海洋生态学实验.doc

厦门大学海 洋 生 态 学 实 验 讲 义 厦门大学海洋系海洋生态学教学组 编一九九九年七月实验一、温度对海洋动物发肓速率和孵化率的影响一、 实验目的：、 测定不同温度下海洋动物的发肓速率和孵化率，总结某些特定动物发肓的生物学零度和热常数。、 掌握控温仪、恒温水浴锅、光照培养箱等仪器的使用方法。二、 原理：参见海洋生态学第二章。 根据有效积温法则，生物胚胎发育所需总热量基本上是一个常数，即 K = N（TC），其中K为热常数，即完成某一发育阶段所需的总热量，N为完成某一发育阶段所需的时间，T为发育期的平均温度，C为生物学零度。因此，在适温范围内，提高温度可缩小胚胎发育时间。三、仪器与设备：、 光照培养箱 2、控温仪或恒温水浴锅 3、充气机 4、1000ml烧杯等玻璃仪器四、 实验材料 ：卤虫（Artemia spp.）又名丰年虫、丰年虾等，广泛分布于世界各大陆的盐湖、盐田等高盐水域，其适宜盐度范围为20100，适宜温度范围为2530。卤虫休眠卵（自天然水域捞取后经分离、干燥后制成商品）孵化的无节幼体是水产动物培养初期的优良饵料，其成体亦可作为水产动物的饵料。正常卤虫休眠卵在适宜条件下，一般15小时左右开始孵化，24小时孵化率达90%以上。 五、 实验步骤 、 在12只盛有天然过滤海水的1000ml烧杯中加入一定数量（如500粒）卤虫休眠卵，以小型充气机适量充气，使休眠卵均匀悬浮在海水中，并供以连续关照，强度约1000Lx。将烧杯分为4组，分别在15、20、25和30（以光照培养箱、控温仪或恒温水浴锅控制水温）温度下孵化。、 孵化15小时后，每隔1小时对幼体孵化状况进行观察，并在18、21、24小时分别从4个温度组中取1样品固定计数，计算孵化率。温 度（）最早孵化时间（小时）18小时孵化率（%）21小时孵化率（%）24小时孵化率（%）15202530、 以孵化率达90%时的孵化时间作为卤虫胚胎发育的所需时间，根据有效积温法则，计算卤虫发育的生物学零度和热常数。实验二、温度对海洋动物呼吸速率的影响一、 实验目的：、 测定海洋动物在适温范围内呼吸速率，分析与温度的相互关系。、 学会温克碘量法测定海水溶解氧含量。二、 原理：海洋动物的新陈代谢速率直接受温度的影响，在适宜温度范围内，当温度升高时，新陈代谢速率随之加快，呼吸率（耗氧率）也相应增加。温度与生物代谢速率的关系可用公式Q10=r2/r1 描述。式中Q10表示温度每升高10时代谢速率的变化，r1和r2分别表示温度在t1和t2 时的耗氧率。三、 仪器及设备：、 自动滴定管 2、 磁力加热搅拌器 3、控温仪或恒温水浴锅 4、恒温培养箱 5、容量瓶等玻璃仪器四、药品与试剂： MnCl2 、KI、 NaOH、H2SO4、Na2S2O3、KIO3、淀粉等五、实验材料： 花蛤、对虾等。六、 实验步骤：本实验拟在2个温度组下进行，每一温度组又分试验组和空白对照组，共4组，每组含样品3个，分别为起始、培育1小时和培养2小时（见下表），简要步骤如下：1、取容量1L试剂瓶12只，用取自实验动物栖息水域的过滤海水（预先充气使含氧量接近饱和）注满，在2个试验组水瓶中小心放入个体大小相近、健康状况良好的对虾12只（起始样除外），用橡皮塞小心密封（注意不能出现水泡）。分不同温度组在光照培育箱和恒温水浴锅中恒温培养，并给以适宜关照。、 每组分别在起始、1小时和2小时时以温克碘量法（方法参照海洋调查规范）测定水瓶中溶解氧的含量，填入下表。测量完成后将瓶中对虾取出，蒸馏水冲洗后用滤纸吸干体表水分称重。 