食用菌栽培技术复习题 第三章.doc

食用菌栽培技术复习题 第三章 第三章 菌种的生产与保藏一、菌种培育技术人工培育的菌种有母种、原种和栽培种之分。母种（一级菌种）：用孢子分离或组织分离等培育的菌丝体称为母种。原种（二级菌种）：把母种扩大到木屑、棉籽壳等为主的培养料上的菌种称为原种。栽培种（三级菌种）：由原种扩大培养成为生产上使用的菌种称为裁培种。菌种：实质上就是经过人工培养并进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。制种程序： 孢子分离 种菇 组织分离 母种（一级） 接种原种（二级） 接种栽培种（三级）经过这样三级培养，食用菌菌丝数量大大增加。一般每支试管可繁殖46瓶原种，每瓶原种又可扩大繁殖60100瓶栽培种。、菌种生产常用的设备和用具1、接种设备：接种室；接种箱；超净工作台2、灭菌设备：高压蒸气灭菌锅；2）常压菌锅3、培养设备：培养室；恒温箱4、培养菌种的容器母种：试管原种、栽培种：菌种瓶，菌种袋等。5、接种工具：接种针、环、刀、钩、铲、锄、枪等；6、消毒药品常用的消毒药品有：70%酒精：一般用于手、种菇表面消毒；0.1%升汞：常用于玻璃器皿、非金属器械及种菇表面消毒；0.1%KMnO4：一般用于用具、器皿消毒；5%石炭酸：喷洒墙壁、地面及擦洗桌面等，也可用来苏尔代替；2%来苏尔：（用法同上）甲醛（福尔马林）：用于菇房和接种箱空间消毒；方法：关闭门窗消毒，自行气化；用量：10ml甲醛5g KMnO4。、母种生产技术1、母种培养基配方（马铃薯葡萄糖琼脂培养基，PDA）马铃薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、琼脂20g、H2O 1000ml、pH 6.5；配制方法（以PDA为例）马铃薯（去皮、去芽眼）切成片称取200g1000ml H2O煮沸双层纱布过滤取滤液并补足1000ml琼脂熔化其它营养物质调节pH（HCl或NaOH）分装试管灭菌（高压蒸气灭菌2030min）制成斜面检查灭菌效果（即2830培养23d）2、母种分离母种分离方法主要有：孢子分离，组织分离，基质分离孢子分离法：利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。A 单孢子分离法：培养基上只接种1个担子孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。B 多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。担子菌亚门中，约10%菌类属同宗结合，90%以上是异宗配合，所以单孢子分离对大多数食用菌不适用，只有育种时才采用。多孢子分离简单易行，生产上经常采用。组织分离法组织分离：指通过菇体组织分离纯种。优点：操作简便、取材广泛、不易变异，保持原菌种优良种性。方法：选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、56分成熟）组织分离选择种菇表面消毒（75%酒精或0.1%升汞）撕成两半取菌柄菌盖交界处小块菌肉移入PDA培养观察转管纯种。上述分离物在25下，经35d可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔12d检查1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养1015d，再作1次转管即得到纯种。注：取组织块不要贪大，因组织块小易定植；有些食用菌不易用组织分离法获纯种；如：红菇、乳菇等，因它们菇体细胞体细胞已泡束化，再生能力极弱；又如银耳和木耳等胶质菌，子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木。基内菌丝分离法（基质分离法）：（常用于银耳及木耳）由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。方法：取12 cm厚菇木、耳木（子实体着生部位）去皮消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）切去四周木块切成火柴杆粗细，0.5 cm长的小木梗取1根放入试管斜面上培养取菌丝转管纯化3、菌种提纯与扩大繁殖提纯：选稀疏单菌落边缘取菌接种试管斜面（35支）培养纯菌种扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。注：在母种扩大繁殖时，最好一次多移些，不易多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。4、质量检验：对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量鉴定，选优去劣，方可使用。检验方法：外观鉴定： 优良菌种：菌丝浓白、粗壮、富有弹性，则生命力强。 老化菌种：菌种已收缩、干燥或菌丝体自溶产生了大量红褐色液体，说明生活力弱，不可使用。、原种和栽培种的生产技术1、常用培养料的配方和配制方法 木屑米糠培养料：木生菇类，如：木耳、银耳、香菇；培养料 草茎或草粪厩肥培养料：草生菇类，如：蘑菇、草菇； 棉籽壳米糠培养料：多种菇类。