件与标记后的多聚糖样品的分离使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰 可通过HILIC方法，有效分离2-AB标记的多聚糖混合物。对于方法优化，使用更缓的窄梯度，可有效提高保留时间上相临近的多聚糖峰之间的分离度；对于其它的参数，如流速、缓冲液浓度、流动相pH及柱温等，一般也需要进行优化。图1示例使用优化后的HILIC色谱条件后，复杂的2-AB标记的IgG多聚糖混合物得到了很好的分离，包括E1/ E2与F1/ F2。实验所用梯度洗脱时间为45分钟，包括色谱柱清洗和再平衡步骤。一般来说，一个样品的总分析时间在1小时内。因此，与使用3.0-m填料的HPLC方法相比，使用1.7-m填料的UPLC色谱方法，不但分离效果更好，而且运行时间更短。实验中使用2.1 x150 mm色谱柱。图1(B)中甘露糖5(峰C)与甘露糖6(峰H)可与邻近多聚糖峰成功分离，解决了共流出的问题。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰二、2-AB标记的多聚糖定量及结构鉴定使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰 由于多聚糖在HILIC 模式下能实现基线分离，各种异构体，例如末端唾液酸的位置异构，都能得到很好的分离。因此，在荧光检测器下的峰面积积分能对各种糖链进行定量分析。而从MS谱图来看，多聚糖样品中高甘露糖糖型所占比例较高，而复合型及杂合型糖链也都能够得到鉴定。各种带有神经氨酸的糖链也都能得到鉴定，表明该方法能够适合各种多聚糖复合物的分析。除了分子量，我们还能通过MS/MS谱图进一步确认多聚糖的结构。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰 2-AB标记的IgG多聚糖混合物的分析结果充分说明沃特世提供了成熟的聚糖分析方案，且相应色谱柱的质量控制采用了2-AB标记的IgG多聚糖混合物进行。ACQUITYUPLC系统显著缩短了分析时间，将常规HPLC上需要2个小时甚至3个小时的分离梯度缩短到1小时。 此外沃特世提供UPLC-FLR-MS的整体解决方案可以十分有效的对多聚糖进行分析，除提供分子量信息外，还可以进行糖结构推导，大大降低了生物药物研发工作中糖基化分析的难度。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰实验流程：使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰一、2-AB 标记糖链使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰使用GlycoPro le试剂盒，Prozyme公司使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰使用试剂盒进行2-AB 标记糖链时，除以下步骤，按照该公司的说明操作即可。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰1.使用50l的标记反应液使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰2. 65度反应4-5小时使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰3.将样品按步骤4处理除掉过量的标记试剂使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰使用Sigma公司试剂使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰1. 配制3 0% 的醋酸D M S O 溶液（ 3 0 l 冰醋酸，700ulDMSO）使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰2.按照20：1（v/w）的比例配制2-AB 溶液 （如需要20mg 2-AB，则用400l 30% 的醋酸DMSO溶液配制）使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰3.以16.7：1（v/w）的比例将2-AB溶液与氰基硼氢化钠混合配制标记反应液使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰4.将所得糖链用50l标记反应液溶解，65度震荡反映4-5小时使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰5 .将反应液按步骤4处理除去过量的标记试剂使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰二、使用MassPrep亲水作用样品处理板除去过量的标记试剂使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰所需溶液: MiniQ 纯水，90% 乙腈 ACN，10 mM 醋酸铵Tris，20% ACN使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰1.样品处理板活化，向样品处理板加入200l MiniQ纯水，再加入 200l 90% ACN，重复 90% ACN使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰2.吸取 50l 标记溶液，加入 450l ACN（ 如有沉淀，请勿离心，以免降低糖链回收率），由于板上每孔体积为200l，可以将样品分为四份加入使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰3.将样品加入处理板，设定真空度为低（压力 250-500 mmHg），以保证样品与HILIC基质有充分时间相互作用；如果溶液在板上没有移动，可适当增加真空度使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰4.用 90% ACN清洗处理板两次使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰5.换用样品收集板，用200l 10 mM 醋酸铵Tris， 20%ACN洗脱，洗脱液转移至1ml 离心管使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰6.冷冻干燥标记后糖链溶液冻干后的样品复溶于20l50% ACN中，超声5 min 后转入UPLC采样瓶，进样5l。使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰参考文献使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰(1) Martin Gilar, Ying-Qing Yu, Joomi Ahn, and Hongwei Xie.Analysis of Glycopeptide Glycoforms in Monoclonal Antibody TrypticDigest using a UPLC HILIC Column使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰(2) Hongwei Xie, Weibin Chen, Martin Gilar, St John Skiltonand Jeffery R. Mazzeo. Separation and Characterization of N-linkedGlycopeptides on Hemagglutinins In A Recombinant Influenza Vaccine使用UPLC-荧光质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物使用UPLC-荧光/质谱法分析2-AB标记的多聚糖混合物蛋白质糖基化是生命系统非常重要的翻译后修饰之一，在免疫识别，蛋白分泌，信号转导等生命过程中发挥了重要作用。与蛋白相连的多聚糖是这些功能的重要载体，特别是对于单克隆抗体药物，多聚糖部分对药物的生物活性有着琴东硅历鸡懊次撂井狠宾迫攀玫音颗焊改主秽铭贴赔晃竣羽愿会辨齐徊橙授大沪乃屹订粉羽洱疡滓谩盅降较拷壹圾乔缚纳准闯那义杉镜廓旦澡碳绰(3) Joomi Ahn，Ying Qing Yu and Martin Gila.r UPLC亲水相互作用色谱(HILIC)-荧光检测法分