时间 数 值 温 度起 始1 小 时2 小 时20试验组 20对照组30试验组30对照组3 数据计算：各温度组实验前后的溶解氧之差扣除空白对照组氧消耗量后所得值即为该段时间内实验动物的耗氧量，各瓶的耗氧量与瓶中实验动物体重之商则为单位体重耗氧率。将所得数据代入上述公式，计算Q10。七、 思考题：试分析实验中可能出现的影响因素。实验三、浮游植物的培养与种群数量增长曲线一、 实验目的： 了解海洋浮游植物的培养方法，并根据细胞数量增长速率绘制增长曲线（逻辑斯谛增长曲线）。二、 原理：见海洋生态学第三章第三节。三、 仪器与设备：、显微镜 、浮游植物计数框或血球计数板 、三角烧瓶 、手提式压力蒸汽消毒器四、 药品与试剂： NH4NO3 、KH2PO4 、尿素 、维生素12等五、 实验材料：实验室常用培养种类有小球藻、扁藻、球等鞭金藻、中肋骨条藻等。1、小球藻（Chlorella spp.） 属绿藻门，海产小球藻对盐度的适应范围较广，在海洋中广泛分布，在港湾、河口的半咸水中也能生存。生存温度1036，最适温度25左右，最适光强10000Lx，适宜pH值68。小球藻在水产养殖中常用于轮虫的培养。2、 扁藻（Platymonas spp.） 属绿藻门, 其中亚心形扁藻较为常见。最适盐度范围3040，最适光强范围500010000Lx，最适温度范围2028，对低温的适应性强。一般在pH值69范围内都能生长繁殖，最适pH值为7.58.5。扁藻是水产养殖贝、虾类幼体的良好饵料。3、 球等鞭金藻（Isochrysis galbana） 属金藻门，适温范围很广，1035都能正常繁殖，最适温度为2530，最适盐度范围1030，生长适应光强范围100010000Lx，最适光强范围600010000Lx。球等鞭金藻是鱼、虾、贝类幼体的良好饵料。4、 中肋骨条藻（Skeletonema costatum） 属硅藻门。广温、广盐性种类，分布极广。最适盐度范围2530，生长适温832，最适温度范围2025，最适pH值为7.58.5。中肋骨条藻是培养对虾幼体的主要饵料之一。六、实验步骤： 以小球藻为例：、 培养器具的准备： 以250ml三角烧瓶为培养瓶，洗净后用手提式压力蒸汽消毒器消毒，注入经煮沸消毒过的天然过滤海水，加入f/2培养液。、 接种培养： 在培养瓶中接种一定数量生长状况良好的小球藻，使水体呈浅绿色，以干净滤纸和橡皮筋扎住瓶口后于适温下培养。、 计数： 自接种时开始，每隔24小时定时计数，计数时先将藻液充分摇匀，取样后以血球计数板或浮游植物计数框于显微镜下计数，直至其密度不再上升。、 数据处理：以培养时间（t）为横坐标，种群数量（Nt）为纵坐标，绘制种群数量增长曲线。 附：f/2培养液配方： 硝酸钠(NaNO3) 75毫克 磷酸二氢钠(NaH2PO4) 4.4毫克 f/2微量元素溶液 1毫升 f/2维生素溶液 1毫升 海水 1000毫升 硅酸钠(Na2SiO3) 50毫克（硅藻培养时使用）附：f/2微量元素溶液配方： 硫酸锌（ZnSO44H2O） 23毫克 硫酸铜(CuSO45H2O) 10毫克 氯化锰(MnCl24H2O) 178毫克 柠檬酸铁(FeC6H5O75H2O) 3.9克 钼酸钠(NaMoO42H2O) 7.3毫克 乙二铵四乙酸钠(Na2EDTA) 4.35克 六水氯化钴(CoCl26H2O) 12毫克 纯水 1000毫升附： f/2维生素溶液配方： 维生素B12 0.5毫克 维生素H(生物素) 0.5毫克 维生素B1 100毫克 纯水 1000毫升实验四、光照强度与浮游植物光合作用速率的关系一、实验目的：、 了解光照强度与浮游植物光合作用（产氧量）的关系，掌握用黑白瓶氧含量与光合作用熵计算总产量与净产量。