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利穗科技（苏州）有限公司 Lisure Science (Suzhou)Co.,Ltd 山茶花中纯色素制备 山茶花一般春季开花，园艺品种繁多，其中深红色重瓣山茶花具有丰富的红色素，是开发天然红色素的良好资源。山茶花性甘凉而味苦辛，为凉血、止血、散癖、消肿的良药，故山茶花色素具有天然食用色素安全、营养、药用等典型特征。 样品十分复杂，含有大量难分离杂质。为提高产量同时保证产品纯度，使用两步制备方法。首先，使用大直径制备柱对样品进行粗分，实现目标物与大部分杂质的分离。然后以粗分产品为样品，使用小直径制备柱，通过串联的方式加长色谱柱柱长提高柱效，进行第二次制备分离。 山茶花样品分析 图1 山茶花样品HPLC谱图 仪器：依利特EliteP230II高效液相色谱仪； 色谱柱：SinoChrom ODS-BP （4.6150mm 5um）； 流动相：A0.1三氟醋酸水溶液，B乙腈，梯度洗脱； 检测波长：230nm ； 流速：1.0ml/min。 利穗科技（苏州）有限公司 Lisure Science (Suzhou)Co.,Ltd 初步制备分离 仪器：Dr FlashII中压制备系统； 流动相：A0.1三氟醋酸水溶液，B甲醇 ，梯度洗脱； 分离柱：2根40g制备柱串联，填料ODS AQ（30-50m）； 收集波长：230nm； 监测波长：254nm； 流速：25 ml/min。 图2 制备粗分图 收集物HPLC分析检验 Minutes0.06.012.018.024.030.036.040.0-2042104166228290350mV1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 图3 粗分收集目标物HPLC谱图 条件同图1 利穗科技（苏州）有限公司 Lisure Science (Suzhou)Co.,Ltd 第二次制备分离 样品太复杂，一次分离不能达到高纯度要求。以初步分离中收集的目标物进样，进行第二次制备分离，纯化目标物。 图4 样品第二次制备分离图 分离柱：3根12g制备柱串联，填料ODS AQ（30-50m）；B为乙腈，其余同图2 收集物HPLC分析检验 图5 最终目标物HPLC分析谱图 条件同图1 目标物纯度达到设计要求。 地址：苏州工业园区星湖街218号生物纳米
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