当归苦参丸2种方法提取液的成分比较.doc

当归苦参丸2种方法提取液的成分比较张兆旺王英姿孙秀梅摘要目的：选择当归苦参丸的提取工艺。方法：以阿魏酸、苦参碱、苦参总碱及干浸膏为指标，采用半仿生提取法(简称SBE法)和水提取法(简称WE法)进行比较研究。结果：4个指标综合评价Y值为：SBE法WE法。结论：当归苦参丸改制成其他口服制剂可选用SBE法提取。关键词当归苦参丸提取法阿魏酸苦参碱苦参总碱干浸膏当归苦参丸出自卫生部药品标准，为对其进行剂改研究，根据SBE法理论1，2，在用均匀设计优选出SBE法工艺条件的基础上，本文报道SBE法与WE法的成分对比研究。1仪器与材料PHS-3C型精密pH计(上海雷磁仪器厂)；MA 110型电子分析天平(上海第二天平仪器厂)；CS-930薄层扫描仪(岛津)。药材经作者鉴定，当归为伞形科植物Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根；苦参为豆科植物苦参Sophora flavescens Ait.的干燥根。阿魏酸、苦参碱对照品(中国药品生物制品检定所)。试剂均为分析纯。2方法与结果张兆旺王英姿孙秀梅2.1.1WE液按处方比例称取药材，混合粉碎，取1020目粗粉50g，用“双提法”提取3次(提取用水均为pH 7.00，分别加药材重量的10，6，6倍,浸0.5h,提取2.0，0.5，0.5h)。提取液分别抽滤，合并滤液，浓缩定容至100ml，得WE浓缩液(每1ml相当于原药材0.5g)。挥发性物质另器收集保存。取WE浓缩液10ml，置蒸发皿中水浴蒸至近干，加硅藻土3g，搅匀，烘干，研细，以乙酸乙酯-甲酸(191)100ml，索氏回流提取2h，提取液水浴蒸干，以甲醇定容至5ml(每1ml相当于原药材1g)，即得WE1供试液。2.1.2SBE液按2.1.1项下方法，只将提取用水依次改为pH2.00，6.50，9.00，依法制得SBE浓缩液和SBE1供试液。另取2种浓缩液各50ml，分别加浓氨水调pH 9.0，置蒸发皿中水浴浓缩至近干，加硅藻土15g，搅匀，烘干，研细，用氯仿100ml索氏回流提取2h，回收氯仿并定容至50ml(每1ml相当于原药材0.5g)，即得WE2供试液和SBE2供试液。2.2对照液的制备精密称取阿魏酸1.70mg，加甲醇定容至2ml；苦参碱1.20mg，加无水乙醇定容至5ml，备用。2.3阿魏酸的定性鉴别与含量测定2.3.1阿魏酸的定性鉴别取2.1项下WE1与SBE1供试液各5.0l，2.2.2项下阿魏酸对照液2.0l，分别点于同一块0.3%CMCNa-硅胶G层板上，用苯-冰醋酸-甲醇(1511.5)展开15cm，挥干溶剂，于UV 365nm下观察，供试品色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同深蓝色荧光斑点。2.3.2阿魏酸的含量测定32.3.2.1吸收曲线与标准曲线的制备取2.2项下阿魏酸对照液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0，12.0l，分别点在同一块0.3%CMCNa硅胶G薄层板上，按2.3.1项下条件展开，定位，测定吸收曲线，结果在320nm处有最大吸收，而在370nm处吸收较小。故扫描条件为：双波长反射式锯齿扫描，S 320nm，R 370nm，SX 3，狭缝1.2mm1.2mm，灵敏度中。按上述条件扫描测定，以峰面积积分值和阿魏酸点样量进行回归分析，得Y=42661.8867+36559.635X,r=0.9971。以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标作图，得一条不过原点的直线，在1.710.2g线性关系良好，故用外标二点法测定含量。2.3.2.2稳定性试验将对照液的同一斑点，依2.3.2.1项下方法，每隔20min扫描1次。结果表明，斑点面积积分值在1h内基本稳定，RSD1.8%(n=4)。2.3.2.3精密度试验将对照液的同一斑点，依2.3.2.1项下方法，连续扫描5次，结果RSD 2.2%。2.3.2.4供试液的含量测定取2.1项下WE1和SBE1供试液各10.0l，阿魏酸对照液5.0，10.0l，分别点于同一块CMCNa-硅胶G薄层板上，按2.3.2.1项下条件展开，定位，扫描。3次测定结果，SBE液中阿魏酸含量3.215 g.g-1；WE液中阿魏酸含量2.022g.g-1。经统计学处理，有显著性差异(P 0.001)。2.4苦参碱的定性鉴别与含量测定2.4.1苦参碱的定性鉴别取2.1项下WE2和SEB2供试液各10ml，水浴蒸干，残渣用无水乙醇溶解并分别定容至5ml。