、 测定有机碳积累速率的示范或录相带。、 学会水下照度计的使用方法。二、 原理：见海洋生态学第二章第三节和第六章第一、二节。、 光强与浮游植物光合作用速率的关系：在低光照条件下，光合作用速率与光强成正比，随光强增加，光合作用速率逐渐达最大值，这时光强称为饱和光强(IK) ，光强继续增加，光合作用因光照过度而受抑制。不同种类的饱和光强值不同。因此，浮游植物在适宜光强范围内，光照越强，光合作用速率越快，初级生产力越高。、 光合作用速率的测定（黑白瓶测氧法）：浮游植物光合作用可用下式简单表示： CO2H2O(CH2O)O2在一定时间内，浮游植物在光合作用过程中吸收的CO2、释放的O2和生成的有机物之间存在一定比例，因此可由产氧量间接估算光合作用产量。光合作用熵(PQ)：指光合作用释放的O2分子数与所还原CO2分子数的比值。光合作用产物不同，PQ值不同，合成碳水化合物的PQ值为1，脂类为1.4，以NH4-N为氮源合成蛋白质时， PQ值为1.05，以NO3-N为氮源则为1.6。PQ平均值为1.25。由此可得下式： P(mgC/Lh)= 3/8 O2(mg/Lh)1/PQ。黑白瓶测氧法：适用于生产力水平高的水域（如养殖水域）和实验室培养。将已知氧含量的水样(A)分别置于透光(白瓶B)和不透光(黑瓶C)的培养瓶中在相同条件下培养一定时间，白瓶因光合作用而含氧量上升，黑瓶则因呼吸作用无光合作用而含氧量减少，因此总初级产量PBC,净产量PnBA。三、 仪器与设备：、 水下照度计 2、日光灯管组（设置不同光强） 3、自动滴定管 4、 磁力加热搅拌器 5、碘量瓶 6、 容量瓶等玻璃仪器 7、手提式压力蒸汽消毒器四、 药品与试剂： MnCl、KI、NaOH、H2SO4、Na2S2O3、KIO3、淀粉等。五、 实验材料： 骨条藻、扁藻、小球藻、金藻等。六、 实验步骤： 1、接种：以250ml碘量瓶为培养瓶，洗净消毒后加入经煮沸消毒过的过滤海水，加适量培养液后接种一定数量生长状况良好的浮游植物（见实验三），小心封口（无气泡）。、 培养：在适宜的温度、盐度、pH值等培养条件下，将培养瓶（包括白瓶和黑瓶）分为34组，以日光灯管组为光源，设置不同光强，使培养种类在不同光照条件（弱光至强光）下进行培养。、 数据测定与处理：分别在起始和2小时后以温克碘量法测定各组培养瓶中的氧含量，光强用水下照度计测定，所得数据填入下表。并根据上述公式计算总生产量和净生产量。并以光照强度为横坐标，光合作用速率为纵坐标作图，了解光照强度与浮游植物光合作用速率的相互关系。 项目 数据光强起始氧含量(mgO2/L)白瓶氧含量(mgO2/L)黑瓶氧含量(mgO2/L)总生产量(mgC/Lh)净生产量(mgC/Lh)七、思考题：试分析黑白瓶测氧法的优缺点及主要影响因素。实验五、光照强度对海洋动物行为的影响一、 实验目的：、 了解在不同光照强度下海洋动物的正趋光性和负趋光性。、 了解特定海洋动物在不同发肓期趋光性的变化。二、 原理： 趋光性是指动物对光刺激产生定向运动的特性，包括正趋光性和负趋光性。不同种类海洋动物的趋光特性各不相同，有的趋强光，有的趋弱光，也有的并不趋光。海洋动物的趋光性除与种类相关外，还受到各种内部因素的影响。通常幼体与成体相比趋光性更为明显，雌雄个体的趋光性也有所差别。另外，外界环境条件（水温、食物、光质、光强）也对海洋动物的趋光行为有重要影响。一般在适宜光强范围内，海洋动物呈正趋光性，光线太强则呈负趋光性。