自动生化分析仪操作方法.doc

四 血液临床酶学诊断1 血清酶的总活性测定酶是由组织细胞合成的具有特殊催化功能的蛋白质，是对化学反应具有强化的催化性，对作用物由严格选择性的生物催化剂。酶的活性是对酶的催化能力大小的度量。酶活性的测定就是酶催化某一化学反应的反应速度。由于酶是蛋白质，其催化的反应速度受温度，PH，离子强度，底物浓度等多种因素的影响，故酶的活性都是用在特定条件下，单位时间内，酶促反应中低物的消耗量或产物的生成量来进行测定。酶活性的测定采用手工或自动生化分析仪的两种方法进行测定。自动生化分析仪分为半自动分析仪和全自动分析仪两种。半自动分析仪由手工完成样品及反应混合体递送，部分操作由仪器自动完成。全自动生化分析仪则是从加样到出结果的全过程完全由仪器自动完成。按仪器复杂的程度及功能分类分为小型，中型，大型自动分析仪。小型一般分为单通道，中型为多通道，常同时可测210各项目，大型多通道的仪器可同时测10个以上项目，分析项目可自由选择。MD100型半自动分析仪简介：本仪器是由美国Sysmtey生化仪器公司生产。该仪器采用单一通道，可连程测试20个以上的项目。该仪器主要分为计算机控制系统，吸样泵，光学系统比色池三个部分。MD-100型半自动分析仪操作：1接通电源，约30分钟。2用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗仪器。如仪器久未使用需打开仪器侧小门，取下吸样泵小管，用注射器来回推入清洗液，清洗吸样通道。3进入所测项目的界面，点击轻轨鼠标右键编辑项目参数。4点击轻轨鼠标左键进入运行项目。 5按仪器提示的方法进行下一步操作，依次吸取空白试剂、标准试剂、样本试剂测试。 6本项目测试完毕，需用专用清洗液或自配3%84消毒液清洗。7退出项目测试，在根目录下关闭电源。乳酸脱氢酶（LDH-L）测定a 原理L-乳酸+NAD正离子丙酮酸+NADH+氢离子b 试剂原装诊断试剂盒c 方法取一定量的R2（Tris缓冲液PH8.9，100mmol/L;KCl 100mmol/L;L-乳酸锂 52mmol/L）加入R1（NAD 6.5mmol/L）轻轻摇动，并倒置几次，完全溶解后，即为工作液。空白管样品管工作液1.00ml1.00ml蒸馏水0.02ml-样品-0.02ml混合均匀，在37保温30秒钟，读取初始吸光度（波长340nm），同时开始计时，在精确的1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（A/分）d 上机操作程序1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.02ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为1min，延迟时间30秒。2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。e 计算LDH（U/L）=（A样品/分A空白/分）FF=V1（V2消光系数）1000=8095V1=反应总体积 V2=样品体积NADH在340nm的毫克分子消光系数=6.3f 注意事项1当A/分超过0.19时，用0.3ml生理盐水稀释0.1ml样品，在重新测定，结果乘以4。2复溶后溶液变混浊，或初始吸光度大于0.5,则不能使用。g 临床意义乳酸脱氢酶总活性升高见于急性心肌梗死、充血性心力衰竭、肺梗死、肝炎、贫血、肌营养不良、肾病综合症。天门冬氨酸氨基转移酶（AST/GOT）测定a 原理L-天冬氨酸+-酮戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+氢离子L-苹果酸+NAD正离子+水b 试剂原装诊断试剂盒c 方法波长：340nm温度：37比色杯光径：1cm取一定量R2（Tris缓冲液PH7.8,80mmol/L;L-天门冬氨酸240mmol/L）复溶R1（-酮戊二酸12mmol/L;NADH0.18mmol/L;苹果酸脱氢酶1000U/L；LDH5000U/L）空白管样品管工作液1.00ml1.00ml蒸馏水0.10ml-样品-0.10ml混合均匀，在反应温度保温1分钟，读取初始吸光度，同时开始计时，在精确的1，2，3分钟时，分别读取吸光度，确定每分钟平均吸光度的变化（A/分）。