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文档简介

IC50 曲线的测定IC50即半抑制率， 标准曲线是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度，半数抑制越低，说明药物对细胞的毒性越高。实验操作步骤如下：1. 细胞准备：A 细胞状态检测：从培养箱中取出细胞，显微镜下观察。状态描述：观察结果，细胞汇合度：B 细胞处理：将细胞培养基吸出后，加入2ml PBS缓冲液洗一次，加入1ml 0.25% Trypsin-EDTA，放入培养箱中静置数分钟，直至细胞完全离壁悬浮，加入5ml 含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活，混匀后液体转移至15ml离心管，1000rpm 离心3min，弃去液体。C 细胞计数：于15ml离心管中加入1ml 含10%FBS的培养基 (无抗生素)，充分混匀。取40ul计数，公式如下：细胞浓度（数/ml）=（4大方格细胞数之和/4）104稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表，根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。细胞 数/孔 起始浓度(/ml)所需体积(ml)需20%FBS DMEM (ml)总体积终浓度(/ml)细胞株名D 稀释细胞2. 将稀释好的细胞用排枪加至96 / 384孔板：置于培养箱37 5%CO2条件下培养24小时，待细胞贴壁后加药。3. 药物稀释：将药物进行3倍倍比稀释。4. 将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上，37 5%CO2培养箱培养72h。5. 荧光素酶检测：将Celltiter-Glo与ddH20 以1:1混合，加入细胞板（96板：20ul/well; 384板：10ul/well），静置10min后，TECAN infinite F200酶标仪读值。6. 分析数据，绘制IC50曲线，寻找IC30,IC50等值。7. 验证IC50:根据IC50曲线找出IC50理论值，分别取1/2 倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。附录：Materials for ExperimentNameCorporation96-well plateCorning384-well plateGreinerCentrifugeTube (15ml)BD FalconPipets(10ml)GreinerT-25 FlaskCorningTips,EP TubeAxygen, MatrixReagents for ExperimentNameCorporationFBSExcellDPBSHyclone0.25%Trypsin-EDTAGIBCOMediumHycloneCell-Titer GloPromegaInstruments for ExperimentNameModelCorporationInverted MicroscopeTS100NikonCO2 IncubatorBB16UVHeraeusBechtopZHJH-1109ZHCHENGCentrifuge52
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