机采血小板常温保存时间对其冰冻质量的影响.doc

机采血小板常温保存时间对其冰冻质量的影响 赤峰市中心血站 张宏宇 中图分类号：R-331 文献标识码：摘要：目的探讨单采血小板在常温下保存不同时间对其冰冻血小板质量的影响。方法收集单采血小板30份，每份各留4个样本，每个样本分别在常温下保存0d、1d、2d、3d后再加入二甲基亚砜(DMSO)制备成冰冻血小板于-80的冰箱保存一个月，溶解测量冰冻血小板的PH、血小板数量(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分部宽度(PDW)、CD62p阳性率。结果单采血小板在常温下保存2d(48小时)后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的PH、PLT、MPV、PDW和CD62p的值变化不明显，但保存3d(72小时)后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的PH、PLT、和CD62p值变化不明显，而MPV、PDW却变化显著。结论单采血小板可以先在常温下保存2d(48小时)后再加入DMSO制备成冰冻血小板而不影响冰冻血小板的质量。 由于常温下(222) 单采血小板只可保存5天1，因此很多血站开展用DMSO低温保存血小板以备临床所需，但单采血小板可以先在常温下保存多长时间后再制备成冰冻血小板则没有明确的标准。为此，作者等对先在常温下保存不同时间的单采血小板再制备成冰冻血小板的相关指标进行检测，探讨血小板在常温下不同保存时间对其冰冻血小板质量的影响。 1材料与方法 11标本来源献血者所献的单采血小板30人份，每人份留取40ml样本分装于4袋Extended Storage Plate血小板专用保存袋(美国HAEMONEGICS公司)，每袋10ml共120个样本。献血者的健康标准按文件2操作，30份机采血小板的质量全部符合文献1的要求。 12仪器苏州医用仪器厂生产的XHZ-IB型血小板恒温振荡保存箱(222)及KJX-1A冰冻血浆解冻箱；美国HAEMONEGICS公司的MCS+9000型血细胞分离机；AUDIOCOM AC980电解质分析仪；法国Mythic18血细胞计数仪；TL-2000振荡仪；德国PARTEC PAS流式细胞仪；England U410-86超低温冰箱。 13试剂Extended Storage Plate血小板采集和保存管道(美国HAEMONEGICS公司)；血细胞计数仪的配套试剂由百特公司提供；CD62p(GMP-140抗体-FITC)和专用鞘液由法国Immunotech公司提供；DMSO(美国Research Organics)。 14方法献血者的血小板用MCS+9000型血细胞分离机及相应的管道进行采集，采集后留取40ml样本分装于4袋Extended Storage Plate血小板专用保存袋，每袋10ml。再把10ml样本放入血小板恒温振荡保存箱(222)保存，保存0d、1d、2d、3d后，在水平振荡60次/min的TL-2000振荡仪上每10ml的样本中加入0.6ml DMSO制备成冰冻血小板于U410-86超低温冰箱(-80)保存1个月。再把冰冻血小板样本于KJX-1A冰冻血浆解冻箱(38)中溶解，进行相关项目的检测。用电解质分析仪测PH；用血球计数仪测PLT，MPV，PDW。用血小板用专用鞘液调节血小板计数为5106/L，取100ul的稀释样本加入第一试管中，再加入20ul的CD62p(GMP-140抗体-FITC)，在第二试管中加入鞘液100ul，再加入20ul的CD62p(GMP-140抗体-FITC)作为同型对照，两根试管避光保存20分钟，用PARTEC PAS流式细胞仪测CD62p的阳性率。 15统计处理所得的数据以均数标准方差X5表示，采用t检验。 2结果单采血小板常温保存时间对其冰冻质量的影响见表1。单采血小板先在常温下保存2d(48小时)后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的各项指标变化不明显，但在常温下保存3d(72小时) 后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的PH、PLT、和CD62p值变化不明显(P0.05)，而MPV、PDW却变化显著(P0.05)。表1 单采血小板常温保存时间对其冰冻质量的影响 0d 1d 2d 3d t1 t2 t3 PH 7.100.27 7.080.34 7.020.25 7.000.38 0.263 1.19 1.17 PLT(109 /L) 1080250 1003243 1025200 1012207 1.26 0.99 1.80 MPV(fL) 8.11.51 8.301.65 8.451.80 8.901.91 1.45 1.81 2.31* PDW(%) 16.02.1 16.92.63 17.22.94 17.52.87 1.48 1.82 2.62* CD62P阳性率(%) 28.710.6 3012.1 3212.8 3213.4 0.44 1.09 1.06注:0d,1d,2d,3d,是血小板在常温下的保存时间。t1是1d与0d结果的统计比较, t2是2d与0d结果的统计比较,t3是3d与0d结果的统计比较,。 *表示P0.05,有统计意义。 3讨论大多血站都用DMSO制备低温(-80)保存冰冻血小板，但血小板可以先在常温下保存多长时间后再制备成冰冻血小板则没有明确标准。且血小板具有结构功能复杂和容易被激活的特性，冰冻血小板经过冰冻降温、复温溶解过程，其特性也巳发生明显变化3。由于MPV和PDW是反映血小板体积大小及差距分布的一组数据，而血小板对体积彭胀敏感，体积变化可造成血小板激活。血小板被激活时，可释放表达CD62p的颗粒成为活化的标志，且在活化与非活化的血小板之间差别以CD62p的区分最为显著4。通过对30份单采血小板留取的120份样本先在常温下保存不同时间后再用DMSO制备成冰冻血小板的相关指标检测发现，先在常温下保存2d(48小时)后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的各项指标变化不明显，但在常温下保存3d(72小时) 后再制备成冰冻血小板，冰冻血小板的PH、PLT、和CD62p值变化不明显，而MPV、PDW却变化显著。表明单采血小板先在常温下保存2d(48小时)后再制备成冰冻血小板不影响冰冻血小板的质量，但保存3d(72小时)后再制备成冰冻血小板对冰冻血小板的质量有影响。因此，单采血小板可先在常温下保存2d(48小时)，再用DMSO制备成冰冻血小板于-80低温保存。参考文献1中华人民共和国国家标准GB 184692001，全血成份血质量要求。2中华人民共和国国家标准GB 184672001，献血者健康检查要求。3刘景汉，欧阳锡林，高大勇冰冻保存血小板新亚群及其新特性体外研究中国输血杂志，2003，16(6):3854欧阳锡林，刘景汉，石群，等优化流式细胞术测定保存血小板CD62