三种检测孕妇红细胞血型IgG抗A(B)效价方法的比较.doc

三种检测孕妇红细胞血型IgG抗A(B)效价方法的比较【关键词】 红细胞血型,微柱凝胶,抗球蛋白实验,凝聚胺【摘要】 目的 比较微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法在检测O型孕妇红细胞血型IgG抗A(B)效价差异及方法的灵敏度。方法 微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法检测102例O型孕妇血清IgG 抗A(B)效价，经配对t检验和2检验，比较微柱凝胶法与其他两种方法检测结果的差异。结果 微柱凝胶法、抗球蛋白法、凝聚胺法检测102例O型孕妇IgG 抗A(B)抗体效价均值分别是85.7、37.6、43.4，前者比后两者分别高2.28和1.97倍；检出IgG抗A(B)阳性百分率分别为76.5%、37.2%、44.6%,前者阳性率明显高于后两者，分别经配对t检验和2检验,有显著性差异(P均0.001)。但微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法检测结果有相关性（r分别为0.9035和0.8901，P均0.001）。另外，以经典抗球蛋白法IgG抗A(B)效价64为临床意义决定值，根据回归方程计算，理论上微柱凝胶法临床意义决定值的效价为138。结论 微柱凝胶法比抗球蛋白法、凝聚胺法具有更高的灵敏度，且实验操作简便、快速，更适合于实验室内的广泛应用；但因灵敏度过高，需对其决定值进行界定。【关键词】 红细胞血型 微柱凝胶 抗球蛋白实验 凝聚胺 血型系统母体高效价红细胞血型IgG抗A(B) 抗体能引起新生儿溶血病（HDN），IgG抗A(B) 抗体效价64时，其母婴血型不合胎儿有可能发生ABO HDN，发病率与母体IgG抗A(B)效价呈正相关1。目前,检测红细胞血型IgG抗A(B) 抗体最常用的方法是传统的抗球蛋白试验,近年来又发明了凝聚胺法和微柱凝胶法。为了比较这三种方法的优缺点，我们进行了如下对比研究。1 材料和方法 1.1 仪器与试剂 微柱凝胶8孔卡，西班牙戴安娜全自动血型系统（WADIANA COMPACT），由北京斑珀斯技贸有限公司提供；抗球蛋白试剂、巯基乙醇、标准A、红细胞血球均由上海输血技术有限公司提供；凝聚胺由珠海贝索生物技术有限公司提供。1.2 标本来源 102例标本血清均来自我院门诊和住院待产孕妇，孕妇为O型，丈夫为A或B型，年龄2332岁,平均28岁，其中丈夫A型56例，B型 46例。1.3 方法1.3.1 标本处理 取受血者血清0.4ml 加巯基乙醇(2-Me)应用液0.4ml，混和，将试管口用橡皮塞塞紧，置37水浴2h,吸经2-Me处理的血清0.2ml用生理盐水作18、116、132、164、1128、12561512倍比稀释。1.3.2 方法 1）微柱凝胶法法：吸取上述倍比稀释液由全自动血型系统完成，结果以自动判读“1”的最高稀释度为抗体效价。2）抗球蛋白法和凝聚胺法，均参照全国临床检验操作规程和试剂盒说明书进行操作。显微镜观察到“1”的最高稀释度为抗体效价。以临床上有意义的IgG抗A(B)效价64判为阳性例数，64判为阴性例数。1.4 统计学处理 抗体效价先作对数转换处理，微柱凝胶法分别与抗球蛋白法、凝聚胺法的效价比较采用配对t检验；阳性例数百分率比较采用2检验。2 结果2.1 三种方法测定102标本效价均数比较 微柱凝胶法、抗球蛋白法、凝聚胺法检测效价的几何均值分别为85.7、37.6、43.4,前者比后两者分别高2.28和1.97倍。微柱凝胶法测定102例标本效价均值明显高于抗球蛋白法和凝聚胺法,并有显著性差异，t值分别为21.08、19.53,P值均小于0.001,结果见表1。