取该液各30.0l与苦参碱对照液10.0l，分别点于同一块0.3%CMCNa-硅胶G薄层板上，用甲苯-丙酮-乙醇-浓氨(10101.50.5)，上行展开10cm，取出，晾干，改良碘化铋钾显色，供试液色谱中在与对照品色谱相应位置上显相同橙红色斑点。2.4.2苦参碱的含量测定2.4.2.1吸收曲线与标准曲线的制备取2.2项下苦参碱对照液10.0，15.0，20.0，25.0，30.0l分别点在同一块0.3%CMCNa-硅胶G薄层板上，按2.4.1项下条件展开，显色，用玻璃板覆盖后定位，测定吸收曲线，结果在500nm处有最大吸收，而在600nm处吸收较小。故扫描条件为：双波长反射式锯齿扫描，S 500nm，R 600nm，狭缝1.2mm1.2mm，SX 3，灵敏度中。按上述条件扫描测定，以峰面积积分值和苦参碱点样量进行回归，得Y=2088.614X-3125.34，r=0.9991。以点样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标作图，得一条不过原点的直线，在2.47.2g线性关系良好，故用外标二点法测定含量。2.4.2.2稳定性试验将对照液的同一斑点，每隔20min扫描1次。结果表明，斑点面积积分值在100min内基本稳定。RSD 1.65%(n=6)。2.4.2.3供试液的含量测定取2.1项下WE2和SBE2供试液各30.0l，苦参碱对照液15.0，20.0l，分别点于同一块CMCNa-硅胶G薄层板上，按2.4.2.1项下条件展开，定位，扫描。3次测定结果，SBE液中苦参碱含量2.914 g.g-1；WE液中苦参碱含量2.332g.g-1。经统计学处理，有显著性差异(P0.01)。2.5苦参总碱的含量测定取2.1项下WE2和SBE2供试液各10ml，分别置于三角瓶中，水浴蒸干，残渣加乙醇5ml使溶解，蒸干，再加乙醚5ml使溶解。精密加硫酸液(0.01mol.L-1)20ml，摇匀，水浴加热使残渣完全溶解，并除尽乙醚后放冷。加新沸过的冷蒸馏水20ml与甲基红指示液2滴，用氢氧化钠液(0.018447mol.L-1)滴定至黄色，即得。以乙醇5ml和硫酸液(0.01mol.L-1)20ml作空白对照。按下式计算苦参总碱的含量(mg.g-1)：苦参总碱含量(mg.g-1)=C.氢氧化钠滴定液摩尔浓度Vo.空白液消耗氢氧化钠滴定液毫升数V.供试液消耗氢氧化钠滴定液毫升数248为苦参碱(C15H24N2O)的分子量3次测定结果，SBE液中苦参总碱含量0.7871mg.g-1；WE液中苦参总碱含量0.3357mg.g-1。经统计学处理，有显著性差异(P0.01)。2.6浸膏量的测定精密吸取WE浓缩液与SBE浓缩液各10ml，分别置于恒重的蒸发皿中(W0)，水浴蒸干，105烘至恒重(W)。按下列公式计算浸膏量(g.g-1)：3次测定结果，SBE液中浸膏量0.4060g.g-1；WE液0.3798g.g-1。经统计学处理结果P0.05。2.72种提取方法的综合评价将2种方法提取液的4个指标成分的含量，按下列公式分别进行标准化处理：Xij.提取液中成分j的含量Xj.2种提取液中成分j的平均值Sj.成分j的标准偏差，即Xij.标准化处理后的值分别将Xij加权后加和，即得综合评价指标Y值：Y=阿魏酸+苦参碱+苦参总碱0.7+浸膏量0.3结果其大小顺序为：SBE法WE法。见表1。表1当归苦参丸2种提取液标准化处理的比较提取液种类阿魏酸苦参碱苦参总碱浸膏量YSBE液原始值3.2152.9140.78710.4060标准化值0.70710.70720.70710.70702.8284WE液原始值2.0222.3320.33570.3798标准化值-0.7071-0.7072-0.7071-0.7070-2.8284注：n=33小结与讨论3.1以阿魏酸、苦参碱、苦参总碱和干浸膏为指标对当归苦参丸的2种方法提取液进行比较。结果4个指标综合评价Y值为：SBE法WE法。实践又一次提示：SBE法有可能替代WE法。对2种提取液中4个指标测得的数据进行标准化处理，以消除各指标的单位和量纲不同及各指标成分在药材中含量不同所造成的影响；同时根据SBE法原理，在选择提取工艺中各指标的主次地位给予不同的加权系数，对标准化后的值分别加权求和，即得综合评价指标Y值。Y值是将原始测得数据变换后根据关系式Y=阿魏酸+苦参碱+苦参总碱0.7+干浸膏量0.3，计算而得。3.2从“齐同对比”的原则考虑，本实验供试液制备未采用饮片，而是选用1020目粗粉，故干浸膏得率高，而且SBE法较WE法又高2.62%，这可能是SBE法提取时，用酸性水和碱性水对药材的细胞壁破坏程度较大，在增加指标成分溶出的同时，其他成分和杂质溶出和洗脱相应增多之故。3.3双波长扫描法测定苦参碱含量中，在用改良碘化铋钾显色后，应立即覆盖玻璃板，以防色痕消退，影响测定结果。3.4阿魏酸层离后稳定性差，应迅速在紫外灯下定位，扫描，在1h内完