枯草芽孢杆菌渗透压调节基因proB的克隆和表达.pdf

卷 期 年 月 微生物学报 软件进行序列分析发现 该片段第 0 9 核苷酸编码一个由 0 个氨基酸组成的蛋白质分子 其上游存在非典型的 1 区 典型的 1 0 区和核糖体结合位点 起始密码子处有最佳翻译起始效率的侧翼核苷酸序列 将其与 ABA9CB8 中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行同源性比较 结果表明该片段与枯草 杆菌 3D 的核苷酸序列 氨基酸序列的同源性分别为 D 和 证明该基因确实是一个 E 基因 通过与三十个不同种属微芽生物 E 基因的氨基酸序列比较 发现该蛋白存在 有可能与形成酶的活性中心和三维结构有密切关系的几个绝对保守的区域 关键词 耐盐枯草芽孢杆菌 E 基因 克隆 序列分析 中图分类号 F D 文献标识码 文章编号 23 2 302 3 微生物在高渗环境的胁迫下 大多都可以合成或从环境中吸收一些低分子量物质来 调节自身的渗透压以平衡外界渗透压的增高 这些低分子量物质 包括 GH 糖类 海藻 糖 蔗糖 醇类 氨基酸及其衍生物 脯氨酸 甜菜碱 微生物中累积这些低分子量物 质主要是通过运输途径和合成途径 目前已发现枯草芽孢杆菌与脯氨酸运输有关的蛋白 有 I JK 4 4 L 4 M 4 N 等 0 而脯氨酸的合成在微生物中是由谷氨酸经过 2 谷氨酰胺激酶 G 2谷氨酰胺磷酸还原酶 46 和 2二氢吡咯2 2羧酸还原酶 4 56 三个酶催化而成 其中催化第一步的 G 酶是脯氨酸合成代谢的限速酶 它是受终产物 脯氨酸的反馈调节 因此 G 酶活性的高低对脯氨酸的积累及与枯草芽孢杆菌耐渗透压 能力的高低有关键影响 本课题组对枯草芽孢杆菌不同菌株的耐盐能力进行了测定 发现它们的耐盐能力差别很大 其中枯草芽孢杆菌 0 的耐盐能力最高 对其胞内相 溶溶质的研究发现 该菌株在不含 C5 培养基按 照文献 2 的方法配制 培养基成分为 A 9 6A 2 9 6A A 2 A 葡萄糖 B 培养基是在 培养基中加入柠檬酸三 钠 方法 染色体 D 的制备 枯草芽孢杆菌 基因组 D 制备参照林万明的方法 用 酚 氯仿进行纯化 1 引物设计及 6 7 扩增 登录 EF 8FG 查找相关的 基因序列 主要参考枯草芽 孢杆菌 01 的 基因序列 运用 6 C EFE 软件分别在 基因上游和下游设计引物 上 游 引 物 3 D DD F K F K F K 2 L F 从第 步至第F K F 2 K F K F 重组质粒的构建和阳性克隆的筛选 用 4 3F 后 转化大肠杆菌 并涂布在补充有 I3 8O P6 中的已知基因的序列和编码的氨基酸序列进行 同源性比较 结果表明在给出的 0 个序列中 同源性最高的是 H F Q H F H EM 2 6 BB B 1 M R S I T 4H K UV 4 4 5 K 6M 5LO UGO H COL J R LH KLHW 5 G OM 0 CLOX 8 H J I H LH R LH KLHW PH B BM 0 期 张小青等 枯草芽孢杆菌渗透压调节基因 的克隆和表达 林万明 细菌分子遗传分类鉴定法 上海 上海科学技术出版社 8 80 H I50 89 JJ8 B 012 2 C 4 74 9 54 4 B 7 K V W08Q6 94 J 59 W056 L8 545 084 7 9 94 K 4L AD 86X W Y J84 59 6 4L5 89 4 X5 4 F ZY 0 J4 598 Z 9 04 W08Q6 94 J89 J56X 6 94 4L 3 7Y1 VZ W 9J4 59 4 4 8 545 084 8V 4Z 5W 1 1 L8F 9Q 4L 0 J56V 984 59 X 8 6 0 W056 45 9 6 9 68 6 6 ML 9 J 54 S 9J 5W 4L W08Q6 94 5V48 9 VZ X0 6 0 8 9Q 6 4L5 E J 54 S 9J 5W 4L W08Q6 94 C VX 4089 84 8 X054 9 L JL L8 KC 86 95 8J VZ S 9J 898 Z 4L05 QL 1E7 X05Q086 ML 0 80 959Y4ZX J8 Y S 9J 4ZX J8 K S 9J 89 8 V5 56 V 9 9Q 4 5W 4L W08Q6 94 9 4 X 40 86 S 9J 89 4L 0 W 89 9Q S 9J L JL L8 V 4 WW J 9JZ 5W V Q 99 9Q 4089 84 9Q 565 5Q J56X80 Y 59 5W 9 J 54 89 86 95 8J S 9J 5W 4L W08Q6 94 89 4L5 5W Q 9 9 Q 9 V89 L5 4L84 L565Q 95 5W E J 54 S 9J 89 86 95 8J S 9J 5W 4L W08Q 6 94 89 7 9 94 Q 9 ML X054 9 4089 84 VZ 4L W08Q6 94 L8 F 08 8V 5 4 0 J59 0F84 F 568 9 L JL L8F V 9 J500 Y 84 9Q J 5 Z 4L W506 9Q 8J4 F J 94 0 5W 9 Z6 89 40 Y 6 9 59 40 J4 0 5W 8J4 F J 94 0 J56Y X80 86 95 8J S 9J 5W 4L W08Q6 94 89 3 Q 9 5