d 上机操作程序1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.1ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为30秒，延迟时间30秒。2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入测定试剂，仪器自动测试样品管。3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。e 计算AST（U/L）=（A样品/分A空白/分）FF=V1（V2消光系数）1000=1746V1=反应总体积 V2=样品体积NADH在340nm的毫克分子消光系数=6.3f 注意事项1测定时间1分钟，A/分大于0.400；测定时间3分钟，A/分大于0.200时，样品用生理盐水稀释后重新测定，结果乘稀释倍数。2若试剂空白吸光度小于1.000，勿用。3仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。4应在28条件下贮存，避免在28以上及0下存放。g 临床意义GOT酶总活性升高，见于急性肝中毒、钩端螺旋体、流行性出血热、副伤寒、上呼吸道感染、急性心肌炎、慢性肾盂肾炎。葡萄糖（Glu）测定a 原理Glu+氧气+水葡萄糖酸+双氧水双氧水+4-氨基安替吡啉+酚醌亚胺+水b 试剂原装诊断试剂盒c 方法波长：505nm温度：37比色杯光径：1cm将10 mlR1（葡萄糖氧化酶13000U/L；过氧化物酶900U/L）与90mlR2混合均匀，为工作液。空白管标准管样品管工作液1.50ml1.50ml1.50ml蒸馏水0.01ml-标准-0.01ml-样品-0.01ml分别混匀，37保温10-15分钟，用半自动生化分析仪检测，读取A标准和A样品操机d 上机操作程序1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.50ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为0.01ml;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为2秒，延迟时间2秒。2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品管。接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。e 计算葡萄糖浓度=A样品A标准标准浓度葡萄糖标准液 5.55mmol/L(100mg/dl)f 注意事项1样品葡萄糖浓度超过22.2mmol/L(400mg/dl)时，样品量可减半，改为5ul，标准量不变，重新测定，结果乘以2。2仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。3应在28条件下贮存，避免在28以上及0下存放。g 临床意义 1血糖升高见于糖尿病、应激、暂时性高血糖症、内分泌紊乱、慢性肝脏疾病、马疝痛。2血糖降低见于仔猪低血糖、牛酮血症、肾上腺皮质功能减退、甲状腺功能降低、进行性肝病、严重肾性糖尿病。总蛋白（TP）测定a 原理在碱性条件下，蛋白质多肽链中的肽键与铜离子络合形成紫红色化合物。b 试剂原装诊断试剂盒c 方法波长：546nm温度：25比色杯光径：1cm空白管标准管样品管试剂1.00ml1.00ml1.00ml生理盐水12.5ul-标准-12.5ul-样品-12.5ul混匀，保温10分钟，用半自动生化分析仪检测，读取A标准和A样品。 d 上机操作程序1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.00ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为12.5l移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为2秒，延迟时间2秒。2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，再按提示吸入标准试剂，仪器自动测试标准管，接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品管。