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文档简介

溶菌酶晶体培养实验一 实验目的近年来，X射线晶体结构分析技术在受体研究中得到了广泛应用。其关键是获得具有高衍射分辨率的晶体。本试验通过溶菌酶晶体培养实验：1 了解蛋白质分子结晶的原理2 了解影响蛋白质分子结晶的因素3 掌握蛋白质晶体的悬滴培养法二 蛋白质分子结晶的原理蛋白质结晶的4个主要步骤：1 测定蛋白质溶液的纯度 2 蛋白质溶液与盐，有机化合物等沉淀剂混匀；膜蛋白需要加入去垢剂3 混合溶液达到过饱和状态，形成晶核4 晶核一旦形成，晶体开始生长三影响蛋白质分子结晶的因素1待结晶蛋白质的纯度，一般要求纯度高于95%2待结晶蛋白质的浓度， 510 mg/ml3沉淀剂，盐，PEG，有机溶剂4pH值5温度， 4C, 16C6. 结晶方法，悬滴法，坐滴法7震动四 试剂及器材1 试剂：溶菌酶蛋白，氯化钠，醋酸钠，去离子水2 器材：可调移液器，晶体培养板，硅化盖玻片，真空脂，晶体培养箱，显微镜五 试验步骤1 配制50 mg/ml 溶菌酶溶液，0.1 M醋酸钠溶液，pH4.52 配制池液：（1）5% (w/v) 氯化钠，0.1 M醋酸钠溶液，pH4.5 （2）8% (w/v) 氯化钠，0.1 M醋酸钠溶液，pH4.53在晶体培养板溶剂池中分别加入0.3 ml池液（1）和池液（2）4在干净的硅化盖玻片上，滴加2 ml溶菌酶溶液和2 ml池液5将盖玻片倒扣在加池液的有溶剂池上，用真空脂密封6将晶体培养板放入16C晶体培养箱7第二天，在显微镜下观察晶体生长情况Procedure for Crystallization of Lysozyme Chemicals needed: Lysozyme proteinSodium ChlorideSodium Acetate bufferDistilled waterProcedure1. Prepare 50 mg/ml sample of lysozyme in 0.1 M NaAc pH4.52. Prepare well solutions:a. 5% (w/v) NaCl, 0.1 M sodium acetate, pH4.5 b. 8% (w/v) NaCl, 0.1 M sodium acetate, pH4.53. Place 0.3 ml of well solution a, well solution b in each well of a VDX tray4. On a clean silated cover slide, create 4 drops of 2 l lysozyme solution, 2 l well solution5. Seal these cover slips with grease over a well6. Place the VDX plate in 16
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