生化 蛋白质.doc

名解：1 等电点（pI）: 在某一pH环境下，氨基酸主要以两性离子（兼性离子）的形式存在。解离出的阴离子和阳离子数目和趋势相等该溶液pH称为该氨基酸的等电点.2 肽平面：肽键四个原子和两个C组成一个平面。3 结构域：在二级或超二级结构基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对独立的紧密的球状实体称为结构域。4 超二级结构：蛋白质分子中的多肽链在三维折叠中往往形成有规则的二级结构聚集体，在球蛋白中充当三级结构的构件。常见的有：、等。5 蛋白质变性：天然蛋白质受物理或化学因素的影响后，空间构象发生变化，使其失去原有的生物活性，并伴随着物理化学性质的改变，这种作用称为蛋白质的变性。6 分子病：基因突变导致蛋白质一级结构改变而产生的遗传病。称之为分子病。7 亚基：具有独立三级结构的多肽链单位，称为亚基或亚单位，亚基一般是一条多肽链。8 蛋白质：分子量在5000道尔顿以上的多肽。9 N-末端：肽链中有游离氨基的一端。10 C-末端：肽链中有游离羧基的一端。11 盐析：在蛋白质的水溶液中，加入大量高浓度的强电解质盐如硫酸胺、氯化钠、硫酸钠等，使蛋白质从溶液中析出，称为蛋白质的盐析。12 透析法：把混有小分子杂质的蛋白质样品溶液装在用玻璃纸，火棉纸等合成材料制成的半透膜透析袋里，然后放入流动的（或经常更换的）蒸馏水中，袋内的小分子杂质会不断扩散到半透膜外，直至完全排净，而蛋白质则留在袋内得到纯化。1.20种氨基酸的结构及是三个字母缩写；会写（Asp,Glu,Gly,Ala,Lys） 教材P342 氨基酸的两性解离及PI计算。蛋白质的紫外吸收特性。蛋白质与氨基酸相似，也具有两性电离的性质。1、末端氨基和羧基，2、侧链上含有可解离的基团3、辅助因子 紫外吸收性质： 20种蛋白质氨基酸在可见光区域均无光吸收，在远紫外区（220nm）均有光吸收。R基团含有芳香环共轭双键系统的色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸，在近紫外区（220nm300nm）有光吸收，其最大光吸收值为279nm，278nm和259nm.蛋白质由于含有这些氨基酸，一般光吸收在280nm波长外，因此可用紫外分光光度法方便地测量蛋白质的含量。3 蛋白质的二三四级结构 蛋白质二级结构主要类型有：-螺旋、-折叠、-转角、无规卷曲。(1) -螺旋:多个肽键平面通过-碳原子旋转，主链绕一条固定轴形成螺旋构象（ -螺旋几乎都是右手）。每3.6个氨基酸残基上升一圈，相当于0.54nm。相邻两圈螺旋之间借肽键中CO和N-H形成许多链内氢健，即每一个氨基酸残基中的NH和前面相隔三个残基的CO之间形成氢键，这是稳定-螺旋的主要键。肽链中氨基酸侧链R，分布在螺旋外侧，其形状、大小及电荷影响-螺旋的形成。（见课件第三章第三节）(2) -折叠(-pleated sheets)又称-片层、-结构，其结构要点如下：多肽链呈锯齿状（或扇面状）排列成比较伸展的结构；两条或多条多肽链侧向聚集（或一条多肽链的若干肽段），通过氢键形成-折叠相邻两个氨基酸残基的轴心距离为0.35nm（反平行式），0.325nm （平行式）侧链R基团交替地分布在片层平面的上下方，片层间有氢键相连；有平行式和反平行式两种。(3) -转角:又称-弯曲，-回折或发夹结构-C-N-CH-C-2-N-（4）无规卷曲：是指不能被归入明确二级结构的多肽区段。蛋白质的三级结构在二级结构基础上形成的三维结构称为三级结构，大多数蛋白质的三级结构为球状或近似球状。在三级结构中，大多数的亲水的R侧基分布于球形结构的表面，而疏水的R侧基分布于球形结构的内部，形成疏水的核心。 三级结构主要靠次级键（非共价键，noncovalent）维系固定，主要有： 氢键、离子键（盐键）、疏水的相互作用（疏水键）、范德华力、配位键，另外二硫键（共价键）也参与维系三级结构。P43蛋白质的四级结构亚基在空间的排列方式，称为四级结构 P514 蛋白质的水解反应（酸、碱、酶） （1）.酸水解条件：常用硫酸或盐酸进行水解。一般用6mol/LHCl，4mol/L H2SO4煮沸回流1624小时，或加压于120水解2小时。优点：可蒸发除去盐酸，水解彻底，终产物为L-氨基酸，产物单一，无消旋现象。缺点：色氨酸破坏，并产生一种黑色的物质：腐黑质，水解液呈黑色。同时天冬酰胺和谷氨酰胺的酰胺基被水解下来生成Asp、Glu。（2）. 碱水解条件：4mol/L Ba(OH)2或5mol/L NaOH煮沸10-20小时。优点：水解彻底，色氨酸不被破坏，水解液清亮。缺点：产生消旋产物，破坏的氨基酸多，一般很少使用。（3）. 蛋白酶水解条件：蛋白酶如胰蛋白酶、糜蛋白酶，常温3740， pH值58 。优点：氨基酸不被破坏，不发生消旋现象。缺