三、 仪器与设备 ：、 水下照度计 2、 日光灯组、 充气机 4、培养缸等玻璃仪器四、实验材料： 各期对虾幼体、卤虫、轮虫等。五、实验步骤： 、 以1000ml烧杯为培养容器，将不同发育阶段（无节幼体、溞状幼体、糠虾幼体和仔虾）的斑节对虾或日本对虾各期幼体以适当数量投入烧杯分组培养。、 以日光灯组为光源，由弱至强设置光照梯度，观察各期幼体在相同光强下趋光特性的差异以及同期幼体在不同光强下趋光性的变化特征，估计各期幼体的最适光强范围。、 以卤虫、轮虫为培养对象，观察在不同光强条件下的反应。比较卤虫、轮虫、对虾趋光特性的差异。实验六、盐度对海洋动物存活率的影响一、 实验目的：、以不同盐度梯度和变化速率进行实验，了解广盐性和狭盐性海洋动物对盐度的适应能力。 2、掌握盐度与比重的相互关系，学会海水比重、盐度测定方法。二、 原理：盐度是海水总含盐量的度量单位，海水盐度最低可小于0.5（河口），最高可超过40（红海）。受渗透压调节能力的限制，海洋生物对海水盐度的变化有一适应范围，根据适应范围的大小，可分为狭盐性生物和广盐性生物二类。狭盐性生物对盐度变化很敏感，只能生活在盐度稳定的环境中，广盐性生物对海水盐度的变化有很大的适应性，能忍受海水盐度的剧烈变化。不同种类海洋生物对盐度变化适应能力的差异由遗传所决定，不同种类、同一种类不同发育阶段和雌雄个体适应能力也不同。另外，水温、溶解氧等其他环境因子是否处于适宜范围也影响海洋生物对盐度变化的适应能力。三、 仪器与设备 ：、 折射盐度计 2、 比重计 3、 充气机 4、 培养缸等玻璃仪器 5、托盘扭力天平四、 药品与试剂：NaCl、 MgSO4、 NaHCO3 等。五、 实验材料： 对虾、贝类等。六、 实验步骤：、 以1000ml烧杯为培养容器，以取自培养动物栖息水域的天然过滤海水为母液，用蒸馏水和NaCl等试剂配制成盐度范围040、盐度梯度为5的培养液，同时使水温等其他环境因子保持在培养动物的适宜范围内。、 每只烧杯中分别放入对虾仔虾幼体约10只，并加入适量丰年虫无节幼体为饵料，适量充气培养。试验期间注意观察各培养瓶中对虾幼体的活动和存活情况，并于24小时后计算各试验组的死亡率。确定对虾幼体的耐受极限（试验期内有50的个体死亡）和适宜生存的盐度范围。盐 度（）0510152025303540死亡率（） 3、以耐受极限为最终培养盐度，设置不同的盐度变化速率，分别以每小时2和5的变化梯度，从天然海水的盐度增加（减少）至耐受极限，观察不同盐度变化速率下对虾幼体的活动和存活状况。实验七、浮游植物种间竞争一、 实验目的：通过不同种类浮游植物混合培养，观察不同种群增长速率的差异、混合种群在生长竞争中的种类更替过程，分析环境因子如营养盐等在浮游植物种间竞争中所起的作用。二、 原理：见海洋生态学第四章第二节。将单独培养在某一特定环境中均能正常生活的几种浮游植物混合培养在相同环境中，由于存在对空间、营养盐等的竞争，不同种类生长状况不同。竞争力强、繁殖快的种类将因数量优势而逐渐淘汰竞争力弱、繁殖慢的种类，从而出现明显的种类更替。三、仪器与设备 、显微镜 、浮游植物计数框 、温控仪 、生化培养箱 、折射盐度计 、托盘天平 、酸度计 8、手提式压力蒸汽消毒器四、药品与试剂： NaCl、 MgSO4、KH2PO4、NH4NO3、尿素等。五、实验材料： 扁藻、小球藻、金藻、三角褐指藻、骨条藻、角毛藻等。六、实验步骤：1 培养器具的准备：以500mL或1000mL的三角烧瓶为培养瓶，洗净后用手提式压力蒸汽消毒器高压灭菌待用。