氯霉素滴眼液含量测定方法验证.doc

氯霉素滴眼液含量测定方法验证巴红娟，王红然，刘士峰（石家庄格瑞药业有限公司，河北 石家庄 050801）【摘 要】参考中国药典2010年版氯霉素滴眼液含量测定方法，对HPLC梯度洗脱时间程序进行调整并进行方法验证，结果表明该方法分离度好、准确度高。【关键词】氯霉素滴眼液；高效液相色谱法；含量1 材料与方法1.1 仪器液相色谱仪：SHIMADZU LC-20A；色谱工作站：Lcsolution；检测器：SPD-20A紫外检测器。1.2 试剂庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾、三乙胺、磷酸等均为分析纯；甲醇为色谱纯；氯霉素对照品（批号：130555-200602）、氯霉素二醇物对照品（批号：130436-200704）、对硝基苯甲醛对照品（批号：130562-200902）、羟苯乙酯对照品（批号：100847-200501）均由中国药品生物制品检定所提供；氯霉素滴眼液由本公司车间提供。1.3 色谱条件色谱柱：SHIMADZU VP-ODS（250mm*4.6mm，5m）；流动相A：0.01mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8g，用0.01mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000ml，再加三乙胺5ml，混匀，用磷酸调节pH值至2.5），流动相B为甲醇；检测波长为277nm，按下表进行线性洗脱。表1 时间程序表时间（分钟） 流动相A(%) 流动相B（%）0 62 3820 62 3840 43 5755 62 3860 62 381.4 系统适用性测试取氯霉素二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、氯霉素对照品、羟苯乙酯对照品各适量，加甲醇适量（氯霉素每10mg加甲醇1ml）使溶解，用流动相A-B（68:32）定量稀释制成每1ml中含氯霉素0.25mg、氯霉素二醇物20g、对硝基苯甲醛1.5g、羟苯乙酯25g的混合溶液20l注入色谱仪，记录色谱图。 图1 系统适用性测定图谱 表2 系统适用性测定结果保留时间（min） 峰面积 拖尾因子 理论塔板数 分离度氯霉素二醇物 9.835 1321753 1.171 11621.502 -对硝基苯甲醛 15.880 152613 0.903 3161.018 8.088氯霉素 17.447 10515525 1.095 12981.438 1.799羟苯乙酯 35.241 1395143 1.014 58685.111 29.7951.5 对照品溶液的配制精密称取25mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，用流动相A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml上述溶液至10ml量瓶中，用流动相A-B（62:38）稀释至刻度，摇匀即得。1.6 供试品溶液的配制精密量取本品1ml（8ml:20mg）置50ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀即得。2 结果2.1 专属性试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为空白溶液，按“1.6”项下方法制备空白供试品溶液，进样20l，结果表明：辅料对氯霉素含量测得无干扰。2.2 线性关系考察精密称取25.0mg氯霉素对照品置50ml量瓶中，加流动相A-B（62:38）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照储备液，精密量取0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml对照储备液至10ml量瓶中，用上述流动相稀释至刻度，摇匀，各精密量取20l，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积积分值（Y）与进样浓度（X：g/ml）进行线性回归，回归方程为Y=50356.91X-9470.5，r=0.9998（n=5）。结果表明：氯霉素进样浓度在60-140g/ml范围内，与峰面积线性关系良好。2.3 精密度试验精密吸取线性3号液20l，重复进样6次，测得峰面积RSD为0.16%（n=6）。2.4 重复性试验取批号为100110的样品6份，按“1.6”项下方法制备供试品溶液，进样20l，测定峰面积RSD为1.08%（n=6）。2.5 溶液稳定性试验取同一供试品溶液，每隔2小时进样测定峰面积，测得峰面积RSD为0.70%（n=5）。2.6 回收率试验取除氯霉素外的其他各辅料，按处方比例称取，加水溶解后摇匀，作为回收率试验的空白溶液。精密称取氯霉素对照品适量置10ml量瓶中，加空白溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml上述溶液到50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，备用；精密量取20l注入液相色谱仪，记录色谱图。计算回收率，结果如下：表3 回收率测定结果加入量（mg） 计算量（mg） 回收率（%） 平均回收率（%） RSD%18.7 18.55 99.20 99.29 0.9020.5 20.79 101.4120.0 19.77 98.8628.3 28.20 99.6427.8 27.59 99.2428.1 27.72 98.6632.5 31.98 98.4032.3 31.88 98.6932.0 31.85 99.542.7 含量测定取3批氯霉素滴眼液样品按照“1.6”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20l，注入液相色谱仪，测定峰面积，按外标法（以峰面积计算），即得，结果见表4.表4 氯霉素滴眼液含量测定结果序号 1