个体差异性与性别相关性.doc

肝癌microRNA稳定性、个体差异性与性别相关性的分析【摘要】目的：分析肝癌microRNA稳定性、个体差异性与性别相关性。方法：选取52例肝癌患者及29例健康志愿者作为研究对象，收集内镜下肝癌患者的肝癌组织、癌旁正常组织活检标本及所有研究对象的血清样本，利用应用免疫组化 (SP) 法检测不同条件下肝癌组织、癌旁组织及血清样本的microRNA表达水平及稳定性；比较分析肝癌患者血清microRNA个体差异性与性别的相关性。结果：肝癌microRNA在不同温度、pH值及冻融次数等条件下均有扩增，具有抵抗降解及结构性质高度稳定；肝癌microRNA在肝癌组织的表达水平显著高于癌旁组织、血清及健康志愿者血清的microRNA表达水平（P0.05）。肝癌microRNA表达水平的个体相关性分析R0.998，P0.05，microRNA的个体差异性极小；肝癌microRNA在性别差异性表达中具有显著性的相关性，R2分别为0.998和0.997。结论：肝癌microRNA的结构性质稳定，其表达水平可特异性区别肝癌患者与健康志愿者，个体差异性较差及与性别无相关性，可作为肝癌诊治的监测指标。【关键词】肝癌；microRNA；稳定性；个体差异性；性别相关性【Abstract】Objective: To analyze mirnas stability of liver cancer, individual difference and gender.Methods: Selecting 52 patients with liver cancer and 29 cases of healthy volunteers as the research object, collect endoscopic hepatocellular carcinoma in patients with liver cancer tissue and normal tissue adjacent to carcinoma biopsy specimen serum samples and all the research object, by using immunohistochemical method (SP) test under different conditions of liver cancer tissue and normal tissue adjacent to carcinoma and the expression level of micrornas in serum samples and stability;Comparative analysis of the correlation of liver cancer patients serum mirnas individual diversity and gender.Results: The liver cancer mirnas in different conditions, such as temperature, pH value and the number of freezing and thawing are amplification, highly resistance to degradation and the nature of the structure stability;Liver cancer mirnas in cancer of the liver tissue of expression level was significantly higher than that of normal tissue adjacent to carcinoma, serum and healthy volunteers the expression level of micrornas in serum (P0.05).Liver cancer mirna expression level of the individual correlation R = 0.998, P0.05, and the individual differences of mirnas tiny;Liver cancer mirnas in gender differences in expression has significant correlation, R2 of 0.998 and 0.997 respectively.Conclusion: The liver cancer mirna structure properties of stability, and its expression level can specificity difference between liver cancer patients and healthy volunteers, individual difference is poor and has no impact on gender, can be used as a monitoring index of the diagnosis and treatment of liver cancer.【Key Words】 Liver cancer;Micrornas.Stability;Individual Differences;Gender correlation肝癌是指癌基因、抑癌基因及生长因子调控的粘膜上皮细胞增殖和凋亡平衡紊乱，导致肝脏或胆管上皮细胞、间叶细胞恶性分化的肿瘤；该病呈渐进性发展、多因素影响及病死率高1-2。