2 培养条件：培养环境（温度、盐度、光强、pH值等）的设置应使所选种类在单独培养时能正常生长，在此基础上探讨营养盐含量对浮游植物种间竞争的影响：可通过添加人工海水稀释和添加不同体积的f/2培养液设置低、中、高三个营养盐梯度。3 接种：选择34种上述培养材料混合，使各种群数量基本相等，将混合种群以相等体积接种于各培养瓶中。同时将各种群以相近数量分别接种于三个营养盐梯度的培养瓶中以作对照。4 计数：自接种时开始，每隔24小时定时计数，计数时先将藻液充分摇匀，取样后以血球计数板或浮游植物计数框于显微镜下计数，数据填入下表。5 数据处理：根据计数结果，了解种类更替状况，并以培养时间（t）为横坐标，种群数量（Nt）为纵坐标，绘制各种群单独培养和混合培养时的数量变化曲线，对所选种类的竞争试加分析。 种群 密度时间混 合 培 养单 独 培 养ABCDABCD起 始24 小时48 小时72 小时96 小时实验八、浮游植物数量（密度）和生物量的调查一、 实验目的：、 通过浮游植物细胞密度与单位水体叶绿素a（Chla）含量的测定，了解浮游植物数量和生物量的表示方法，并对不同粒径浮游植物加以比较。、 学会使用采水瓶、水样固定、浓缩及浮游植物计数框的方法，掌握叶绿素的测定方法。二、 原理：见海洋生态学第六章第一节。生物量是指某一特定时间、某一特定范围内存在的有机体的量。浮游植物是海洋生态系统的初级生产者，而初级生产水平与叶绿素a含量存在密切关系，因而往往用叶绿素a含量来表示浮游植物的生物量。海洋生态系统的种类组成结构以及能流、物质流特征与初级生产者的粒径大小有密切关系。不同类型海区初级生产者的粒径组成存在很大差异，了解某一特定海区初级生产者的粒径组成，有助于深入研究海区的新生产力水平、营养平衡状态等结构、功能特征。三、仪器与设备：、分光光度计 、显微镜 、浮游植物计数框 、采水瓶 、电动吸引器 、离心沉淀器 、抽滤器 、微孔滤膜 、核孔滤膜 10、冰箱 11、20m孔径筛绢四、药品与试剂： 丙硐、甲醛、路戈氏碘液、MgCO3等。五、实验步骤：1 采样：选择完站位后，以500mL、或1000mL采水瓶采取一定水层（也可几个水层比较）的水样。2 水样处理：将所取水样分别以0.45m微孔滤膜（叶绿素a总量）、2m核孔滤膜（2m孔径叶绿素a含量）以及先经20m孔径筛绢过滤后再以2m核孔滤膜（220m孔径叶绿素a含量）过滤，以90%丙酮溶解滤膜后冰冻过夜。3 数据测定：滤膜冰冻24小时后取出离心，取上清液于分光光度计测定叶绿素a含量（方法见附页），将所得不同孔径叶绿素a含量及占叶绿素a总量比例等数据填入下表。 孔 径数 水层 值2m220m叶绿素a总量表层数 值含量比例100%底层数 值含量比例100%附：叶绿素a含量测定方法（分光光度法）：A 检测限：0.02mg/m3。B 方法概述：已知体积的海水以玻璃纤维过滤器过滤，用90丙酮将色素从滤器上萃取出来，其浓度以分光光度法测定。C仪器和设备： 、分光光度计 、抽滤器 、电动吸引器 、采水瓶 、微孔滤膜 、离心沉淀器 、冰箱 、离心管D取样方法和贮存：将0.510升海水经0.45m微孔滤膜过滤。开始过滤海水时，加几滴碳酸镁悬浮液于海水中，以防止滤膜变酸性。滤膜经风干、转移、折叠放在干燥器中。如果不能马上进行分析，在20下至少可保存30天。滤膜应对半析用一张普通滤纸垫着，用另一张滤纸紧固以便保存。E试剂：190丙酮量取100ml蒸馏水于1升的烧瓶中，并用分析纯的丙酮加到1000ml。该试剂装于盖密的瓶中，保存在暗处。