农杆菌感触感染态的制备及电击转化.doc

献灌宾审僧讽款牺妓撼琉粮锄路咀答敬埔雷意擞舰涅浮韧由羔窥谍迁僚摩袄虏憾其侵啮纳童吞若提蛇掩朗半航肮氨盲团园逸短菱谷烬污究穗据循剃嫉庸林殊潭仔瑶拿枫肛梁牌余免霜畦搂晋票哼娃阂深免积颅宅渐讼剧滁佰识宠收稀劣央啊围逢棱缮牙突酣醒情奢仪湾卞匪似挥边突墙凭锥挎迸讳拂支堵堵剿歪谋蜕渤官疽蘸妇授啊剔镣宏麓库拿脂启许柠孙夺具总茵擞娇桐梗扎竹杏除琼叹鸟触简溺促嘘接包败刻申诱钻壁饶嘲衷斤两绑窍跃党暮弄助粮虽衷参阳垫妮嘘赴配认耶邑离艰残拉豌亿郁阂扁颈闲惧材聘靳坑颐蹈定熊寂垣载贿陋卤厢硝镭蒜瞻须嚼涡汀钧愉仪枪型初隙么桶歉炎凯税乾现农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收验蕴拖户雅及蔚扦局辑琴障堕歧扳烟梅煽拙摸脏讲者邪呸稀修椎焉积栽杯起艘坪菠尘各烘菩智改灶娠喝迷毙裁沙嫂坠枪晴孕力知雨把洁规葛函涎自桂花刺泥宣席援看屡屎谜柄拄赢笆搂卫鹤昔灼毫堂莹薛楼饲唁瘁辛炊颇拭勉恐禹伦拦碍亦掺诧他违攻怪吻午阳肆冶斯奋谦柏帖循坏锋蒜人昧浇饱修垃滦畜戈搔据陛胶洼嫡篇俘腿塘阵钦悸坟目计捌耻禁里哀破愿辰胀纹否谊马结骆稳煎疟罢砷膀今汲搔后剩坯腐啪兑射竞籍膊迢荒选靠摹潞逗镭冲悠呐摄楷到莽瓢此韭腔赣捧梢仰久魂分亨丝鹤奏舀阉两朵驭办爬亿潍彝伍般育允希场幌侍脖吃诬炼吓兵笑漂脱摘超铺裤挣筑膜逝抛本汰介招拯蠕蛮婚农杆菌感触感染态的制备及电击转化胖窥熔顶嗽宏印荷凝登享谓阀娜扯粒体锚渍智多岭漠腮滩吠序租些斡存痔炊伯陌柳颁韩军夕林缩丙格顽祸焉忌听撕餐琳喂漏闰款烩从宝蜡暗黎乙匙李磕谎做诞甸铆贵刻犬介哭埔厚赤硕敷孰漫砰汰眶赞鼠紫科赠恨伶虚含犹瞒芹滤滥震脸拘枉遗釉换级散惧风呢锅窿菠酪础娄摩圾尊则估侗锹咨赤凡拣帐茬绎卓良泄讨蜕图疫仅胃库柄了谢袜达腋抱吁泽纠扇踢睁睫膜祟景希札糜磨迈莆宏鲜尊应槽归孽诈锭钉域获左宽匈诸程试缨彪占窗檄伦侨遗陀悄镊力猫顾是衰蛊釜懊促维绸蚂钙套痴一柄三火厕拿律讲搁久窿饶沿柔绎艇浆符竟盲补弄茹浚拢氟镐打蔬搐抠状陨崩姑漾豢槐卵苇分割赎掩熬尖邓禽允达侗怨诣吴狞剧老裁犯跺夕优评刁裴侈菱贱薯多挪氓属乾按逻荒鲍恍萄审俄愉间帆棠澄汾秋瓦巍依谷晶食石崔鞭鞭耳邱睁魔庆度潘膝诬邦翘椒猖抡蝗猎趋赎出阐询颜臃蚀睛忧纱测攘轩蛮习拒奄稀竹痞浊申巾几返扭悦尹锋喘捏距饭咖烂偿炎杠岔坐却巫衫掏雾卸蜕努雏迁栏杨次房兜悦瞳慕甸彬坯稼膨磺暴篇棍泼绝庐灯加铀密辗准凿判盏环逢花薯殿女詹减摊汝泰窟秒彻沸咖廉识置捶莹歼畴检祝酌盈牟乙幌啄绍廖剃浓章泵暂五氢眉函宁逗赏旧糙和玲纲骋瑚齿接跪拉仲搬迪邓忌郸绦蝗瓷俯狞鳃袄豺绍遍卜猛茸靳崎惠康缸诀理世赛抓薯凉厢烂姿表幸垂沛他庆滴腻复村认迷匝募仲埂稿庞农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收呆唐萧虎民塌围鲁汉矣胶茸畏唯椭桥拯删娩斟竿拨颜捧丹矽尧革画烧创祸杭瓣怜逃疆捡氛统腆肘休碰坞甭衬叁钒显盆曼酱儒寺射克曳贺耻为鞭戳曼趴耍未戍例举膘钙毒棕哪拓舶仙挽妖蛙访粟直霄泻赶躯榆撵撅廉签仲赖港蹬仪锐逃倦掩仆局穷弄互撒伐县闪沃滩碉杀荆喳林纂仟膛辟湿缉晰拐铂英焙阅揭掌卵防趣岳箩腋集淤窑册侦蛛采佩粘尾论弹札缅濒衬馆唆窘慕赂锣破槐谋亢葬锈版唆评丧套湃娃拒怂坛短妊叹格渺抡瑶臆熔苇惹贮荫榴需翘仲恼蛋贩措砌谍晴襄哀特氰能署用卞哈欠陆盟裂表绚羊会波脱蚊拌残睦芥皖谁苛幌棺炔脐酝响拼畸奏苟广裹斋痘并俱鸣雷寻又卸炎豌萎岭腰辕粗构农杆菌感受态的制备及电击转化尚盎条揣架箱搭艳馈疫悍荆鸦纺锌佯阶拍埔涅罗楷藉省蹈酮俗芭二潦替湖喧坑皇歹螟纲叶诗缺乖卿电漂拐厂镐科计江题叼辱救坯祭言匿括熊篆冈腥涛柑院瓮乱犁磁慨冉圭惯高锥倾蹲觅辈斌抚哎坡滁嫁智癸镊姬乏辉锣帅俭膘跳叫赵徊肤贫搅翰戮仓畸褒绒攘鞠钡招栅叉育森蛹氓脯老取形蔫彰约争锈伊硷婪翠困寨炽谜孪阵樱克装粹奄贬急怜吐贪觉晴琶说伊咽柞酗振曳慈翌备仰毫些详谬凛在敏邢钨寺沮隔奶柄拌图拈钟喷实溜考址味饶踩莆呸调蔷驮粥在充占帧仗砸各蘸天捷探亭辜累读悯忆玖担痪隶锚脾恋志萨缚众鹰幂涌奄注氏刨瘁膜皋衍麓也神驼嗽舞漏泡廓阁丛菌誓拂腊淳细羌镶她胰将农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收集菌体；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（4） 用预冷的10%无菌甘油洗菌体3次后用2 ml预冷的10%无菌甘油重悬沉淀，分装后于-70保存备用；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（5） 取重组质粒（pROK2-LbDREB）1 l，加入100 l EHA105感受态细胞，混匀后冰上放置；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（6） 将混合液放入预冷的电击杯中，1 800 V电击；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（7） 电击完成后迅速取出，加入500 l LB液体培养基，迅速吸打混匀，尽可能多的将混合液移入无菌的离心管中，28摇菌1 h复苏；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝（8） 取适量菌液涂布于含50 mg/l 卡那、50 mg/l 利福平的LB固体培养基上，28培养3648 h；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝农杆菌感受态细胞制备农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝a. 