目前分子生物学领域发现microRNA与肝癌的病变及诊断有关；因此，有必要从分子水平寻求诊断肝癌的肿瘤标记物，并研究其作用机制及标准化。microRNA作为内源性的单链 RNA，可直接促进其靶mRNA的降解或抑制其翻译表达，达到调控靶基因的转录及翻译表达。由于microRNA具有高度的特异性、时序性，调节癌基因及抑癌基因的平衡，在肿瘤的病发形成发挥重要作用3。杨桢4研究指出microRNA在肿瘤细胞的分化增殖、凋亡及转移等过程起到调控作用。对此，本文旨在分析肝癌microRNA稳定性、个体差异性与性别相关性。1资料与方法1.1一般资料选取52例肝癌患者及29例健康志愿者作为研究对象；对于52例肝癌患者，其中男性患者28例(53.85%)、女性患者24例(46.15%)；年龄范围26.578.7岁、平均年龄(56.55.5)；活检病理分型为肝细胞癌32例、胆管细胞癌16例、转移性混合癌4例。排除标准：合并心脑血管疾病、其它组织器官肿瘤、呼吸、免疫及内分泌系统疾病；临床资料不齐全或围术期死亡患者；具有肝肾移植术史及局部病灶栓塞放疗、放疗或消融治疗史。所有患者均符合中国抗癌协会肝癌专业委员会颁发原发性肝癌的临床诊断与分期标准5。1.2方法收集内镜下肝癌患者的肝癌组织、癌旁正常组织活检标本及所有研究对象的血清样本，利用应用免疫组化 (SP) 法检测不同条件下肝癌组织、癌旁正常组织及血清样本的microRNA表达水平及稳定性；比较分析肝癌患者血清microRNA个体差异性与性别的相关性。1.3阳性结果判定标准microRNA阳性反应染色位于细胞核；显微镜观察细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性信号。染色强度分为03分，(细胞质或细胞核无着色评为0分；浅棕色评为1分；棕色评为2分；深棕色评为3分)。细胞肝阳性率分为03分(无阳性细胞评为0分；小于30%评为1分；30%70%评为2分；大于70%评为3分)。染色强度与肝细胞阳性率的免疫组化 (SP) 法评分乘积总计分为06分，01分表明阴性(-)，26分表明阳性(+)；其中23分为(+)、4分为(+)、56分为(+)。1.4数据处理 采用SPSS12.0软件处理实验数据，计量资料使用t检验；计数资料使用2检验；P0.05为差异具有统计学意义。2结果2.1肝癌microRNA稳定性及表达水平分析肝癌microRNA在不同温度、pH值及冻融次数等条件下均有扩增，具有抵抗降解及结构性质高度稳定；肝癌microRNA在肝癌组织的表达水平显著高于癌旁组织、血清及健康志愿者血清的microRNA表达水平（P0.05）；详情见表1。表1：肝癌microRNA表达水平分析类别例数肝癌microRNA表达水平阳性率(%)2P-+肝癌组织5238152694.239.47a0.015癌旁组织52146141873.087.19b0.033肝癌血清5279152186.548.47c0.026健康者血清29272006.90注： a肝癌组织VS健康者血清、b癌旁组织VS健康者血清、c肝癌血清VS健康者血清。2.2肝癌microRNA个体差异性与性别相关性的分析肝癌microRNA表达水平的个体相关性分析R0.998，P0.05，microRNA的个体差异性极小；肝癌microRNA在性别差异性表达中具有显著性的相关性，R2分别为0.998和0.997。3讨论随着microRNA检验技术水平的提高，在肝癌组织中具有组织特异性，而付荣浩6研究指出microRNA的结构稳定，在肝癌患者血液中高度稳定。血清中含有大量的核苷酸代谢酶，但microRNA具有抵抗血清代谢酶的活性。邓治亮7研究发现microRNA外围具有复合体及滋养层微粒包裹，具有高度的结构稳定性。在本研究中肝癌microRNA在不同温度、pH值及冻融次数等条件下均有扩增，具有抵抗降解及结构性质高度稳定；表明microRNA的稳定性为血清microRNA发挥生物化活性提供前提保证。许多报道，在肝癌初期患者的肝组织microRNA的表达水平显著升高，microRNA的代谢过程异常活跃8-9。吴忱思10认为microRNA可作为判定肝癌肿瘤分级、治疗效果及预后的监测因子。在本研究中发现肝癌microRNA在肝癌组织的表达水平显著高于癌旁组织、血清及健康志愿者血清的microRNA表达水平；表明以microRNA作为肝癌的诊断指标具有临床可行性。存在文献报道，microRNA作为肝癌诊断指标的重复性较差，存在个体差异性和性别差异。但11研究指出肝癌microRNA表达水平的个体相关性分析R0.999，而本研究肝癌microRNA表达水平的个体相关性分析R0.998，P0.05；与李涛11研究相一致；同时，本研究中肝癌microRNA在性别差异性表达中具有显著性的相关性，R2分别为0.998和0.997；表明microRNA的个体差异性极小，不存在性别相关性；对于诊断肝癌具有较高的灵敏度及较强的特异性。综上所述，肝癌microRNA的结构性质稳定，其表达水平可特异性区别肝癌患者与健康志愿者，个体差异性较差及与性别无相关性，可作为肝癌诊治的监测指标。【参考文献】1李艳.肝癌microRNA稳定性、个体差异性与性别相关性评价D.浙江理工大学，2010.2王凤军.microRNA在乳腺肿瘤患者组织和血清中表达的变化和相关性D.浙江理工大学，2009.3王冲.MicroRNA研究热点的分析D.北京协和医学院，2012.4杨桢.microRNA相关的生物信息学与进化分析D.复旦大学，2011.5中国抗癌协会肝癌专业委员会.原发性肝癌的临床诊断与分期标准J.中华肝脏病杂志，2001，9(6)：324-325.6付荣浩.基于聚类分析的microRNA与疾病关联关系分析D.济南大学，2012.7邓治亮,孙建,区应亮等.原发性肝癌术后早期复发密切