接下来按提示吸入测试试剂， 仪器自动测试样品3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出e 计算总蛋白浓度= A样品A标准标准浓度（g/L）f 注意事项1样品蛋白浓度超过100g/L，可用生理盐水稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。2温度高于25，测定值偏高。 白蛋白（A）测定a 原理在PH4.2环境中，溴甲酚绿在有非离子去垢剂聚氧乙烯月桂醚存在时，可与蛋白形成蓝绿色复合物。b 试剂原装诊断试剂盒c 方法波长：630nm温度：37比色杯光径：1cm空白管标准管样品管试剂1.50ml1.50ml1.50ml生理盐水5ul-标准-5ul-样品-5ul混合均匀，保温5分钟后，用半自动生化分析仪检测，读取A标准和A样品。d 上机操作程序1按试剂盒说明书编辑参数：点右键进入编辑参数界面。移动鼠标至温度设置处，设定温度为37度；再次移动鼠标至试剂吸入量处，设定试剂吸入量为1.50ml;移动鼠标至样品吸入量处，设定样品吸入量为5.00l;移动鼠标至保存处，按键点击保存。移动鼠标至读数时间处，设定读数时间为2秒，延迟时间2秒。2点击轻轨鼠标左键，进入运行界面，按仪器提示，先行清洗吸入空白试剂，仪器自动测试空白管，按提示吸入测试试剂，仪器自动测试样品管。3仪器自动计算结果，人工记录或仪器自动输出结果。4本项目测试完毕，点击退出键，仪器提示清洗，清洗完毕，仪器自动退出界面。e 计算白蛋白浓度= A样品A标准标准浓度（g/L）f 注意事项1样品白蛋白浓度超过60g/L可用生理盐水稀释样品，再重新测定，结果乘以稀释倍数。2仅用于体外诊断，内含迭氮钠，避免直接接触皮肤和眼睛，切勿吞咽。3应在28条件下贮存，避免在28以上及0下存放。g 临床意义 1血清总蛋白，白蛋白及球蛋白/球蛋白比值减低者见于肝功能损害如脂肪肝、肝硬化、肾炎、恶性贫血、恶病质。2 总蛋白、球蛋白升高、白蛋白/球蛋白比值下降者见于各种感染及慢性肝脏疾病。3血清总蛋白升高，但白蛋白/球蛋白比值不变者见于各种原因的腹水。2 血清同工酶的测定催化功能相同而结构不同的一类酶，称为同工酶。同工酶具有适应生物进化需要、符合器官的代谢功能、协调各细胞器的代谢反应、理顺病理异常代谢等功能。LDHI聚丙烯酰氨凝胶电泳： LDH主要存在于骨骼肌、心脏、肾脏，其次是肝脏、胰腺、肺脏、肿瘤组织等，红细胞内含量也很丰富。乳酸脱氢酶至少有5种同工酶： LDH1-存在与心脏、红细胞、脑和睾丸。LDH2-存在于平滑肌、心肌、脑、肾、骨骼和甲状腺。LDH3-存在于肺、胰脏、肾上腺、脾、胸腺、甲状腺、淋巴结、白细胞。LDH4-存在于皮肤、肝脏和肠道。LDH5-存在于骨骼肌、肠道、皮肤和小肠。a 原理以聚丙烯酰胺作电泳介质，经电泳后分离后显色，用光密度计扫描，以确定各型同工酶的相对百分率。b 试剂的配制PH8.9凝胶缓冲液：Tris:6g EDTA:1.17g NaCl:1.0g 加重蒸馏水溶至100ml ,4摄氏度保存。丙烯酰胺贮藏液 丙烯酰胺：30g 双丙烯酰胺：0g加重蒸馏水溶至100ml,4保存。2.28的过硫酸铵(每周新配): 过硫酸铵:4.0g 加水溶至100ml。4三乙醇胺电泳缓冲液（PH8.3） Tris:0.6g 甘氨酸:2.88g 加水至100ml,4保存 。临用时10倍稀释。40的蔗糖溴酚兰0.11mol乳酸钠: DL-乳酸钠:9.35ml(浓度60g/dl)加水至50ml。NAD溶液： NND：100mg加水至10ml，4；保存，可用两周。0.1NaCl溶液: NaCl:584mg加水至100ml。5mM MgCl2 MgCl26H2O：100mg加水至100ml。0.5M磷酸盐缓冲液（PH7.4） KH2PO4 68g溶于水,以NaOH 调节PH7.4(约需50g/ml,NaOH 22ml)加水至1000ml。NBT（氯化硝基四氯唑蓝）：NBT 50ml 加水至50ml，4保存。PMS（酚秦甲脂硫酸盐）：1mg/ml，4保存暗处。7.5的冰醋酸:冰醋酸75ml。加水至100ml。c 操作：1制凝胶：PH8.9的缓冲液1.8ml,丙烯酰胺贮存液1.8ml,4的硫酸胺0.8ml,水5.1ml,4的三乙醇胺0.5ml,混匀注入玻管内(高度5-7cm,点5cm即可)。2点样：血清用40蔗糖作1：2稀释后点5ul，羊血1：1稀释即可。于电泳槽中加入已稀释的电泳缓