2、培养基（料）配制原则掌握碳氮比例：菌丝体生长阶段：C=201；子实体形成阶段：C=30401；选好培养材料首先选不含杀菌物质的。杉、松、樟、楠等树种，含酚、树脂等，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。根据食用菌的喜好选木料。如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。注意物理性状：培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。促进营养分解食用菌虽然能在天然的木屑和秸秆等培养材料上生长，但往往很缓慢。经过一定时间的高温、高湿处理，或灭菌，或堆制发酵后就比较容易分解吸收。（营养物质转化）调节酸碱度4、原料选择的注意事项（几点说明）木屑： 树种：除松树、杉树、柏、樟、芸香、按属等树种之外（因其中含有松、酯、精油等杀菌物质），绝大多数阔叶树和木屑都可以利用。 粗细：不宜过细，以免培养基过湿或通气不良。 选择：根据食用菌分解能力选择。分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之采用软质树种木屑。如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木屑为宜，木屑越陈越好，茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。米糠、麸皮作用：补充氮源和维生素。麸皮：含氮量比糠多，但维生素不如米糠；米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般10%20%，过多易引起污染。糖的作用初期补充碳源，用量1%5%；诱导胞外酶的产生。Ca2作用原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子，钙不断中和食用菌产生的有机酸，钙还能中和单宁，减少过量K、Mg对菌丝中毒，促进菌丝生长。5、原种、栽培种的制作方法拌料装瓶（袋）（4/5量，下松上紧）打洞（孔径1cm深至瓶底）灭菌（1.5kgcm2，1.52h）冷却接种（接入黄豆大小一块）培养（2527）满瓶78d扩大成栽培种。6、杂菌检查（菌种检查） 杂菌：黄、红、绿、黑 死菌：补种二、菌种保藏菌种保藏的目的：保持菌种的优良性状；降低衰退速度。原理：降低菌种代谢活动。降低代谢活动方法：低温、干燥、缺氧等。、斜面低温保藏法方法：将培养好的斜面菌种，放入4冰箱内保藏保存期：36月适用范围：多数食用菌注：不适于草菇。由于草菇对低温的耐受力较差，其菌丝在5下易死亡，所以保藏草菇菌种的温度需提高至1012或在草菇斜面菌种上加34ml 10%甘油防冻。、石蜡封藏法（隔绝空气法）方法：用注射器注入灭菌的石蜡。注入量以高出斜面尖端1cm为宜，然后塞上棉塞或无菌橡皮塞，用蜡封好，直立保藏在冰箱或低温干燥处。（菌丝体与空气隔绝，降低其代谢活动，防止培养基干燥）保存期：6年适用范围；可用于保藏所有不宜用冷冻或干燥保藏的真菌。、担子孢子保藏法（干燥）食用菌的孢子，可用滤纸条、河砂、氯化硅胶作吸附剂，干燥后进行保存。方法：1、滤纸片保藏法：2、砂土管保藏法、冷冻、真空、干燥保藏法利用低温、干燥、缺氧等条件保存菌种，一般可保存10年左右。三、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理细菌污染：可根据细菌只发生在培养基表面，而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点，用无菌操作法敲破试管取出培养基，在培养基的底部挑取一小块带有菌丝的培养基，移植到另一试管中培养，可得到纯正的母种。覆盖培养：将熔化培养基冷却到40，倒在已污染细菌的斜面上，使之形成厚约20 cm的覆盖层，食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时，即可挑取转管纯化。2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？根据杂菌开始发生的部位，大致有以下几种污染原因：若杂菌同时在培养基的上、中、下部位发生，主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。若杂菌开始发生在接种块上，这很可能是母种或原种已经感染了杂菌；或者是由于接种工具消毒不严格，把杂菌带入。若杂菌先在培养基表面发生，这是由于接种过程中无菌操作不严而引起的。若杂菌是在接种后若干天才发生的，而且是先发生在瓶口往下挂的菌丝上，这说明杂菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原因是培养室湿度过大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。3、为什么母种不能多次转管移植？母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力，降低出菇率，甚至造成菌丝不孕而不能形成子实体。因此母种培育可以一次多培育几支试管，不要反复多次分离转管，以确保菌丝旺盛的生活力。4、优良菌种的标准是什么？各种食用菌菌种，既有特定的质量标准，也有共同的质量标准。这些共同的