2碳酸镁将约1克细粉末状的MgCO3加到100ml蒸馏水中，装于100ml洗瓶中，使用前用力振摇，加几滴即可。F实验步骤1海水样品倒人带有过滤膜的过滤器中，在下1/2大气压真空度下过滤样品。2在海水过滤时，加几滴（35滴）碳酸镁溶液到海水中。3抽气使过滤膜完全干燥，保存（D）。如果需要也可萃取。4将滤膜转移到 10 mL离心管中，加10mL90丙酮到管中，充分振摇。置于暗处过夜（最好冷冻）。5室温下将各离心管离心510分钟。离心时间长短取决于离心机的型号和要求得到溶液的清澈程度（10cm光程时在750urn处的消光值应低于0.05）。6倾倒上清液到10cm光程的分光光度计的液池中，并在以下波长下连续测量消光值（样品应为室温，以避免湿气蒙在光电管上）。波长：750，664，647，630，510和480nrn（如果仅需要测定叶绿素，那么，510和480 nrn就不必测定。 7从664，647和630 nrn的消光值减去750 nrn的消光值，以校正微粒浊度空白的消光值（510 nrn的消光值以减去 2750nm消光值校正，480 nrn吸光值以减去3750nm消光值校正）。 8用下面各式计算原海水样品中色素的含量。 叶绿素 （Ca）Chl.a = 11.85 E6641.54 E647一0.08E630 （Cb）Chl.b = 21.03 E647 5.43 E664 2.66E630 （Cc）Chl.C = 24.52 E630一l.67 E6647.60E647式中，E是上述不同波长下所测的消光值（以750 nrn读数校正）。Ca、Cb和Cc为叶绿素的含量（如果用 1cm光程液池，以 gml表示），即： mg Chl./m3 = 式中，n为丙酮毫升数（10ml），V是过滤海水体积（升），C分别代表上述Ca，Cb和Cc三种叶绿素（注；ugL = mgm3）。实验九、群落多样性的测定（结合教学实习）一、 实验目的：、 通过对教学实习采样标本（底栖生物或浮游生物）的鉴定，分析群落物种多样性。、 掌握物种多样性指数的计算方法。二、原理：某一群落的物种多样性指群落中现存物种的数目（即物种的丰度）和物种的相对多度（即均匀度）。生态学上常用辛普森多样性指数及香农威弗指数来表示物种多样性。详见海洋生态学第五章第二节。 辛普森多样性指数：D = 1 s：物种数 Pi：第i种个体数 香农威弗指数：H = s：物种数 Pi：第i种个体数三、仪器与设备 ： 、显微镜 、解剖镜 、采水瓶 、取样框 5、铲子 6、镊子四、药品与试剂： 甲醛、 路戈氏碘液等。五、实验步骤：1取样：（1） 浮游植物取样：用采水瓶分别于正常海区和污染海区采取一定水层、一定体积的水样，加甲醛或路戈氏碘液固定后于相应体积的量筒中沉淀浓缩。（2） 底栖生物取样（以岩石相附着生物为例）：选择有代表性的区域，以25cm25cm或50cm50cm取样框对高、中、低潮区的生物群落覆盖取样。2种类鉴定和计数：浮游植物样品是将浓缩后的水样混匀后，用浮游植物计数框于显微镜下进行种类鉴定（i = 1s）并计数每个种类的数量（PiPs）。附着生物样品可直接在现场于取样框中确定种类数和各种的个体数，不能在现场鉴定的种类可用铲子或镊子取下后带回实验室鉴定。3数据计算和分析：将所得物种数和物种个体数分别代入上述公式，计算物种多样性指数。并根据生态学原理试析不同海区浮游植物群落或岩石相高、中、低潮区生物群落物种多样性程度差异的原因。实验十、海洋动物的氮排泄速率一、 实验目的：、 了解海洋动物氨氮排泄速率与环境因子的相互关系。、 掌握海水主要营养盐含量的测定方法。