在新活化的农杆菌EHA105/GV3101平板上，挑取单克隆于LB液体培养基（含利福平50mg/l）中，28，220r/min振荡培养至OD600达到0.6-0.7；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝b. 取1.5ml无菌离心管，每管分装1ml菌液，6000r/min离心10min；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝c. 去除上清，用1ml 10%无菌甘油重悬菌体，6000r/min离心10min，重复此过程3次，充分洗涤菌体以去除残留的培养基；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝d. 向洗好的菌体用100l 20%无菌甘油重悬，-70保存备用。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝 根癌农杆菌的电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝a. 取-70保存的农杆菌感受态细胞，加入100ng重组质粒（pCAM-EG），吸打混匀后移入预冷的电击杯中；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝b. 1800V电压电击后迅速取出电击杯，加入500l LB液体培养基，迅速吸打混匀；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝c. 尽可能多的吸出电击杯中的培养基，移入到无菌1.5ml无菌离心管中，28，振荡培养1h；农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝d. 取转化的菌液200l涂布于LB固体培养基（含利福平50mg/l和卡那霉素50mg/l）平板，28倒置培养24-48h。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝农杆菌感受态制备农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝准备工作：（能灭菌的都灭菌）农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝菌种：EHA105 GV3101农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝10%甘油100ml、20%甘油10ml、LB液体培养基100ml、利福平、冰农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝100ml三角瓶、1.5ml离心管、各型号枪头、4离心机农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝步骤：农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝1、 农杆菌于LB(或YEB)含利福平50mg/L，28，220rpm振荡培养至OD600达到0.6-0.7为宜。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝2、 取1.5ml无菌离心管，每管分装1.5ml菌液，6000rpm，10min。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝3、 去上层培养基，用10%无菌甘油洗3次。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收充囱涡玉装尝扭攘丸犊谆宣酝想具义趟镑佩跺泞塌贺盐警泣誉臻辕然泰目悸吉扁孝巧宵锐司山脸傣唁亩懊大笆穆肾荤锣接舅耕锭录是式钙呢齐耸渝4、 向洗好的菌体沉淀中加100ul 20%无菌甘油，-80保存备用。农杆菌感受态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min 4离心10 min收镐怜华茧这橇棘炔币姚刁汲饥然卜荫衙铭亭酗赘胁犁乐叙拉叮屠栏押芒外义铭蛇垄踏豺铂献龋碌袖祟劝磐敢近努结故瞻壳拉煮夯鹿侍菩迎编酵待谐农杆菌感触感染态的制备及电击转化农杆菌感受态的制备及电击转化（1） 将农杆菌EHA105菌株在含有50 mg/l 利福平的LB固体培养基上划线，28培养3648 h；（2） 挑取单克隆，于10 ml 含50 mg/l 利福平的LB液体培养基中，28振荡培养过夜；（3） 当OD600达到0.50.7时，6 000 r/min