分光光度法原理.doc

分光光度法目录n 第一节 基本原理n 第二节 仪器结构n 第三节 显色与测量条件的选择n 第四节 723N型分光光度计操作维护第一节 基本原理n 在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸收而建立起来的分析方法称为吸光光度法,主要有:n 红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长范围2.51000 mm ,主要用于有机化合物结构鉴定。n 紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围200400 nm（近紫外区） ，可用于结构鉴定和定量分析。n 可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范围400750 nm ， 主要用于有色物质的定量分析。光的吸收定律n 1.朗伯比耳定律 布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度成正比：Ab1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有成正比的关系：A c 二者的结合称为朗伯比耳定律：当一束平行的单色光通过均匀、非散射的稀溶液时，溶液对光的吸收程度与溶液的浓度及液层厚度的乘积成正比。朗伯比耳定律n 朗伯比耳定律 是吸光光度法的理论基础和定量测定的依据。应用于各种光度法的吸收测量。它不仅适用于可见光，也适用于紫外光和红外光；不仅适用于均匀非散射的液体，也适用于固体和气体。朗伯比耳定律，数学表达式n 其数学表达式为n 式中A：吸光度；描述溶液对光的吸收程度n b：液层厚度(光程长度)，通常以cm为单位；n c：溶液的摩尔浓度，单位mol/L；n ：摩尔吸光系数，单位L/mol/cm； 摩尔吸光系数的讨论n 摩尔吸光系数在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时,该溶液在某一波长下的吸光度；摩尔吸光系数的讨论n （1）摩尔吸光系数是吸收物质在一定波长和溶剂条件下的特征常数；n （2）不随浓度c和光程长度b的改变而改变。在温度和波长等条件一定时，仅与吸收物质本身的性质有关，与待测物浓度无关；n （3）可作为定性鉴定的参数；n （4）同一吸收物质在不同波长下的值是不同的。在最大吸收波长max处的摩尔吸光系数，常以max表示。max表明了该吸收物质最大限度的吸光能力，也反映了光度法测定该物质可能达到的最大灵敏度。 摩尔吸光系数的讨论n （5）max越大表明该物质的吸光能力越强，用光度法测定该物质的灵敏度越高。n 105 ： 超高灵敏；n =(610）104 ：高灵敏；n 104；n （3）有色化合物ML要稳定，不分解； n （4） ML的组成要一定 （只ML 无MLn） ；n （5） ML与 L 颜色差别大,吸收峰波长差：60nm. 选择合适的参比溶液n 为什么需要使用参比溶液？ 测得的的吸光度真正反映待测溶液吸光强度。n 参比溶液的选择一般遵循以下原则：参比溶液的选择n 1M、L 均无色，可用蒸馏水作参比。 n 2. L 无色，M 有色，可用不加显色剂的被测试液作参比溶液。 n 3. L有色，M 无色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。 n 4L、M 均有色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液。 n 5 改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以此溶液作为参比溶液消除于扰。第四节 723N型分光光度计操作维护n 开机操作n 1、 开启主机电源，仪器自动完成初始化，显示主菜单。n 2 、仪器预热30分钟。（要不要打开样品室盖子？）停机操作n 1、分析完毕，按“菜单”键，返回主菜单。（是否一定要返回主菜单，才能关电源？）n 2、按电源开关键，关闭仪器，切断电源。n 3、 检查样品室是否有溢出的溶液。清扫仪器内外卫生，作好仪器使用登记，罩上防尘罩。日常维护n 6.1.1 每次使用后应检查样品室是否积存有溢出溶液，经常擦拭样品室，以防废液对部件或光路系统的腐蚀。n 6.1.2 仪器使