表1 三种方法测定102例标本IgG抗A(B)效价分布方法 （略） 2.2 微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法相关性分析 微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法检测结果均有显著相关性,相关系数(r)分别为0.9035和0.8901。回归方程式分别为Y=0.5095+0.9039X、0.3074+0.9931X。以经典抗球蛋白法IgG抗A(B)效价64为临床意义决定值，根据回归方程计算，微柱凝胶法临床意义决定值的效价为138。2.3 三种方法阳性检出率比较 以临床上有意义的IgG抗A(B)效价64判为阳性例数，微柱凝胶法、抗球蛋白法、凝聚胺法，检出IgG抗A(B)阳性例数及百分率分别为78(76.5%)、38(37.3%)、45(44.1%)。微柱凝胶法检测IgG抗A(B)阳性率明显高于比抗球蛋白法和凝聚胺法，有显著性差异，2 分别为31.97和22.29，P0.001。说明微柱凝胶法此种方法经过我们病理科的运行，证明这是一种简便可行的方法，既可以节省资金又增加了报告管理的灵活性，比较适用于中小医院病理科使用。检测IgG抗A(B)效价灵敏性较抗球蛋白法和凝聚胺法高。3 讨论ABO系统引起的 HDN是由于母亲体内存在着与胎儿不相配合的IgG性质血型抗体引起的同种被动免疫性疾病。一般认为只有当抗体效价64时，才有可能使新生儿发生溶血病。临床上通常以1：64作为临界值，如果母亲血清中IgG抗A(B)效价128时，提示婴儿很可能受害；如果母亲血清中IgG抗A(B)效价512时，几乎100%受害，必需进行临床预防性治疗3-4。因此，选择一种灵敏、准确、相对稳定且重复性好的IgG抗A(B)效价测定方法，很有必要。检测IgG抗A(B)效价最常用的是抗球蛋白法(或称试管法)，但它需要水浴、致敏、洗涤、显微镜观察结果，因此受温度、操作者等其他因素的影响较大，而且费时，限制了其在血清学方面的应用。凝聚胺法大大缩短了抗原抗体孵育时间,又不需反复洗涤红细胞，不需特殊仪器，因此很快得到普及。我们的实验结果表明,该方法在检测IgG抗体的灵敏度上与抗球蛋白试验无明显差异,与向东等报道一致。其缺点是对操作者要求较高,必须正确振摇细胞扣,严格按照规定时间判定结果,否则易造成假阴性。微柱凝胶法在国外已成为常规的红细胞血型血清学检测方法6。本文结果显示,检测红细胞血型IgG抗A(B)效价实验结果中,微柱凝胶法与抗球蛋白法、凝聚胺法高度相关,相关系数(r)分别为0.8901和0.9034;效价均值比抗球蛋白法、凝聚胺法高2.28和1.97倍,有显著差异,P均0.001；三种方法临床有意义阳性例数(效价64) 百分率分别为76.5%、37.3%、44.1%,微柱凝胶法明显高于抗球蛋白法和凝聚胺法。说明微柱凝胶法检测灵敏度高,且方法自动化，实验操作简便,避免了不同操作者带来的误差,结果可在一定时间内长期保存等优点。由于微柱凝胶法具有更高的检测灵敏度，若以抗球蛋白法的诊断标准，则将会导致对病情的过高评估，所以凝胶微柱法的决定值应更高。根据本文的回归方程计算，微柱凝胶法检测IgG 抗A(B)的决定值为1:138。由于我们缺乏抗体效价和新生儿溶血病关系的临床资料，这仅仅只是理论上的推算。实验室应进一步评估凝胶微柱分析抗体效价和HDN 的相关关系，建立该法的决定效价，以便这一灵敏、简便、快速、直观、易于标准化的技术得到更广泛的应用。参 考 文 献1蒋文妹.新生儿ABO溶血病发生率与孕妇抗体效价关系的探讨J.中国输血杂志,1996,9(1):20-222高峰.输血与输血技术M.北京：人民卫生出版社，2003：993胡丽华，余忠清，曹奎杰，等.黄疸患儿ABO、Rh新生儿溶血病发病率调查J.中国输血杂志，2000，13（2）：1204魏亚明，欧英贤.红细胞免疫抗体检查在输血及产前