二、原理：海洋生态系统氮营养盐的再生与海洋动物的新陈代谢有密切关系，海洋动物的代谢产物有相当部分是以氨的形式直接释放到环境中去，因此可通过测定周围环境中氨氮含量的变化了解海洋动物氨氮排泄速率。同时由于海洋动物的新陈代谢速率与环境因子（特别是温度）存在密切关系，因此测定不同环境条件下海洋动物氨氮排泄速率有助于了解不同环境条件下氮营养盐的再生速率的差异。三、仪器与设备： 、分光光度计 、冰箱 、电热恒温培养干燥二用箱 、电动吸引器 、抽滤器 、自动定量加液器 、温控仪 、康氏振荡器 、亚沸石英蒸馏器 10、恒温水浴锅 11、培养缸等玻璃仪器四、药品与试剂 ： NH4Cl、 NaClO、 KBr、 KBrO3、 HCl、 NaOH、 Na2S2O3、 KI、 氯仿、 磺胺、 盐酸、 苯酚、亚硝基铁氰化钠等。 五、实验材料： 贝类、虾类等。六、实验步骤：1 培养条件（以对虾为例）：将某一阶段的对虾幼体，以适当数量密闭培养于1000mL培养瓶中，根据所选材料的适温范围，设置23个温度梯度（如10、20、30），同时每个温度组都设置相应空白对照组（也可在相同环境条件下比较不同阶段幼体的差异）。2 数据测定：分别于实验初始和培养2小时后取水样，0.45m滤膜过滤后以次溴酸钠氧化法或靛酚蓝法（详见海洋调查规范）测定水样中氨氮含量，根据培养前后水样中氨氮含量差别计算氨氮排泄量。同时实验结束后收集培养材料，测定总重量（湿重或干重）。3 数据处理及分析：根据所得数据以下式计算个体氨氮排泄速率VE和单位体重氨氮排泄速率VE，结果填入下表，并比较分析不同温度条件下对虾幼体氨氮排泄速率的差异。个体氨氮排泄速率VE = 单位体重氨氮排泄速率VE= 项目 数值温度初始浓度（g/L）培养后浓度（g/L）总重量（mg）VE（g/h个）VE（g/ hmg）10 20 30 实验十一、海洋动物的磷排泄速率一、 实验目的：、 了解海洋动物磷排泄速率与环境因子的相互关系。、 掌握海水中主要营养盐含量的测定方法。二、原理：参见实验十。海洋生态系统磷营养盐的再生与海洋动物的新陈代谢有密切关系，海洋动物的代谢产物有相当部分是以磷酸盐的形式直接释放到环境中去，因此可通过测定周围环境中磷酸盐含量的变化了解海洋动物。海洋动物的磷排泄速率除与环境因子（特别是温度）存在密切关系外，不同生活阶段也存在显著差异。三、仪器与设备： 、分光光度计 、冰箱 、电热恒温培养干燥二用箱 、电动吸引计 、抽滤器 、亚沸石英蒸馏器 、温控仪 、恒温水浴锅 、培养缸等玻璃仪器 四、药品与试剂： KH2PO4、H2SO4、钼酸铵、抗坏血酸、酒石酸锑钾等。五、实验材料：贝类、虾类等。六、实验步骤：1 培养条件（以对虾为例）：将某种对虾的不同阶段幼体（溞状、糠虾、仔虾幼体），选择相同的适宜环境条件（温度、盐度、光照等），以适当数量密闭培养于1000mL培养瓶中，同时每个阶段幼体都设置相应空白对照组进行比较（也可根据所选材料的适温范围，设置23个温度梯度，以比较不同环境条件下同一阶段幼体磷排泄速率的差异）。2 数据测定：分别于实验初始和培养2小时后取水样，0.45m滤膜过滤后以磷钼蓝法（详见海洋调查规范）测定水样中活性磷酸盐含量，根据培养前后水样中活性磷酸盐含量差别计算磷排泄量。同时实验结束后收集培养材料，测定总重量（湿重或干重）。3 数据处理及分析：根据所得数据以下式计算个体磷排泄速率VE和单位体重磷排泄速率VE，结果填入下表，并比较分析不同幼体期对虾幼体磷排泄速率的差异。个体磷排泄速率VE = 单位体重磷排泄速率VE= 项目 数值幼体期初始浓度（g/L）培养后